của mẫu cấy ban đầu
Từ phân tích trên nhận thấy nồng độ TDZ thích hợp nhất để bổ sung vào môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính, pH 5,5 với mục đích tạo chồi từ mẫu cấy ban đầu là 1,5 mg/l.
Kết quả này hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu của (Nguyễn Quang Thạch và cs., 2010) khi sử dụng TDZ ở nồng độ 1,5 mg/l có ảnh hưởng rất tốt tới khả năng nhân chồi và chất lượng chồi của Khoai môn sọ.
4.2. NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH CHỒI CÂY SÂM CAU
Giai đoạn nhân nhanh chồi là giai đoạn quan trọng để tạo ra một khối lượng lớn cây con in vitro từ mẫu cấy ban đầu trong một thời gian ngắn. Ở giai đoạn này sự sinh trưởng và phát triển của mô nuôi cấy phụ thuộc chặt chẽ vào điều kiện nuôi cấy (nhiệt độ và ánh sáng), môi trường nuôi cấy (thành phần dinh
dưỡng, chất điều tiết sinh trưởng và tỷ lệ giữa chúng). Tùy theo từng loại cây, có thể bổ sung vào môi trường nuôi cấy các chất điều tiết sinh trưởng với nồng độ và tỷ lệ thích hợp để có được hệ số nhân chồi và chất lượng chồi cao nhất.
Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, nhiều tác giả đã tổng kết rằng sự biệt hóa cơ quan thực vật in vitro là kết quả tác động qua lại giữa hai nhóm Auxin và Cytokinin. Tỷ lệ Auxin/Cytokinin có vai trị quan trọng trong sự biến hoá cơ quan và quyết định sự sinh trưởng và phát triển của cây. Tỷ lệ Auxin/Cytokinin cao sẽ kích thích sự ra rễ, trái lại sẽ đẩy mạnh sự biệt hóa chồi, ở tỷ lệ trung bình thì hình thành mơ sẹo. Nhiều nghiên cứu cho thấy tổ hợp giữa Auxin và Cytokinin hầu hết đều có hiệu quả tốt hơn so với việc sử dụng riêng lẻ Cytokinin trong môi trường nuôi cấy.
4.2.1. Ảnh hưởng của tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng (TDZ + IBA) đến khả năng nhân nhanh chồi cây Sâm cau năng nhân nhanh chồi cây Sâm cau
Để tăng số chồi chúng tôi không chỉ sử dụng TDZ một cách đơn lẻ mà phối hợp với IBA để tìm ra hệ số nhân chồi tối ưu. Trong thí nghiệm này, chúng tơi sử dụng nồng độ TDZ cho hệ số nhân chồi cao nhất ở nồng độ (1,5mg/l) sau đó kết hợp với IBA ở các nồng độ 0,25 mg/l; 0,50 mg/l; 0,75 mg/l; 1,0 mg/l, kết quả thí nghiệm được ghi ở bảng 4.4 dưới đây.
Trong nhân giống in vitro, nhiều loại cây trồng chỉ phù hợp với các chất
thuộc nhóm Cytokinin, nhưng có nhiều loại cây trồng khi kết hợp các chất điều hịa sinh trưởng giữa nhóm Cytokinin và Auxin thì nâng cao hiệu quả trong nhân giống. Để tìm hiểu ảnh hưởng của Auxin đến q trình nhân nhanh chồi có sự tương tác với TDZ, tiến hành bổ sung IBA với các nồng độ khác nhau vào môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + 1 g/l than hoạt tính.
Kết quả được trình bày ở bảng 4.4 và hình 4.5 cho thấy sự kết hợp giữa TDZ và IBA có ảnh hưởng tích cực lên q trình hình thành chồi và sinh trưởng của chồi cây. Khi nồng độ TDZ giữ nguyên ở mức 1,5 mg/l, bổ sung IBA với các nồng độ khác nhau thì số lượng chồi và số lá/chồi ở các cơng thức là khác nhau. IBA ở nồng độ 0,5 mg/l kết hợp với 1,5 mg/l TDZ là tốt nhất, với số chồi là 8 chồi/mẫu và 3,9 lá/cây. Chồi cây xanh và sinh trưởng tốt.
Chỉ tiêu số chồi: Khi nồng độ TDZ giữ nguyên ở mức 1,5 mg/l, số chồi dao động từ 4,9 - 8,0 chồi. Bổ sung IBA với nồng độ 0,25; 0,50; 0,75; 1,0 mg/l đều có số chồi cao hơn công thức đối chứng (khơng bổ sung IBA). Sự sai khác này có ý
nghĩa thống kê với mức độ tin cậy 95%.
Bảng 4.4. Ảnh hưởng của tổ hợp (TDZ + IBA) đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm cau (sau 6 tuần nuôi cấy).
Chất điều tiết sinh trưởng (mg/l)