L ỜI MỞ ĐẦU
1.3 Thu nhận chế phẩm Bacillus dạng bào tử
1.3.1 Phương pháp kích thích vi khuẩn Bacillus tạo bào tử
Để kích thích vi khuẩn Bacillus tạo bào tử, cần đưa các tế bào sinh dưỡng của vi khuẩn này vào các môi trường nuôi cấy khắc nghiệt để vi khuẩn Bacillus
tạo bào tử [26], một sốcác phương pháp đã được thử nghiệm như:
+ Lên men trong môi trường cạn kiệt nguồn dinh dưỡng: bình thường để
có thểsinh trưởng phát triển thì môi trường nuôi cấy chủng vi khuẩn Bacillus cần có chứa các nguyên tốdinh dưỡng như: Cacbon, Nitơ, muối khoáng,… tuy nhiên khi môi trường không có các nguyên tố dinh dưỡng này mà chỉ có các muối vô
cơ, các tế bào sinh dưỡng sẽ nhận tín hiệu dần chuyển sang dạng bào tử. Môi
trường Difco sporulation media (DSM) được Nicholson và công sự nghiên cứu ra từ năm 1990 được xem làm môi trường tiêu chuẩn thích hợp nhất cho sự hình thành bào tử của vi khuẩn Bacillus [27].
+ Tác động bất lợi lên môi trường nuôi cấy: nhiệt độ cao (các tế bào sinh
dưỡng thường chỉ tồn tại được ở nhiệt độ dưới 80oC nên khi tác động nâng nhiệt
độmôi trường lên trên 80oC sẽ kích thích vi khuẩn Bacillus sinh bào tử), pH môi
trường chênh lệch so với pH tối ưu của mỗi chủng vi khuẩn gây ức chế hoạt động của tếbào sinh dưỡng, ngoài ra còn có thểtác động thay đổi hoạt độ nước, nồng
độ muối,…. Tuy nhiên do các tác động bất lợi này có khả năng tiêu diệt đi một
lượng tếbào sinh dưỡng chưa kịp chuyển sang dạng bào tử nên hiệu suất thu bào tử của phương pháp này tương đối thấp.
+ Bổ sung các khoáng chất trong môi trường dinh dưỡng: tăng tốc/mức độ
hình thành bào tử Mn2+, Mg2+, Zn2+, Ca2+ các ion này vừa gây bất hoạt trung tâm hoạt động của các enzyme gây bất hoạt enzyme ngăn chặn hoạt động sống của tế bào sinh dưỡng vừa là thành phần chính tạo nên các lớp màng của bào tử. Cũng như phương pháp trên, phương pháp này gây lên sự ức chế mạnh lên các tế bào
sinh dưỡng, phương pháp tương đối phức tạp, mật độ canh trường bào tử thu
16 Trong nghiên cứu này, nhằm mục đích thu được canh trường bào tử mật
độ cao, ổn định nên phương pháp nuôi chủng vi khuẩn Bacillus trong môi trường
nghèo dinh dưỡng DSM được lựa chọn.