III. Hoỏ tớnh của mỏu
9. Lượng phospho vụ cơ huyết thanh
Nguyờn tố phospho vụ cơ cú ý nghĩa ủặc biệt ủối với sự sống của ủộng vật. Nú tham gia cấu tạo bộ xương (gần 87% lượng phospho cú trong cơ thể); là thành phần quan trọng của rất nhiều hợp chất hữu cơ trong cơ thể.
Phot pho cú ở trong cơ thể dưới 2 dạng
- Muối vụ cơ gồm những thể octho và pyrophotphat. Phot pho vụ cơ phõn bố ủều nhau trong huyết tương và hồng cầu.
- Hợp chất hữu cơ của axit photphoric với những nuoleotit gluxit, lipit, protit hoặc dưới dạng axit diphotphoglyxeric trong hồng cầu.
Phospho cú trong mỏu và huyết thanh, nhưng thường ủịnh lượng phospho trong huyết thanh.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ ……….138
Nguyờn tắc: Lắng protein huyết thanh bằng axit trichlor axetic. Nước mỏu ủó loại protein cú phospho hoà tan cho amon molydat vào sẽ kết hợp với phospho vụ cơ tạo thành axit phosphomolybdic. Axit phosphomolybdic nhờ hydroquinon và trong sự hiện diện của Natri sulfit, ủược khử oxi thành một dẫn xuất màu xanh. ðộ ủậm của màu xanh tỷ lệ thuận với lượng phospho trong mỏu.
Hoỏ chất
1. Axit trichlirur axetic 20%, bảo quản trong tủ lạnh. 2. Amon molybdat
- 25 g Amon molybdat hoà vào trong 300 ml nước cất;
- 75 ml H2SO4 ủặc hoà từ từ vào trong 125 ml nước cất. Trộn hai thứ trờn lại với nhau. 3. Hydroquinon 1%: Cho 1 g Hydroquinon vào bỡnh 100 ml, thờm một ớt nước cất và hoà
tan, rồi thờm nước cất cho tới 100 ml. Thờm vào 1 giọt H2SO4 ủặc. 4. Dung dich carbonat sulfit:
- Hoà 40 g Na2CO3 khan trong 200 ml nước;
- 7,5 g Na2SO3 (Natri sulfit )khan vào trong 50 ml nước. Nếu khụng cú Na2SO3 khan cú thể thay bằng 15g Na2SO3 kết tinh.
5. Dung dịch phospho chuẩn:
a. Dung dịch gốc: Cõn 4,394 g KH2PO4 (cõn bằng cõn phõn tớch) cho vào bỡnh ủịnh mức 1 lớt và thờm nước cất vào ủến khấc 1 lớt.
b. Dung dịch chuẩn dựng: Cho 2 ml dung dịch chuẩn gốc vào bỡnh ủịnh mức 100 ml, rồi thờm nước cất vào ủến 100 ml. 1 ml dung dịch này cú 0,02 mg P.
Tiến hành ủịnh lượng
Cho 1 ml huyết thanh vào ống nghiệm, thờm 2 ml nước cất và 1 ml axit trichlorur axetic 20%, lắc ủều, ủể vài phỳt, ly tõm loại protein.
Chắt lấy 2,5 ml nước lọc trờn cho vào ống nghiệm khỏc, thờm 0,5 ml dung dịch hydroquinon. ðể yờn 5 phỳt. Tiếp theo cho từng giọt một 2 ml Carbonat sulfit, và sau cựng cho thờm nước cất ủể cú tổng số dung tớch là 6 ml. ðể yờn 10 phỳt rồi ủưa so màu trờn quang kế. Từ kết quả số mật ủộ quang học ủọc trờn mỏy và so với ủồ mẫu ủể tớnh hàm lượng Phospho trong huyết thanh.
Làm ủồ mẫu:
Lấy 5 ống nghiệm ghi số từ 1 ủến 5. Cho cỏc hoỏ chất theo thứ tự bảng sau, ml:
Cỏc chất 1 2 3 4 5
1. Dung dịch phospho chuẩn ( 0,02 mg/ml) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,0
2. Nước cất 2,0 1,5 1,0 0,5 0
3. Axit trichlorur axetic 20% 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
4. Amụn molybdat 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
5. Hydroquinon 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
6. Carbonat – sulfit 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Hàm lượng phospho, mg% 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0
Lắc ủều cỏc ống, sau ủú ủể yờn 10 phỳt. So màu trờn quang kế.
Chỳ ý : Tạo ống trắng bằng cỏch thay dung dịch phospho chuẩn bằng nước cất, cũn cỏc thành
phần khỏc giống bảng trờn ( từ “ 3 “ ủến “ 6”).
* ðịnh lương phospho vụ cơ ( Theo Ivanụp)
Thuốc thử
2. Amụn molybdat 5% trong H2SO4 15% 3. Axit ascobic ( vitamin C) 1% trong HCl 0,1N
4. Dung dịch phospho chuẩn: Cho KH2PO4 vào chậu thuỷ tinh dưới cú H2SO4 và ủể qua ủờm ủể sấy khụ KH2PO4. Cõn 4,39369 ( cú thể lấy 4,3940g) KH2PO4 cho vào bỡnh ủịnh mức 1000 ml , và cho nước cất ủến 1000 ml. Lấy 2ml dung dịch trờn pha loóng với nước cất ủến 100 ml, rồi thờm vào 20 ml axit trichlor axetic 20%, 3ml dung dịch này cú 0,05 mg P.
Tiến hành ủịnh lượng:
Cho vào ống li tõm: 3 ml nước cất, 1 ml huyết thanh kiểm nghiệm và 1ml axit trichlorur axetic 20%, 3 ml dung dịch này cú 0,05 mgP.
Lấy 2 ống kiểm nghiệm. ủo dung tớch 10 ml và ủỏnh dấu lại.
Cho vào ống thứ 1 (ống kiểm nghiệm) : 2,5 ml nước mỏu lọc, 1,5 ml nước cất, 1ml amon nolybdat, 1ml axit ascobic và thờm nước cất ủến khấc 10 ml.
ðồng thời, cho vào ống thứ 2 (ống chuẩn): 3ml dung dịch phospho chuẩn (0,05mgP), 1,5 ml nước cất, 1ml amon molybdat, 1ml axit ascobic và thờm nước cất ủến khắc 10ml.
Sau 10 phỳt ủưa so màu trờn quang kế, kớnh lọc màu xanh, ống 1cm
Tớnh: mg% P = chuan thu E E x 0,05 x 100 = chuan thu E E x 10 ý nghĩa:
Hàm lượng phospho trong huyết thanh thay ủổi tuỳ theo tuổi, loài gia sỳc và theo cả mựa vụ trong năm. Phẩm chất thức ăn ảnh hưởng rất lớn ủến hàm lượng phospho trong mỏu.
- Hàm lượng phospho tăng: Bệnh ở thận (thiểu năng thận- viờm thận), leukosis, thiểu năng tuyến cận giỏp trạng.
- Hàm lượng phospho giảm: cường tuyến cận giỏp trạng (thường gặp ở thời kỳ ủầu của bệnh do sự hạ thấp ngưỡng thận với phot pho - cũn khi ủó cú biến chứng viờm thận thỡ cú thể cú ứ ủọng phot pho); cũi xương, mềm xương, suy dinh dưỡng