Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.3. Nghiên cứu tạo cây in vitro hoàn chỉnh
4.3.1. Ảnh hưởng của iba đến tạo cây in vitro hoàn chỉnh
Auxin có vai trị thúc đẩy quá trình hình thành rễ. Ở các nồng độ Auxin khác nhau thì phản ứng của rễ cũng khác nhau. Thực hiện cấy các chồi trên môi trường MS có bổ sung với các nồng độ khác nhau của IBA (0 - 2 mg/l) cho cảm ứng của rễ.
có tác dụng tích cực đến sự hình thành rễ của cây, chiều cao của cây so với môi trường không bổ sung IBA.
Qua số liệu bảng 4.8 cho thấy: nồng độ IBA khác nhau thì các chỉ tiêu về chiều cao cây, số lá và số rễ ở các công thức là khác nhau.
Các công thức thí nghiệm cho tỷ lệ ra rễ đạt 100%. Trên môi trường không bổ sung IBA rễ vẫn hình thành, điều này chứng tỏ Auxin nội sinh được hình thành ở chồi và di chuyển xuống dưới gốc để cảm ứng tạo rễ. Kết quả này hoàn toàn giống với nghiên cứu của (Rajasekharan et al., 2016) về việc nuôi cấy in vitro cây Sâm cau trên môi trường MS có bổ sung 8,87 µM BA. Điều này chứng
tỏ, cả 2 chất điều hịa sinh trưởng IBA và BA đều có tác dụng tích cực lên khả năng ra rễ của cây Sâm cau in vitro.
Khi bổ sung nồng độ IBA từ 0,5 - 1,5 mg/l thì các chỉ tiêu về chiều cao cây, số lá, số rễ và chiều dài rễ đều có giá trị cao hơn khi chưa bổ sung IBA.
Bảng 4.8. Ảnh hưởng của IBA đến khả năng tạo rễ và sinh trưởng của chồi Sâm cau in vitro (6 tuần nuôi cấy)
Nồng độ IBA (mg/l) Tỷ lệ chồi ra rễ (%) Chiều cao cây (cm) Số lá (lá) Số rễ (rễ) Chiều dài rễ (cm) Chất lượng rễ 0 (Đ/C) 100 7,5c 6,3c 4,1e 2,7d Rễ ngắn 0,5 100 11,8a 7,2a 10,3a 5,1a Rễ khỏe, trắng, mập và
đều, nhiều lông hút
1,0 100 9,6b 7,0ab 8,2b 4,3b Rễ khỏe, rễ trắng và nhiều lông hút 1,5 100 7,8c 6,5bc 7,1c 3,4c Đầu rễ trắng và đều, nhiều lông hút 2,0 100 6,2d 5,0c 5,6d 2,8d Rễ ngắn, mảnh CV% 2,1 5,3 5,0 3,7 LSD0.05 0,33 0,61 0,65 0,25
Ghi chú: Nền môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, PH 5,5
0,5; 1,0 mg/l cho chiều cao cây lớn hơn so với công thức đối chứng. Khi bổ sung 1,5 mg/l IBA cho chiều cao cây tương đương với công thức đối chứng. Tiếp tục tăng nồng độ IBA lên 2,0 mg/l, chiều cao cây đạt thấp hơn so với công thức đối chứng. Các kết quả này có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95%.
Số lá dao động từ 5,0 - 7,2 lá, khi bổ sung IBA với nồng độ 0,5; 1,0 mg/l cho số lá lớn hơn so với công thức đối chứng. Các cơng thức cịn lại có số lá tương đương với công thức đối chứng. Kết quả thực hiện có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy α = 0,05.
Số rễ dao động từ 4,1 - 10,3 lá, khi bổ sung IBA với nồng độ 0,5 - 2,0 mg/l đều cho số rễ lớn hơn so với công thức đối chứng. Kết quả thực hiện có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy 95%.
Chiều dài rễ dao động từ 2,7 - 5,1 cm, khi bổ sung IBA với nồng độ 0,5 - 1,5 mg/l đều cho chiều dài rễ lớn hơn so với công thức đối chứng. Cơng thức cịn lại có chiều dài rễ tương đương công thức đối chứng. Kết quả thực hiện có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy α = 0,05.
Tại nồng độ 0,5 mg/l IBA bổ sung vào môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, sau 6 tuần ni cấy cây đạt các chỉ tiêu sinh trưởng tốt nhất, chiều cao cây đạt 11,8 cm, số lá đạt 7,2 lá/cây, số rễ đạt 10,3 rễ/cây, chiều dài rễ đạt 5,1 cm. Tiếp tục tăng nồng độ IBA từ 1 - 2 mg/l, có sự ức chế kéo dài rễ và giảm số lượng rễ tạo thành. Tại nồng độ 2,0 mg/l IBA cho các chỉ tiêu sinh trưởng kém nhất, thấp hơn cả công thức đối chứng (không bổ sung IBA), chiều cao cây chỉ đạt 6,2 cm, số lá đạt 5,0 lá, số rễ đạt 5,6 rễ và chiều dài rễ là 2,8 cm.
Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của (Zuraida et al., 2014) khi sử dụng IBA ở nồng độ 0,5 mg/l cho quá trình ra rễ in vitro loài Melicope lunuankenda.
Về chất lượng rễ cho thấy: Cơng thức có bổ sung IBA ở nồng độ 0,5 - 1,5 mg/l cho chất lượng rễ rất tốt. Và tốt nhất ở hàm lượng 0,5 mg/l IBA, tại hàm lượng này cây sinh trưởng phát triển tốt, rễ khỏe, trắng, mập đều và nhiều lông hút, điều này rất thuận lợi cho sự phát triển của chồi và rễ ở giai đoạn vườn ươm. Ở công thức không bổ sung IBA và bổ sung IBA vớ nồng độ cao (2,0 mg/l) cho chất lượng rễ kém, các rễ hình thành có dộ dài ngắn, rễ mảnh.
Hình 4.10. Ảnh hưởng của IBA đến tạo cây in vitro hoàn chỉnh
Ghi chú:
a) CT1: 0 mg/l IBA b) CT2: 0,5 mg/l IBA c) CT3: 1,0 mg/l IBA d) CT4: 1,5 mg/l IBA e) CT2: 2,0 mg/l IBA
Như vậy: Ở cơng thức 2 có bổ sung 0,5 mg/l IBA vào mơi trường (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, PH 5,5) là thích hợp nhất cho sự sinh trưởng phát triển của chồi cây Sâm cau.
Hình 4.11. Cây in vitro hoàn chỉnh