- 12/2011: Bảo vệ luận án cấp cơ sở.
H ình hai đỉnh rõ rệt của albumin, globulin đã không còn trên điện di TKN-RCN, chỉ còn lại hình ảnh thuần nhất một đỉnh tương ứng với dải phân bố albumin trong khi định
lượng albumin chỉ còn một lượng nhỏ 2,8% - Điều này cho thấy F(ab’)2 chiếm tỷ lệ cao gần như tuyệt đối.
- Kết quả điện di protein huyết thanh ngựa thấy rất rõ hai đỉnh tương ứng hai dải phân bố của albumin và globulin huyết thanh. Kết quả điện di protein HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 chỉ thấy còn một đỉnh thuần nhất, tương ứng với dải phân bố của albumin huyết thanh (100%).
- Kết quả định lượng protein đã cho biết albumin chỉ có 1,4g (2,8%); lượng IgM, IgG, IgA là 2,141 g/l (4,3%). Như vậy, phần có trọng lượng phân tử thấp mà điện di chỉ ra trong khu vực điện di của albumin chính là phần của F(ab’)2.
- Kết quả định lượng albumin, globulin, IgM, IgG, IgA phù hợp với hình ảnh điện di protein. Đối chiếu với hình ảnh điện di protein huyết thanh ngựa cho
thấy HTKN-RCN F(ab’)2 được tinh chế có độ tinh khiết cao (≈ 93%).
Ảnh 3.7: Huyết thanh kháng nọc rắn cạp nia đa giá F(ab’)2 nghiên cứu sản xuất.
3.2. ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG HTKN-RCN ĐA GIÁ F(ab’)2:3.2.1. Kết quả kiểm định cơ sở: 3.2.1. Kết quả kiểm định cơ sở:
3.2.1.1. Thử nghiệm an toàn (Safety test):
Bảng 3.18. Kết quả thử nghiệm an toàn chung HTKN-RCN trên chuột lang.
TT Trọng Trọng lượng (gam) HTKN (ml)
Theo dõi chuột thí nghiệm Tăng trọng (gam) Hình thái Vận động Trọng lượng
Tuần 1 Tuần 2 Tuần 3
1 310 3,1 bt bt 320 325 340 +30
2 330 3,3 bt bt 343 350 355 +25
3 350 3,5 bt bt 358 363 370 +20
( bt: bình thường).
nặng 350 gam.
- Lượng HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 đã dùng cho tứng chuột thí nghiệm lần lượt là 3,1 ml; 3,3 ml; 3,5 ml.
- Cả ba chuột đều bình thường về hình thái, vận động sau khi được tiêm HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 nghiên cứu.
- Tăng trọng chuột thứ nhất trong ba tuần là 30 gam; chuột thứ hai là 25 gam, chuột thứ ba là 20 gam: cả ba chuột nghiên cứu đều tăng trọng, phát triển bình thường; không có chuột bị ốm, chết.
- Kết quả cho thấy HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 nghiên cứu đạt chỉ tiêu an toàn chung, không có độc tố bất thường.
3.2.1.2. Kết quả thử nghiệm chí nhiệt tố (Pyrogen test):
Bảng 3.19. Xác định chất gây sốt trong HTKN-RCN đa giá bán thành phẩm.
TT Trọng lượng (kg) Thể tích HTKNR (ml)
Nhiệt độ thỏ trước/sau khi tiêm
HTKN-RCN (oC) Nhiệt độ chênh lệch (oC) Trước tiêm Sau 1 giờ Sau 2 giờ Sau 3 giờ 1 2,8 2,8 39,3 39,6 39,8 39,3 + 0,5 2 2,8 2,8 39,4 39,7 39,8 39,4 + 0,4 3 3,0 3,0 39,6 39,8 39,9 39,6 + 0,3 - Thỏ thứ nhất và thỏ thứ hai nặng 2,8 kg; thỏ thứ ba nặng 3,0 kg. - Số lượng HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 tiêm cho thỏ thứ nhất là 2,8 ml. - Số lượng HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 tiêm cho thỏ thứ hai là 2,8 ml. - Số lượng HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 tiêm cho thỏ thứ ba là 3 ml.
thứ hai là 39,4 oC; thỏ thứ ba là 39,6 oC.
- Sau tiêm, thay đổi nhiệt độ trong ba giờ liên tiếp ở thỏ thứ nhất là 0,5 oC. - Sau tiêm, thay đổi nhiệt độ trong ba giờ liên tiếp ở thỏ thứ hai là 0,4 oC. - Sau tiêm, thay đổi nhiệt độ trong ba giờ liên tiếp ở thỏ thứ ba là 0,3oC. - Cộng dồn nhiệt độ thay đổi của cả 3 thỏ = 1,2 oC.
- Thay đổi nhiệt độ ba thỏ dưới 1,4oC; điều đó cho thấy HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 đạt tiêu chuẩn không có chất gây sốt.
3.2.1.3. Kết quả thử nghiệm vô khuẩn (Sterility test):
Bảng 3.20. Kết quả thử nghiệm vô khuẩn của HTKN-RCN đa giá F(ab’)2. Môi trường Sabouraud (37oC) Môi trường thạch Chocolate,
Thạch máu (20oC – 25oC) Lô
HTKN- RCN Ngày 3 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 3 Ngày 5 Ngày 7
Lô I Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính Lô II Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính Âm tính - Cấy khuẩn: cấy HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 trong môi trường thạch
chocolate và môi trường thạch máu sau 3 ngày, 5 ngày, 7 ngày đều không thấy mọc vi khuẩn.
- Cấy nấm: cấy HTKN-RCN đa giá F(ab’)2 trong môi trường Sabouraud sau 3 ngày, 7 ngày, 14 ngày thấy không mọc vi nấm.
3.2.1.1. Kết quả thử nghiệm xác định công hiệu (Potency test):
3.2.1.1.a. Xác định LD50 của nọc RCN đa giá :
TT Nồng độ nọc (µg/ml) Số nọc/ chuột (µg)
Theo dõi chuột thí nghiệm Tỷ lệ chuột chết (%) Chết Sống Tổng số 1 22,50 4,5 8 0 8 100,00 2 15,00 3,00 7 1 8 87,50 3 10,00 2,00 4 4 8 50,00 4 6,66 1,33 1 7 8 12,50 5 4,44 0,88 0 8 8 0,00 6 0 0 0 8 8 0,00
- Pha loãng nọc rắn cạp nia trong NaCl 0,9% với bậc pha loãng = 1,5.- Số chuột thí nghiệm = 8. - Số chuột thí nghiệm = 8.