5.1Rửa khay như hướng dẫn ở bước 3.4.
5.2Hòa tan hoàn toàn 1 viên cơ chất (substrate) trong 10ml dung dịch ñệm cơ
chất (substrate buffer). Dung dịch này gọi là dung dịch cơ chất.
Chú ý: dùng găng tay khi pha chếdung dịch cơ chất.
5.3Cho thêm 80µl dung dịch cơ chất vào mỗi giếng. Phải làm liên tục cho ñến hết số giếng có trong khay microtitre.
5.4Giữ khay trong ñiều kiện nhiệt ñộ phòng khoảng 30-60 phút ñể phản ứng xảy ra. Các mẫu nhiễm virus (dương tính) là các mẫu hiện lên màu vàng mà cường ñộ phụ thuộc vào nồng ñộ virus có trong mẫu.
5.5Kiểm tra ñể thấy rằng các giếng chứa dịch mẫu cây khỏe mạnh và chỉ
buffer vẫn giữ nguyên không cho phản ứng gì.
5.6Nếu có một máy ño màu hoặc máy ñọc ELISA, ñọc khay phản ứng (theo hướng dẫn trên máy) và xác ñịnh các mẫu dương tính theo các quan hệ sau:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 95
x ≥ xtbh x σ : x = giá trị ngưỡng; xtbh = giá trị trung bình của các mẫu cây khỏe mạnh; σ = ñộ lệch chuẩn
Các vật dụng lựa chọn
Trong bộ kit bạn sẽ thấy có tám pipette Pasteur và syringe ñược làm dấu (xem danh sách kèm theo). Những pipette va syringe này là chựa chọn thay thế khi tại cơ sở không có micropipette.
Bạn có thể dùng syringe loại 5µl ñể chiết Tween-20 và diethanolamine. Syringe loại 1µl có thể dùng ñể chiết các IgG và conjugates (IgG-AP) như sau:
- Lấy 0,05ml (50µl) IgG cho vào 15ml dung dịch ñệm phủ áo giếng. - Lấy 0,05ml (50µl) IgG-AP cho 15ml dung dịch ñệm liên kết (conjugate). Các pipette màu:
- Dùng pipette màu xanh dương nhạt ñể chiết dung dịch ñệm phủ áo giếng (coating buffer), 4 giọt (100µl) vào mỗi giếng trên khay microtitre.
- Dùng pipette màu lục thêm một lượng dung dịch chất ñệm ly trích
(extraction buufer) tương ñương 5 lần khối lượng mẫu cây (v/w) trong mỗi túi plastic.
- Dùng pipette màu ñỏ thêm 4 giọt (100µl) dung dịch liên kết (conjugate solution) vào mỗi giếng trên khay microtitre.
- Dùng pipette màu vàng thêm 2 giọt (80µl) dung dịch cơ chất (substrate solution) vào mỗi giếng của khay microtitre.
Trong kit mỗi loại pipette gồm 02 chiếc.
Ghi chú: ðừng quên rửa thật sạch các pipette và syringe 1ml với nước khử ion trước khi chuyển từ IgG nay sang IgG khác ñể tránh tạm nhiễm.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 96
Title: Thi nghiem anh huwong cua nen phan bon va khoang cach trong
Function: FACTOR
Experiment Model Number 9:
Randomized Complete Block Design for Factor A, with Factor B a Split Plot on A
Data case no. 1 to 27.
Factorial ANOVA for the factors:
Replication (lan nhac) with values from 1 to 3 Factor A (Yeu to a) with values from 1 to 3 Factor B (Yeu to B) with values from 1 to 3
Variable 4: STT
Grand Mean = 7.974 Grand Sum = 215.300 Total Count = 27