L ỜI MỞ ĐẦU
3.3. Thu và tinh sạch bào tử vi khuẩn Bacillus tiềm năng
Bào tử vi khuẩn Bacillus được đánh giá có nhiều ưu điểm hơn các chủng probiotic khác khi ứng dụng trong chăn nuôi do có khả năng chống chịu nhiệt độ
cao (lên tới 95oC) của công nghệ sản xuất thức ăn chăn nuôi, sống sót tốt trong
điều kiện pH thấp của môi trường tiêu hóa vật nuôi [52,53], và mật độ (CFU/g) gần như không thay đổi trong quá trình bảo quản ở nhiệt độ thường. Chính vì vậy. ở nghiên cứu này các chủng vi khuẩn Bacillus sau khi được sàng lọc đáp ứng các điều kiện của một chủng probiotic sẽđược lên men để thu bào tử.
3.3.1. Khảo sát thời gian lên men chủng Bacillus trong môi trường
DSM đạt hiệu suất thu bào tử cao nhất
Chủng Bacillus tiềm năng được nghiên cứu khảo sát quá trình tạo bào tửở
các mức thời gian ủ DSM lần lượt là 24h, 48h, 60h, 72h và 96h. Kết quả thu
62
Bảng 3. 6: Khảo sát thời gian ủ DSM cho hiệu suất thu bào tử cao nhất chủng P5QN4 Thời gian Mật độ ban đầu t=0 (CFU/ml) Mật độ sau ủ DSM (CFU/ml) Mật độ dịch bào tử (CFU/ml) Hiệu suất (%) 24h 1,94.107 6,73.107 2,32. 107 94,09 48h 5,86. 107 3,91. 107 97,74 60h 5,88. 107 3,08. 107 96,80 72h 1,2. 108 2,59. 107 91,76 96h 8,55. 107 2,95. 107 97,26
Nhìn chung, phương pháp thu bào tử Bacillus bằng môi trường DSM cho thấy hiệu quả rất tốt khi hiệu suất ở cả 5 mốc thời gian ủDSM đều đạt trên 90%, so sánh mật độ dịch vi khuẩn tại thời điểm t = 0 (lúc này vi khuẩn vẫn tồn tại ở
dạng tếbào sinh dưỡng) với mật độ dịch bào tử thu được ta thấy gần như 100%
tếbào sinh dưỡng chuyển hóa thành dạng bào tửđiều này đúng với mục đích ban đầu của nghiên cứu khi lựa chọn phương pháp này thay vì các phương pháp tác động khắc nghiệt khác đểthu được hiệu suất tạo bào tử cao nhất. Khi mật độ tiếp giống ban đầu như nhau tại thời điểm t = 0 là 1,94.107 thì thời gian ủ 48h cho thấy hiệu suất bào tửthu được cao nhất ở mức 97,74% cũng như mật độ dịch bào tửthu được cao nhất đạt 3,91.107 CFU/ml, và cho thấy 48h là thời điểm tốt nhất
để ủ vi khuẩn thu bào tửBacillus
Điều này tương đồng với kết quả kiểm chứng khi thực hiện khảo sát với chủng P4QN11 ở 3 thời điểm 24h, 48h, 72h bằng phương nhuộm và đếm bào tử để ngoại suy ra mật độ dịch vi khuẩn sau nuôi DSM và mật độ dịch bào tử thu
được. Kết quảthu được cũng cho hiệu suất cao nhất khi nuôi ủ DSM 48h (Bảng 3.7) đạt mức 99,7%
63
Bảng 3. 7: Khảo sát thời gian ủ DSM cho hiệu suất thu bào tử cao nhất ở chủng P4QN11
24h 48h 72h
Hiệu suất tạo bào tử (%)
95,93 99,70 96,97