Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.3.5Phương pháp đo kích thước bào tử nấm và đếm tỷ lệ nảy mầm của bào tử
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.5Phương pháp đo kích thước bào tử nấm và đếm tỷ lệ nảy mầm của bào tử
bào tử nấm
Áp dụng phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật của Viện Bảo vệ thực vật (1999).
- Cấy nấm lên đĩa petri chứa môi trường PSA, sau khi cấy 14 ngày, rửa sạch sợi nấm trên bề mặt đĩa petri bằng chổi lông vô trùng và nước cất. Để khô sau đó đặt đĩa vào trong tủ để 12 giờ sáng, 12 giờ tối trong 3 ngày để nấm sinh bào tử. Sau đó dùng 20 ml nước cất có Tween 20 tỷ lệ 1/10.000 để rửa và lọc lấy bào tử cho vào 1 hộp petri, lấy 1 giọt dung dịch bào tử nhỏ lên lam đậy lamen lại đưa lên kính hiển vi quan sát.
- Đo kích thước bào tử nấm: dùng thước đo kính hiển vi quang học, thước có 10 vạch lớn, mỗi vạch lớn có 10 vạch nhỏ như vậy tổng có 100 vạch nhỏ. Đo ở vật kính 40, mỗi vạch nhỏ của thước bằng 2,5 µm. Đếm số vạch rồi nhân lên với 2,5 là ra kích thước cần đo. Mỗi mẫu phân lập đo 30 bào tử.
- Đếm tỷ lệ nảy mầm của bào tử nấm: Mầm dài bằng 2/3 độ dài bào tử thì được tính là nảy mầm (theo Plant Phytopathology), đếm 5 quang trường, mỗi quang trường 15 – 20 bảo tử.
- Xử lý số liệu theo chương trình Excel. 3.3.6. Phương pháp lây bệnh nhân tạo
* Chuẩn bị cây mạ
- Ngâm hạt lúa giống cho này mầm, đem gieo vào các khay nhựa có bùn. Mỗi khay gieo 4 giống, mỗi giống gieo 2 hàng, mỗi hàng 10 hạt. Sau đó chờ vài ngày cho cây bám rễ và mọc thành cây tăm ta đem ngâm vào bể, hoặc chú ý tưới nước, chăm sóc cho cây phát triển bình thường. Sau khi gieo 20-22 ngày (cây có khoảng 4 lá thật) thì phun dung dịch bào tử để lây bệnh.
* Chuẩn bị nguồn bào tử để lây nhiễm
- Lấy nấm từ ống nghiệm lưu giữ nguồn đã phân lập cấy lên đĩa petri chứa môi trường PSA, mỗi mẫu phân lập cấy 2 đĩa, mỗi đĩa cấy 3 điểm sau đó đặt đĩa đã cấy vào tử định ôn 28oC sau 2 tuần, lúc này sợi nấm sẽ mọc kín môi trường.
- Lấy đĩa nấm ra khỏi tủ, dùng bình tia phun nước cất vào, dùng chổi lông quét đi, quét lại nhiều lần trên bề mặt đĩa, dùng bình tia rửa hết sợi nấm, vẩy chổi cho hết nước quét khô mặt thạch (mỗi mẫu phân lập dùng một chổi, rửa xong luộc chổi trong nước sôi).
- Đặt đĩa nấm trong tủ 12 giờ sáng, 12 giờ tối sau 3 ngày để bào tử hình thành. Dùng 20ml nước vô trùng có pha Tween 20 tỷ lệ 1/10.000 để rửa và lọc lấy bào tử cho một đĩa petri. Lấy 1 giọt dung dịch bào tử đã rửa ở trên nhỏ lên lam kính soi dưới kính hiển vi. Đếm số bào tử trên quang trường 10X. Điều chỉnh dung dịch bào tử sao cho có khoảng 30-50 bào tử trên quang trường tương đương với 105 bào tử/ml, đếm 5 quang trường 10X.
* Lây nhiễm
Sử dụng bình phun cầm tay loại dung tích 0,5 lít để phung dung dịch lên lúa, phun ướt đều các lá lúa. Sau đó đặt khay lúa trong tủ lây nhiễm, phun và giữ ẩm liên tục trong 20 giờ (ẩm trên 90%), sau đó đem lúa đã lây nhiễm ra khỏi tủ ẩm đặt dưới ánh sáng tán xạ, tưới nước đầy đủ để lúa vẫn tiếp tục phát triển.
* Đánh giá
Quan sát thời gian (ngày) kể từ khi lây nhiễm tới khi xuất hiện vết bệnh đầu tiên.
Sau 7 ngày lây nhiễm tiến hành đánh giá phản ứng của các giống lúa theo thang phân cấp của Kato, 1993.
Cấp 0: không có vết bệnh, kháng cao (HR)
Cấp 1: vết bệnh là một chấm nhỏ bằng đầu kim, kháng (R) Cấp 2: Vết bệnh to hơn màu nâu nhạt đến nâu tối, kháng (MR) Cấp 3: Vết bệnh to hơn màu xám ở giữa vết bệnh, nhiễm (S)
Cấp 4: Vết bệnh điển hình (hình thoi có màu xám ở giữa), nhiễm nặng (HS)
Cấp 0, 1, 2: kháng bệnh Cấp 3, 4: nhiễm bệnh
3.3.7. Phương pháp xác định mã số chủng sinh lý nấm P. oryzae
Sau khi lây bệnh nhân tạo trên 12 giống lúa Nhật Bản, các giống có mức
nhiễm S được dùng để tính mã số chủng sinh lý nấm P. oryzae bằng cách hàng
trăm cộng với nhau, hàng chục cộng với nhau, hàng đơn vị cộng với nhau và hàng thập phân cộng với nhau.
3.3.8. Phương pháp xác định hiệu lực của thuốc
3.3.8.1. Phương pháp xác định hiệu lực của thuốc Amistar top 325 SC trong phòng thí nghiệm
CT1: Thuốc Amistar top 325SC nồng độ 0.01%; CT2: Thuốc Amistar top 325SC nồng độ 0.005%; CT3: Đối chứng (dùng nước cất vô trùng).
Tiến hành nhắc lại 3 lần với mỗi công thức. Quan sát hiệu lực của thuốc ở các nồng độ khác nhau và đưa ra kết luận.
Chỉ tiêu theo dõi: đo đường kính tản nấm trong vòng 2, 4, 6, 8, 10 ngày sau cấy của các công thức.
Hiệu lực ức chế thuốc trong phòng thí nghiệm được tính theo công thức Abbott: C - T
HLĐK (%) = --- x 100 C
Trong đó: C: đường kính tản nấm ở công thức đối chứng ;
T: đường kính tản nấm ở công thức có xử lý thuốc.
3.3.8.2. Phương pháp đánh giá hiệu lực của thuốc Amistar top 325 SC trong nhà lưới
- Gieo giống Q5 trên khay nhựa (cách ngâm ủ mạ tương tự phương pháp lây bệnh nhân tạo), mỗi khay gieo 3 hàng đôi, mỗi hàng 10 hạt.
- Khi cây có khoảng 4 lá thật tiến hành 2 thí nghiệm: thí nghiệm phun thuốc trước 1 ngày sau đó lây bệnh và thí nghiệm lây bệnh trước 1 ngày sau đó phun thuốc.
- Pha thuốc Amistar top 325SC với 3 nồng độ: 0,01%; 0,015% và 0,02%. - Điều tra tỷ lệ bệnh, chỉ số bệnh sau phun 7 ngày.
Đánh giá hiệu lực của thuốc bằng công thức Abbott C - T
HLĐK (%) = --- x 100 C
Trong đó: C: chỉ số bệnh ở công thức đối chứng sau 7 ngày lây bệnh ; T: chỉ số bệnh ở công thức có xử lý thuốc sau 7 ngày lây bệnh.
3.3.8.3. Phương pháp đánh giá hiệu lực của thuốc ngoài đồng ruộng đối với bệnh đạo ôn lá trên giống TBR225
Áp dụng quy phạm khảo nghiệm trên đổng ruộng hiệu lực phòng trừ bệnh đạo ôn hại lúa của các thuốc trừ nấm. Tiêu chuẩn ngành 10TCN 157-92.
- Bố trí thí nghiệm 4 công thức
+ Công thức 1: Amistartop 325SC 500 ml/ha; + Công thức 2: Hibim 31WP 500 g/ha;
+ Công thức 3: Vista 72.5WP 500 g/ha; + Công thức 4: đối chứng phun nước lã.
- Mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại có diện tích ô 50 m2. - Thời gian điều tra: trước phun 1 ngày và sau phun 5, 10, 15 ngày.
- Điểm điều tra: mỗi lần nhắc lại điều tra 5 điểm cố định, mỗi điểm 10 cây liên tiếp, mỗi cây điều tra toàn bộ số lá của 1 dảnh ngẫu nhiên.
- Chỉ tiêu điều tra, cách tính tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh giống điều tra đồng ruộng.
- Hiệu lực của thuốc được tính theo công thức Henderson Tilton:
Hiệu lực (%) = (1 )x100
CaxTb TaxCb
Trong đó: Ta: Chỉ số bệnh ở ô xử lý thuốc sau khi phun;
Tb: Chỉ số bệnh ở ô xử lý thuốc trước khi phun;
Ca: Chỉ số bệnh ở ô đối chứng sau khi phun;
Cb: Chỉ số bệnh ở ô đối chứng trước khi phun.
3.3.9. Phương pháp xử lý thống kê
PHẦN 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1. THÀNH PHẦN BỆNH HẠI LÚA TẠI HUYỆN CHƯƠNG MỸ - HÀ NỘI Trên lúa có thành phần bệnh rất đa dạng, tùy vào đặc điểm từng địa Trên lúa có thành phần bệnh rất đa dạng, tùy vào đặc điểm từng địa phương, cơ cấu giống và biện pháp kỹ thuật mà thành phần và mức độ hại của bệnh ở các vùng khác nhau. Qua điều tra chúng tôi nhận thấy tại vụ lúa xuân năm 2016, huyện Chương mỹ có một số đối tượng bệnh hại chính như sau:
Bảng 4.1. Thành phần bệnh hại lúa vụ xuân tại huyện Chương Mỹ - Hà Nội STT STT
Tên bệnh
Giai đoạn cây bị bệnh Bộ phận bị hại Mức độ gây hại Tên Vệt
Nam Tên khoa học
1 Đạo ôn Pyricularia oryzae Cav. Đẻ nhánh-chín Thân, lá,
bông ++
2 Đốm nâu Curvulariaoryzae Mạ-chín Lá +
3 Khô vằn Rhizoctonia solani Làm đòng-chín Thân, lá,
bông ++ 4 Bạc lá Xanthomonas campestris pv. oryzae Đẻ nhánh-chín Lá + 5 Đốm sọc vi khuẩn Xanthomonas campestris pv. oryzicola Đẻ nhánh-chín Lá +++ 6 Lem lép hạt Chưa xác định Chín Hạt + Ghi chú: + bệnh nhẹ TLB<5%; ++bệnh trung bình TLB 5-10%; +++bệnh nặng TLB >10%
Qua bảng 4.1 cho thấy: thành phần bệnh hại lúa xuân tại huyện Chương Mỹ rất đa dạng; giai đoạn bị bệnh, bộ phận bị hại và mức độ gây hại giữa các bệnh là khác nhau. Bệnh xuất hiện từ khi lúa ở giai đoạn mạ cho đến khi thu hoạch, bệnh gây hại trên khắp các bộ phận của cây từ lá, thân, bông,... chủ yếu là bệnh gây hại nhiều trên lá từ giai đoạn đẻ nhánh đến thu hoạch.
Bệnh gây hại nặng điển hình là bệnh đốm sọc vi khuẩn, nếu bệnh xuất hiện khi cây lúa ở giai đoạn đẻ nhánh khi mà bộ lá lúa có khả năng đền bù cao thì ít gây ảnh hưởng đến năng suất. Khi lúa bước vào giai đoạn trỗ đến chín, lúc này nếu bệnh gây hại sẽ làm mất diện tích quang hợp của cây, gây ảnh hưởng lớn đến năng suất thậm trí cây không cho năng suất.
Tiếp đến là bệnh khô vằn và bệnh đạo ôn. Bệnh khô vằn xuất hiện xuất hiện muộn hơn bệnh đạo ôn nhưng bệnh lại gây hại trên diện rộng và tỷ lệ bệnh cao hơn. Tuy nhiên thiệt hại năng suất do bệnh khô vằn gây ra ít nghiêm trọng hơn so với bệnh đạo ôn. Bệnh đạo ôn lá nếu không kiểm soát tốt sẽ là nguồn bệnh nguy hiểm tấn công vào cổ bông lúa, cắt đứt con đường vận chuyển dinh dưỡng từ thân lên nuôi hạt làm mất hoàn toàn hoặc gây giảm năng suất nghiêm trọng.
Các bệnh đốm nâu, bạc lá và lem lép hạt gây hại nhẹ.
4.2. KẾT QUẢ ĐIỀU TRA TÌNH HÌNH BỆNH ĐẠO ÔN TRÊN LÚA VỤ XUÂN 2016 TẠI HUYỆN CHƯƠNG MỸ - HÀ NỘI XUÂN 2016 TẠI HUYỆN CHƯƠNG MỸ - HÀ NỘI
4.2.1. Diễn biến bệnh đạo ôn trên một số giống trồng lúa trồng đại trà vụ xuân năm 2016 tại huyện Chương Mỹ - Hà Nội xuân năm 2016 tại huyện Chương Mỹ - Hà Nội
Trong vụ xuân 2016, trên địa bàn huyện Chương Mỹ các giống lúa được gieo trồng phổ biến là TBR225, Nếp Lang liêu, Bắc thơm, Q5, Khang dân, Thiên ưu, TH3-5,... Chúng tôi đã tiến hành điều tra, theo dõi sự phát sinh, phát triển của bệnh đạo ôn ngay từ giai đoạn mạ đến chín sáp. Kết quả được trình bày tại bảng 4.2.
Qua bảng 4.2 điều tra 8 giống lúa cho thấy:
Vụ Xuân năm 2016, bệnh đạo ôn bắt đầu phát sinh gây hại ở giai đoạn lúa đẻ nhánh trên các giống Khang dân, Bắc thơm, Nếp thơm 16, nếp Lang liêu và TBR225; Sang giai đoạn lúa đứng cái bệnh tiếp tục phát triển và có thêm giống Q5 bị bệnh. Giai đoạn lúa làm đòng là giai đoạn bệnh hại nặng nhất trên các giống lúa.
Bệnh hại nặng nhất trên giống nếp Lang liêu, ở giai đoạn làm đòng tỷ lệ bệnh là 15,8%, chỉ số bệnh là 4,2%; giống bị hại nặng tiếp theo là Bắc thơm có tỷ lệ bệnh là 15,4%, chỉ số bệnh là 3,5%; giống Nếp thơm 16 có tỷ lệ bệnh 7 và chỉ số bệnh lần lượt là 14,1% và 3,6%; đặc biệt trên giống nếp Lang liêu có tỷ lệ bệnh là 12,3% (thấp hơn 2 giống Bắc thơm và Nếp thơm 16) nhưng chỉ số bệnh lại là 3,6% (bằng giống Nếp thơm 16 và cao hơn giống Bắc thơm). 2 giống Thiên ưu, TH3-5 không bị bệnh.
Bảng 4.2. Tình hình phát sinh, phát triển bệnh đạo ôn trên một số giống trồng trong đại trà vụ xuân năm 2016 tại huyện Chương Mỹ - Hà Nội
Giai đoạn cây
lúa
Q5 Khang dân Bắc thơm 7 Nếp thơm
16
Nếp lang
liêu TBR225 Thiên ưu TH3-5
TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) Mạ - - - - - - - - - - - - - - - - Đẻ nhánh - - 3,8 0,5 4,5 0,8 3,7 0,5 5,3 1,3 3,6 0,4 - - - - Đứng cái 4,5 0,6 5,2 1,4 12,8 2,7 11,5 2,8 12,6 3,1 9,5 2,2 - - - - Làm đòng 5,4 2,9 2,1 1,2 13,3 3,4 12,8 4,1 13,5 4,2 15,6 4,1, - - - - Trước trỗ 5,9 1,5 4,6 2,5 15,4 3,5 14,1 3,6 15,8 4,4 12,3 3,6 - - - - Chín sáp 2,7 1,3 3,8 0,5 10,7 5,8 11,3 6,0 13,6 6,3 10,0 3,9 - - - -
4.2.2. Diễn biến của bệnh đạo ôn trên giống lúa Bắc thơm và Nếp thơm 16 canh tác hữu cơ trong vụ xuân năm 2016 tại xã Đồng Phú – Chương Mỹ - canh tác hữu cơ trong vụ xuân năm 2016 tại xã Đồng Phú – Chương Mỹ - Hà Nội
Xã Đồng Phú – Chương Mỹ là xã đi đầu trong huyện về canh tác lúa hữu cơ. Chương trình này được bắt đầu thực hiện từ năm 2012, thời gian đầu chỉ áp dụng trên quy mô diện tích nhỏ nhưng hiện nay do người dân nhận thức được những ưu điểm vượt trội trong canh tác lúa hữu cơ nên quy mô diện tích ngày càng nhân rộng. Vụ xuân năm 2016 toàn xã Đồng Phú có 70 ha lúa được trồng theo mô hình này, chủ yếu là các giống nếp và các giống lúa chất lượng.
Trung bình mỗi sào lúa người nông dân bón lót 200 kg phân gà hoặc phân chim cút được ủ với vôi bột. Qua nhiều năm áp dụng mô hình này cho thấy, khu đồng trồng lúa hữu cơ chỉ xuất hiện sâu bệnh hại ở mức độ nhẹ và chưa từng phải sử dụng thuốc BVTV. Năng suất trung bình vụ xuân đạt khoảng 150 kg/sào, vụ mùa đạt khoảng 105 kg/sào.
Để tìm hiều sự phát sinh gây hại của bệnh đạo ôn trên lúa canh tác hữu cơ, chúng tôi tiến hành điều tra theo dõi bệnh trên 2 giống được trồng chủ yếu là Bắc thơm 7 và Nếp thơm 16 (bảng 4.3).
Bảng 4.3. Diễn biến của bệnh đạo ôn trên giống lúa Bắc thơm 7 và Nếp thơm 16 canh tác hữu cơ trong vụ Xuân năm 2016 tại xã Đồng Phú –
Chương Mỹ - Hà Nội Ngày điều
tra
Giai đoạn sinh trưởng Bắc thơm 7 Nếp thơm 16 TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 08/2 Mạ 14/3 Đẻ nhánh - - - - 18/4 Làm đòng 6,4 0,7 7,2 0,9 25/4 Làm đòng 7,3 1,7 9,3 1,8 02/5 Làm đòng 9,4 1,8 10,5 1,9 09/5 Trước trỗ 10,6 2,2 12,1 2,4 16/5 Trỗ 2,7 0,4 3,0 0,6 23/5 Sau trỗ 3,3 1,3 4,0 1,5 30/5 Chín sáp 4,7 2,0 5,3 2,8
Bệnh đạo ôn phát sinh gây hại muộn trên cả 2 giống lúa được canh tác hữu cơ (giai đoạn lúa làm đòng) với tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh thấp. Bệnh tiếp tục phát sinh gây hại ở các giai đoạn sinh trưởng tiếp theo nhưng mức độ bệnh tăng chậm.
Bệnh nặng nhất ở giai đoạn lúa trước trỗ, trên giống Nếp thơm 16 bệnh hại nặng hơn với tỷ lệ bệnh là 12,1% và chỉ số bệnh là 2,4%; giống Bắc thơm 7 tý lệ bệnh là 10,6%, chỉ số bệnh là 2,2%, có thể thấy rằng chỉ số bệnh ở cả 2 giống đều ở mức thấp. Đến giai đoạn lúa chín sáp TLB chỉ còn 4,7% trên giống Bắc thơm 7; 5, và 3% trên giống Nếp thơm 16; CSB lần lượt là 2,0% và 2,8%.
So với sự phát sinh phát trưởng của bệnh đạo ôn của 2 giống lúa trên được trồng đại trà thì lúa trồng hữu cơ có mức độ bệnh thấp hơn rõ rệt. Ở bảng 4.2 ta thấy tỷ lệ bệnh của giống Bắc thơm 7 giai đoạn trước trỗ lên đến 15,4% và 3,5%; ở giống Nếp thơm 16 lên đến 14,1% và 3,6%.
4.3. NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ SINH THÁI KỸ THUẬT ĐẾN BỆNH ĐẠO ÔN