XI. Khỏm phõn
3. Cỏc xột nghiệm cơ năng
Gan tổng hợp phần lớn protein huyết thanh, albumin, globulin, fibrinogen, protrombin. ở gan diễn ra quỏ trỡnh chu chuyển amin, hỡnh thành sản phẩm cuối cựng của trao ủổi amin là ure. Gan tham gia tớch cực vào quỏ trỡnh ủụng mỏu bằng cỏch tạo ra fibrinogen, protrombin, heparin.
Gan dự trữ khối lượng lớn lipit cho cơ thể, nơi hỡnh thành cỏc phospholipit, cholesterol. Cỏc axit bộo ủược oxy húa thành cỏc sản phẩm như thể xeton và cỏc axit ủơn giản khỏc cũng xảy ra ở gan. Vitamin A, B1 và K ủược tạo thành trong gan.
Cỏc chất ủộc từ cỏc tổ chức, khớ quan, sản phẩm của lờn men trong ủường ruột, cỏc sản phẩm của quỏ trỡnh trao ủổi chất trong cơ thể, tất cả những chất cặn bó ủú ủều qua gan và
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ ẦẦẦ.74
bằng cỏc phản ứng húa học phức tạp, bị phỏ hủy chuyển thành cỏc chất khụng ủộc và bài thải ra ngoài cơ thể.
Tế bào gan bị tổn thương nhất ủịnh kộo theo chức năng của nú rối loạn.
Khỏm bệnh gan, ngoài cỏc phương phỏp phỏt hiện tổn thương thực thể, cũn cỏc phương phỏp phỏt hiện chức năng Ờ gọi là cỏc xột nghiệm chức năng.
Hiện nay cú hàng trăm nghiệm phỏp chức năng, tựy theo yờu cầu chẩn ủoỏn cụ thể ủể chọn phương phỏp thớch hợp.
Một số nghiệm phỏp thường dựng - Xột nghiệm cơ năng trao ủổi chất
Cỏc gluxit hấp thụ vào cơ thể, ủược chuyển qua dạng glucoza ủể oxy húa cho cơ thể năng lượng. Nếu lượng glucoza nhiều lại ủược chuyển thành glucogen dự trữ trong gan. Quỏ trỡnh trờn diễn ra trong gan.
- Nghiệm phỏp dựng glucoza
Khụng cho gia sỳc ăn 12-18 giờ trước khi tiến hành thớ nghiệm. định lượng ủường huyết và ủường niệu. Dựng ống thụng cho vào dạ dày dung dịch ủường glucoza 40 %, liều lượng 0,5g/1 kg thể trọng gia sỳc. Sau 30 phỳt, 1 giờ, 2 giờ, 3 giờ lấy mỏu ủịnh lượng ủường huyết. Vẽ kết quả trờn 1 ủồ thị.
ở ngựa khỏe, ủường huyết cao nhất sau 30 - 60 phỳt, sau ủú tụt dần và trở lại bỡnh thường sau 3 giờ. Nếu chức năng gan bị rối loạn, ủường huyết xuống rất chậm.
Cú thể lấy tỷ lệ giữa lượng ủường huyết cao nhất sau khi cho uống ủường và lượng ủường huyết trước ủú. ở bũ khỏe, tỷ lệ ủú là 1,5 Ờ 1,57, lỳc gan tổn thương: 1,94 Ờ 2,55.
Nghiệm phỏp glucoza cú nhược ủiểm là ủường huyết khụng chỉ phụ thuộc vào gan mà nú cũn phụ thuộc vào hoạt ủộng của tế bào cỏc khớ quan khỏc, phụ thuộc và thần kinh, tuyến tụy, cỏc nội tiết khỏc. Nghiệm phỏp này cho kết quả khụng chớnh xỏc khi ỏp dụng với những ca bệnh mà chức năng thận suy.
- Nghiệm phỏp dựng galactoza
đõy là nghiệm phỏp cú nhiều ưu ủiểm vỡ galactoza khi vào ruột ủược hấp thụ nhanh và khi vào mỏu nú ủược chuyển thành glucoza mà quỏ trỡnh này diễn ra trong gan. Mặt khỏc, galactoza cú ngưỡng thận rất thấp. Vỡ vậy, lượng ủường huyết phụ thuộc chủ yếu vào gan.
Cỏc bước xột nghiệm tiến hành giống nghiệm phỏp dựng glucoza, chỉ liều lượng dựng bằng 1/2 glucoza.
Cỏc nghiệm phỏp trờn gặp khú khăn thỡ ỏp dụng với loại nhai lại, vỡ khụng thể xột nghiệm lỳc gia sỳc ủúi ủược, khụng loại ủược cỏc yếu tố ảnh hưởng lượng ủường huyết ngoài gan.
- Nghiệm phỏp dựng Adrenalin
Tiờm tĩnh mạch hay dưới da 2 - 5 ml adrenalin 1Ẹ, tựy gia sỳc lớn bộ.
ở ngựa khỏe, tiờm adrenalin vào tĩnh mạch thỡ 30 phỳt sau ủường huyết cao nhất; tiờm dưới da, phản ứng dường huyết tăng chậm hơn (60 phỳt). đường huyết cao rồi hạ xuống mức bỡnh thường sau 3 giờ. Gan bị bệnh, dự trữ glucogen ớt, phản ứng tăng ủường huyết với kớch thớch adrenalin khụng rừ, thậm trớ khụng thay ủổi.
Ngoài cỏc xột nghiệm chức năng trờn, cần thiết ủịnh lượng ủường huyết (xem xột nghiệm mỏu), axit lactic, axit piruvic trong mỏu ủể thờm tư liệu chẩn ủoỏn bệnh gan.
- Xột nghiệm cơ năng trao ủổi protit
Cỏc xột nghiệm dựa trờn chức năng trao ủổi protit của gan khỏ nhiều, nhưng thường dựng: ủịnh lượng protein huyết thanh, cỏc phản ứng lờn bụng, ủịnh lượng ủạm tổng số, axit uric trong mỏu và trong nước tiểu.
Cỏc xột nghiệm sẽ trỡnh bày trong chương (Ộ xột nghiệm mỏuỢ, ở ủõy trỡnh bày chủ yếu cỏc phản ứng lờn bụng thường dựng).
Cỏc phản ứng lờn bụng ủều dựa trờn nguyờn tắc: tớnh bền vững của protein huyết thanh thay ủổi khi tỷ lệ giữa cỏc tiểu phần protein huyết thanh thay ủổi.
Protein tồn tại dưới dạng keo trong suốt, phụ thuộc vào cỏc hạt keo li ti, tớnh mang ủiện và mang nước của protein. Nếu kớch thước cỏc vi hạt keo tăng, cỏc hạt dú rất rễ gõy kết tủa. Protein dễ vún và kết tủa trong trường hợp vi hạt keo lớn hơn, tớnh mang ủiện và hàm lượng nước trong protein giảm xuống. Cỏc nghiệm phỏp lờn bụng trở nờn dương tớnh khi số lượng tiểu phần ỏ, β, γ - globulin và hệ số A/G thay ủổi.
Cú quỏ nhiều tư liệu chứng tỏ khi tế bào gan tổn thương cấp tớnh thỡ hàm lượng protein huyết thanh giảm, anbumin giảm, globulin tăng, hệ số A/G giảm, cỏc nghiệm phỏp lờn bụng cho kết quả dương tớnh.
Chỳ ý: cỏc nghiệm phỏp lờn bụng khụng dặc hiệu cho cỏc bệnh ở gan, vỡ nú cũng cho kết quả dương tớnh trong cỏc bệnh khỏc cú kốm theo thay ủổi protein huyết thanh tương tự.
- Phản ứng Takata Ờ Ara
Nguyờn tắc phản ứng dựa trờn sự thay ủổi tớnh ổn ủịnh thể keo của protein huyết thanh khi hàm lượng glubulin tăng.
Thuốc thử:
1/ Dung dịch Na2CO3 10%.
2/ Dung dịch Takata: HgCl2 0,5% và Fucsin (ủỏ) 0,02% trong nước, lượng bằng nhau. 3/ Nước muối NaCl 0,9%.
Cỏc bước tiến hành
Trong 1 giỏ cú 7 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 1ml NaCl 0,9%. Cho vào ống thứ nhất 1ml huyết thanh kiểm nghiệm, lắc thật ủều trỏnh làm nổi bọt. Hỳt 1ml dung dịch của ống thứ nhất cho qua ống thứ hai và cũng làm như trờn, hỳt 1ml dung dịch của ống thứ hai cho qua ống thứ 3Ầ cứ tiếp tục như vậy ủến ống thứ 7, hỳt bỏ 1ml.
Cho vào mỗi ống 0,25 ml Na2 CO3 10% và 0,3 Takata, lắc thật ủều và ủể yờn trong vũng 24 giờ, ủọc kết quả ống kết tủa cuối cựng.
ở ngựa bỡnh thường ống kết tủa ống cuối - ống thứ 6. Nếu kết tủa ống thứ 4 trở về trước ủược ủỏnh giỏ là dương tớnh.
Phản ứng Takata Ờ Ara dương tớnh: viờm gan, xơ gan, tổn thương phõn tỏnẦ
- Phản ứng Ven-man
đỏnh giỏ sự ổn ủịnh của protein huyết thanh bằng cỏch cho nú kết tủa với CaCl2 ở những nồng ủộ khỏc nhau. CaCl2 làm thay ủổi tớnh mang ủiện của cỏc tiểu phần protein trong ủiều kiện ủun sụi.
Thuốc thử: dung dịch CaCl2 10%.
Cỏc bước:
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ ẦẦẦ.76 ống nghiệm CaCl2 10% (ml) Nước cất (ml) Nồng ủộ CaCl2 % Huyết thanh 1 5.0 - 0.1 0.1 2 4.5 0.5 0.09 0.1 3 4.0 1.0 0.08 0.1 4 3.5 1.5 0.07 0.1 5 3.0 2.0 0.06 0.1 6 2.5 2.5 0.05 0.1 7 2.25 2.75 0.04 0.1 8 2.0 3.0 0.035 0.1 9 1.75 3.25 0.03 0.1 10 1.5 3.5 0.02 0.1 11 1.0 4.0 0.01 0.1
Lắc ủều trỏnh nổi bọt, ủậy cỏc ống lại, ủun cỏch thủy sụi 15 phỳt, lấy ra ủọc kết quả ống cú kết tủa cuối cựng.
Trõu bỡnh thường: ống thứ 8 - 9, nồng ủộ CaCl2 0.035 - 0.03%. Nếu kết tủa ở ống 10 - 11: phản ứng dương tớnh (+).
Ven-man dương tớnh khi viờm gan, xơ gan.
- Phản ứng Gros Thuốc thử: Hayem HgCl2 : 0.5 g Na2SO4. 10H2O: 5 g NaCl: 2 g Nước cất: 200 ml.
Cỏch làm: cho vào ống nghiệm 1ml huyết thanh tươi, rồi dựng ống hỳt 5ml, nhỏ từ từ dung
dịch Hayem, vừa nhỏ vừa lắc ống nghiệm, cho ủến lỳc cú kết tủa khụng tan. Kết quả ủược tớnh bằng số ml dung dịch ủó dựng.
ở trõu bũ khỏe, phản ứng Gros: 2.4 Ờ 2.6 (ml)
Phản ứng là dương tớnh khi kết quả bằng 1/2 bỡnh thường hay ớt hơn.
Phản ứng Gros dương tớnh: tổn thương phõn tỏn trờn gan, viờm gan, xơ gan. Gros dương tớnh kộo dài chứng tỏ bệnh viờm gan ở thể mạn tớnh.
- Phản ứng Lugụn (Lugol)
Thuốc thử Lugụn. I2 : 20.0g KI: 40.0g Nước cất: 300ml
Cỏch làm:
Cho 1 giọt Lugol lờn phiến kớnh rồi nhỏ thờm 1 giọt huyết thanh tươi, trộn ủều. đọc kết quả sau 5 phỳt.
Huyết thanh vún từng cục: + + + +
Vún từng hạt: + + +
Vún từng hạt nhỏ: + + Vún từng hạt li ti: + Huyết thanh trong suốt: -
Xột nhiệm cơ năng trao ủổi lipit
Thường phải ủịnh lượng lipit tổng số, cholesterol và cholesterol este, photpholipit trong mỏu; ủiện di lipoprotein.
Vai trũ của gan trong quỏ trỡnh trao ủổi lipit bắt ủầu từ giai ủoạn tiờu húa mỡ trong ủường ruột. Mật và cỏc axit mật từ axit torocolic (taurocolic) hoạt húa men lipara, cựng với cỏc Na+ tạo thành cỏc muối của axit mật. Cỏc muối này làm thay ủổi sức căng bề mặt của hạt mỡ, nhũ húa nú ủể dễ hấp thụ. Cả quỏ trỡnh thủy húa, oxy hoỏ, chuyển hoỏ lipit phức tạp gắn liền với chức phận của gan.
Xột nghiệm cơ năng trao ủổi sắc tố mật
Cần xột nghiệm bilirubin trong mỏu, Stecobilin trong phõn và urobilin trong nước tiểu.
Quỏ trỡnh chuyển húa sắc tố mật
Trong cỏc tế bào hệ thống vừng mạc nội mụ ở gan, lỏch, tủy xương: cỏc tế bào hồng cầu già bị thoỏi húa cho hemoglobin, sau ủú là verdohemoglobin. Verdohemoglobin tỏch Fe và Globin ủể thành biliverbin và sau ủú là hemobilirubin.
Hemobilirubin gắn anbumin vận chuyển trong mỏu. Do cú phõn tử lượng lớn nờn nú khụng qua ủược ống lọc ở thận ủể ra ngoài cựng với nước tiểu. Hemobilirubin khụng hũa tan trong nước, khụng tỏc dụng trực tiếp với thuốc thử diazo, nờn cũn gọi là phản ứng Bilirubin giỏn tiếp.
Trong tế bào gan: Hemobilirubin dưới xỳc tỏc của men urodindiphosphoglucoroni - Transpheraza, kết hợp với axit glucoronic ủể tạo thành Cholebilirubin Ờ bilirubindiglucoroconic (sắc tố II) và bilirubinmonoglucoronic (sắc tố I). Theo Todorov (1966) thỡ sắc tố mật I chiếm khoảng 30%, sắc tố II chiộm khoảng 70%.
Bilirubin + 2UDPGA men bilirubindiglucoronic + 2UDP
Bilirubin + UDPGA men bilirubindiglucoronic + UDP UDPGA: axit urodindiphosphoglucoronic
UDP: urodindiphosphat
Cholebilirubin là sắc tố màu ủỏ, tớnh axit, tan trong nước, dễ kết hợp với cỏ kim loại muối kiềm. Cỏc muối Ca của bilirubin khú tan trong nước, nờn dễ kết tủa tạo thành sỏi mật.
Cholebilirubin theo ống dẫn mật vào tỳi mật và vào tỏ tràng. ở ủường ruột, dưới tỏc dụng của hệ vi khuẩn, Cholebilirubin bị khử oxy thành mezobilirubin (bilirubin trung gian) và sau ủú
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Giỏo trỡnh Giỏo trỡnh Chẩn ủoỏn bệnh thỳ ẦẦẦ.78
tạo thành Stecobilinogen và urobilinogen. Một phần Stecobilinogen và urobilinogen thấm theo thành ruột, theo tĩnh mạch cửa vào gan ủược oxy húa thành bilirubin tớch lại trong mật. Phần lớn Stecobilinogen theo phõn ra ngoài, gặp oxy, chỳng thành Stecobilin - sắc tố của phõn. Một phần rất ớt bilirubin ủó bị khử oxy xuống ruột già, ngấm vào mạch quản thành ruột, theo mỏu ủến thận, bài tiết ra ngoài. Trong nước tiểu, gặp oxy, bị oxy húa trở thành urobilin. Stecobilinogen và Stecobilin, urobilinogen và urobilin giống nhau về tớnh chất húa học. ý nghĩa chẩn ủoỏn xột nghiờm chỳng trong phõn, trong nước tiểu ủó ủược trỡnh bày ở phần : xột nghiệm phõn và phần xột nghiệm nước tiểu.
Trong lõm sàng cần phải chẩn ủoỏn phõn biệt chứng hoàng ủản do bệnh ở gan, tắc mật và do bệnh phỏ hồng cầu hàng loạt.
Những bệnh cú vỡ quỏ nhiều hồng cầu (thiếu mỏu truyền nhiễm của ngựa, cỏc bệnh do huyết bào tử trựng, cỏc chứng trỳng ủộcẦ), hemoglobin nhiều, hemobilirubin cũng tăng mạnh, tớch lại trong mỏu, tụ lại trong cỏc tổ chức. Stecobilinogen và urobilinogen nhiều, gan khụng oxy húa kịp cũng tớch lại trong mỏu và trong nước tiểu urobilin tăng lờn.
Những bệnh gan (viờm gan, gan thoỏi húa, xơ ganẦ) gan khụng chuyển húa hết hemobilirubin thành cholebilirubin, hemobilirubin tớch lại trong mỏu, trong tổ chức. Mặt khỏc, cholebilirubin cú thể thấm qua tổ chức gan tổn thương ủể vào mỏu, tớch lại trong tổ chức và một phần theo nước tiểu ra ngoài. Gan bị tổn thương khụng oxy húa hết Stecobilinogen và urobilinogen, chỳng tớch lại trong tổ chức và thải ra ngoài nhiều trong nước tiểu.
Những bệnh làm tắc ống mật (sỏi mật, viờm tỳi mật, viờm cata ruộtẦ), ống mật trương to, cholebilirubin tràn vào mỏu, thải rất nhiều ra ngoài qua nước tiểu.
Chẩn ủoỏn phõn biệt chứng hoàng ủản
Hoàng ủản
Sắc tố Trong Gia sỳc khoẻ
Cơ giới Tổn thương gan Dung huyết
Hemoglobin Mỏu, nước tiểu +++ - +++ - +++ - ++++ +++ Hemobilirubin Mỏu + + +++ ++++ Cholebilirubin Phõn, mỏu, nước tiểu ++ - - +++ +++ + ++++ ++++ ++++ - - Phản ứng Van-den-berg
Giỏn tiếp (tựy theo loại gia sỳc)
Trực
tiếp Lưỡng tớnh Giỏn tiếp
Urobilin Nước tiểu + - ++++ +++
Xột nghiờm hoạt tớnh của SGOT và SGPT
SGOT: Serum glutamat Ờ Oxalocetac Ờ Transaminaza SGPT: Serum glutamat Ờ Pyruvat Ờ Transaminaza
đú là hai men chu chuyển amin và hoạt tớnh của nú thay ủổi liờn quan ủến trạng thỏi tế bào gan rất lớn.
Trong thỳ y, nhiều người ủó ứng dụng nghiờn cứu ứng dụng hai men trờn ủể chẩn ủoỏn bệnh ở gia sỳc, nhưng kết quả cũn tản mạn. Theo Jonov và Usa thỡ hoạt tớnh của SGOT và SGPT ở bũ khoẻ và bũ bệnh khỏc nhau rất nhiều; ở bũ khỏe SGOT và SGPT: 20-30 và 20-50 ủơn vị trong 1ml huyết thanh; ở bũ bị bệnh gan: 90-150 ủơn vị. Nhưng theo Nhicov thỡ họat tớnh của SGOT và SGPT ở bũ khỏe và bũ cú bệnh ở gan khụng khỏc nhau mấy. Thực nghiệm ở trõu (Hồ văn Nam và cộng sự) cho thấy: SGOT và SGPT tăng lờn rất nhiều ở trõu gan cú tổn thương nhất là ở cỏc ca viờm gan.
Gan và quỏ trỡnh ủụng mỏu
Trong gan, protrompin, antitrombin, fibrinogen. v.vẦ ủược tổng hợp. Quỏ trỡnh ủú cần thiết phải cú vitamin K.
Hoàng ủản do tắc ống mật, mật khụng ra ủược tỏ tràng, nhũ hoỏ và hấp thu mỡ ở ủường ruột bị trở ngại, cơ thể thiếu vitamin K (K- avitanminosis).
Hoàng ủản do tổn thương gan, antitrombin tăng, hàm lượng fibrinnogen giảm. Trong xơ gan, lượng fibrinigen giảm ủến 20%; viờm gan cấp tớnh giảm ủến 50% so với bỡnh thường.
Những bệnh làm tắc ống mật, tổn thương gan thường cú triệu chứng mỏu khú ủụng.