a. Định nghĩa
Amylose là thành phần polysaccarit của tinh bột, cao phân tử có cấu trúc mạch thẳng .
Amylosepectin là thành phần polysaccarit của tinh bột, cao phân tử có cấu trúc mạch nhánh.
b. Nội dung phương pháp
Nghiền nhỏ gạo thành bột mịn để phá vỡ hoàn toàn hạt tinh bột. Sau khi đã loại mỡ khỏi bột, hóa hồ bằng dung dịch Natri hydroxyt. Điều chỉnh pH dung dịch mẫu từ 4,5 x 4,8 bằng hệ đệm axetat, thêm dung dịch iốt và đo độ hấp thụ của phức màu tạo thành ở bước sóng 620 nm bằng phổ kế.
Hàm lượng amylose của mẫu được xác định dựa vào đồ thị chuẩn, đồ thị này được xây dựng trên cơ sở sử dụng hỗn hợp amylose và amylopectin để loại trừ ảnh hưởng của amylosepectin đến màu của phức amylose – iốt trong dịch mẫu thử.
c. Hóa chất
Tất cả các thuốc thử được sử dụng nếu không có các chỉ dẫn khác phải dùng loại tinh khiết phân tích (TK, PT), nước cất hoặc nước có độ sạch tương đương.
Metanol, dung dịch 85%. Etanol, dung dịch 95%.
Natri hydroxyt, dung dịch 1 mol/l. Natri hydroxyt, dung dịch 0,09 mol/l.
Iốt, dung dịch 0,2%.
Amylose khoai tây không chứa amylosepectin, dung dịch huyền phù chuẩn 1 g/l. Amylosepectin, dung dịch huyền phù chuẩn 1 g/l.
d. Máy móc – Dụng cụ
Cân phân tích.
Thiết bị nghiền ướt dùng cho phòng thí nghiệm có khả năng nghiền gạo xát ngâm nước thành khối mịn, khi sấy khô sẽ lọt qua rây có kích thước lỗ là 250 µm.
Thiết bị nghiền nhỏ có khả năng nghiền gạo xát sống thành bột qua rây có kích thước lỗ 250 µm.
Rây có kích thước lỗ sàng 250 µm.
Máy quang phổ có khả năng đo độ hấp thụ ở bước sóng 620 nm. Thiết bị chiết Soxlet.
Máy đo pH. Nồi cách thủy. Bình định mức 100 ml. Pipet 1, 2, 5, 10 và 20 ml. e. Tiến hành thử * Chuẩn bị mẫu thử
Với thiết bị nghiền nhỏ tiến hành nghiền 20 hạt gạo xát thành bột mịn qua được rây có kích thước lỗ sàng 250 µm.
Loại mỡ khỏi bột bằng metanol hay etanol 95% với thời gian 16 giờ trong thiết bị Soxlet. Sau đó đổ thành lớp mỏng trên đĩa hay trên mặt kính đồng hồ và để yên 2 ngày để loại bỏ alcol dư và cân bằng độ ẩm.
* Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Cân 100 ± 0,5 mg mẫu thử đã được chuẩn bị trong bình định mức 100 ml. Thêm cẩn thận 1 ml etanol 95% để rửa trôi phần mẫu còn bám trên thành bình và làm ướt đều mẫu. Thêm từ từ 9,0 ml dung dịch natri hydroxyt 1 mol/l sao cho mẫu không bị vón cục.
Để yên ở nhiệt độ phòng từ 15 đến 24 giờ. Có thể đun cách thủy ở 1000C trong thời gian 10 phút cho đến sôi, sau đó làm nguội đến nhiệt độ phòng. Đưa thể tích đến vạch bằng nước cất và lắc mạnh.
* Mẫu trắng
Tiến hành mẫu trắng với cùng một lượng thuốc thử theo đúng như các bước đối với mẫu thử nhưng sử dụng 5,0 ml dung dịch natri hydroxyt 0,09 mol/l thay cho dung dịch mẫu thử.
* Xây dựng đồ thị chuẩn
- Chuẩn bị thang dung dịch chuẩn: trộn những thể tích dung dịch huyền phù chuẩn của amylose, amylosepectin và natri hydroxyt 0,09 mol/l theo số liệu sau:
Amylose trong gạo xát (m/m) % chất khô
Thành phần hỗn hợp (ml) Amylose Amylopectin NaOH
0 0 18 2 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
10 2 16 2
20 4 14 2
25 5 13 2
30 6 12 2
Các giá trị trong bảng được tính trên cơ sở hàm lượng bột trung bình tính theo phần trăm khối lượng chất khô trong gạo xát. Để phân tích hằng ngày có thể dùng các mẫu bột gạo xát đã loại mỡ có hàm lượng amylose đã biết thay thế cho dung dịch huyền phù amylose và amylosepectin.
- Hiện màu: dùng pipet lấy 5,0 ml của mỗi dung dịch chuẩn cho vào bình định mức 100 ml đã có sẵn 50 ml nước cất. Thêm 1,0 ml axit axetic 1 mol/l và lắc đều. Nếu cần có thể kiểm tra lại pH của dung dịch, giá trị pH cần đạt từ 4,5 - 4,8 và từ đó điều chỉnh lượng axit axetic thêm vào cho thích hợp. Sau đó thêm 2,0 ml dung dịch I2
0,2% và thêm nước cất đến vạch định mức, lắc đều và giữ yên trong 20 phút.
- Đo mật độ quang của các dung dịch trên máy quang phổ ở bước sóng 620 nm với dung dịch đối chứng là mẫu trắng.
- Vẽ đồ thị chuẩn: dựa vào các giá trị mật độ quang thu được và hàm lượng amylose tương ứng theo phần trăm khối lượng trong gạo tính theo chất khô.
* Xác định mẫu thử
- Hiện màu: Dùng pipet lấy 5,0 ml dung dịch mẫu thử cho vào bình định mức 100 ml có chứa sẵn nước cất, thêm 1,0 ml axit axetic 1 mol/l, thêm 2,0 ml dung dịch I2 0,2% và thêm nước cất đến vạch định mức, lắc đều và giữ yên trong 20 phút.
- Đo mật độ quang trên máy quang phổ ở bước sóng 620 nm với dung dịch đối chứng là mẫu trắng.
g. Tính toán kết quả
Hàm lượng amylose biểu thị bằng phần trăm khối lượng trong gạo xát theo chất khô được xác định dựa vào mật độ quang đo được của mẫu thử và đồ thị chuẩn.
Kết quả cuối cùng là trị số trung bình cộng của hai phép xác định song song.