Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.2. Phương pháp bố trí thí nghiệm
3.5.2.1. Nghiên cứu khử trùng và tạo vật liệu khởi đầu
Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng H2O2 và NaOCl tới tỷ lệ sống vô trùng của mẫu cấy
Bảng 3.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng H2O2 và NaOCl
Công thức
Thời gian và nồng độ xử lý nước oxy già (H2O2 )
Công thức Thời gian và nồng độ xử lý (NaOCl) CT1 15% H2O2+ 5 phút CT1 2% NaOCl + 5 phút CT2 15% H2O2+ 10 phút CT2 2% NaOCl + 10 phút CT3 15% H2O2+ 15 phút CT3 2% NaOCl + 15 phút CT4 15% H2O2+ 20 phút CT4 2% NaOCl + 20 phút CT5 15% H2O2+ 25 phút CT5 2% NaOCl + 25 phút
Thí nghiệm gồm 5 cơng thức được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi công thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 4 tuần ni cấy.
Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của chất chất kích thích sinh trưởng TDZ đến khả năng tạo vật liệu khởi đầu.
CT1 (Đ/C): Nền (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, pH 5,5)
CT2: Nền + 0,5 mg/l TDZ CT3: Nền + 1,0 mg/l TDZ CT4: Nền + 1,5 mg/l TDZ CT5: Nền + 2,0 mg/l TDZ
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi cơng thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 4 tuần nuôi cấy.
3.5.2.2. Nghiên cứu nhân nhanh chồi
Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng của tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng (TDZ + IBA) đến khả năng nhân nhanh chồi
CT1 (Đ/C): Nền (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ, pH 5,5)
CT3: Nền + 0,5 mg/l IBA CT4: Nền + 0,75 mg/l IBA CT5: Nền + 1,0 mg/l IBA
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi cơng thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 6 tuần nuôi cấy.
Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng của phloroglucinol (PG) đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm cau
CT1(Đ/C): Nền (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l IBA, pH 5,5)
CT2: 0,5mg/l PG CT3: 1,0 mg/l PG CT4: 1,5 mg/l PG CT5: 2,0 mg/l PG
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi cơng thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 6 tuần ni cấy.
Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng của AgNO3 đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm cau
CT1(Đ/C): Nền (MS + 30g/l đường + 200ml/l nước dừa + 5,5 g/l thạch + 1g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l IBA, pH 5,5).
CT2: 0, 5mg/l AgNO3 CT3: 1,0 mg/l AgNO3 CT4: 1,5 mg/l AgNO3 CT5: 2,0 mg/l AgNO3
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi cơng thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 6 tuần nuôi cấy.
Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng tảo Spirulina đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm cau
CT1(Đ/C): Nền (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l IBA + 1 mg/l AgNO3, pH 5,5).
CT2: Nền + 50 mg/l tảo Spirulina CT3: Nền + 100 mg/l tảo Spirulina CT4: Nền + 150 mg/l tảo Spirulina CT5: Nền + 200 mg/l tảo Spirulina
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi cơng thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 6 tuần nuôi cấy.
3.5.2.3. Nghiên cứu tạo cây in vitro hồn chỉnh
Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng của IBA đến tạo cây in vitro hoàn chỉnh
Khi các chồi có khoảng 2 - 3 lá thì chuyển sang giai đoạn tạo cây hồn chỉnh. CT1 (Đ/C): Nền (MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, pH 5,5)
CT2: Nền + 0,5 mg/l IBA CT3: Nền + 1,0 mg/l IBA CT4: Nền + 1,5 mg/l IBA CT5: Nền + 2,0 mg/l IBA
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD) với 3 lần nhắc lại, mỗi công thức cấy 5 bình, mỗi bình cấy 7 chồi, theo dõi sau 6 tuần nuôi cấy.
3.5.2.4. Nghiên cứu đưa cây Sâm cau in vitro ra vườn ươm
Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng của giá thể khác nhau đến sinh trưởng và phát triển của cây in vitro ngoài vườn ươm
CT1: Vụn xơ dừa
CT2: Vụn xơ dừa + trấu hun (50:50) CT3: Mùn rừng CT4: Mùn rừng + Vụn xơ dừa (70:30) - Sơ đồ bố trí thí nghiệm: CT1 CT2 CT3 CT4 CT3 CT1 CT4 CT2 CT4 CT3 CT2 CT1
Thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) với 3 lần nhắc lại. Mỗi cơng thức thí nghiệm 30 cây, 6 chậu/cơng thức, mỗi tuần theo dõi 1 lần, thời gian theo dõi 10 tuần. Các cây con khi trồng được tưới nước 1 - 2 lần/ngày tùy theo điều kiện thời tiết.
Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng một số loại phân bón qua lá đến sinh trưởng và phát triển của cây in vitro ngoài vườn ươm
CT1 (Đ/C): Nước lã CT2: B1 - Thái Lan CT3: Growmore Mỹ (30:10:10) CT4: Atonik 1.8 SL - Sơ đồ bố trí thí nghiệm: CT2 CT4 CT1 CT3 CT3 CT1 CT4 CT2 CT4 CT2 CT3 CT1
Thí nghiệm tiến hành với 4 cơng thức, các cây được trồng trên đất mùn + vụn xơ dừa (70:30). Các cây được tưới giữ ẩm bằng nước lã trong 02 tuần. Sau 02 tuần sử dụng các loại chế phẩm dinh dưỡng, định kỳ 1tuần/lần theo từng cơng thức thí nghiệm. Phun ướt tồn bộ thân lá, lượng phun 0,5g/l. Các ngày khơng tưới phân bón đảm bảo ẩm độ của giá thể trồng bằng nước sạch.
Thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) với 3 lần nhắc lại. Mỗi cơng thức thí nghiệm 30 cây, 6 chậu/công thức, mỗi tuần theo dõi 1 lần, thời gian theo dõi 8 tuần sau trồng.