3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.10 Tách chiết DNA cây chuyển gen giả định và kiểm tra sự hiện diện của
Hình 3. 18: Kết quảđiện di sản phẩm PCR gen bar
Phương pháp PCR được tiến hành nhằm khẳng định lại một lần nữa sự hiện diện của gen chuyển sau thử nghiệm leaf – painting. Thơng thường chỉ cĩ những cá thể kháng tồn bộ (R-R-R) mới cần làm thí nghiệm này, tuy nhiên trong phạm vi luận văn chúng tơi đã tiến hành thực hiện trên cả 3 trường hợp R-R-R, R-R-S, S-S-S nhằm đối chiếu, so sánh.
Phản ứng PCR được thực hiện với cặp mồi chuyên biệt cho gen bar với đối chứng dương cho phản ứng là plasmid pZY 101 – Tnt1 được tách chiết từ chủng vi khuẩn sử dụng trong thí nghiệm, đối chứng âm cho phản ứng là nước cất và đối chứng âm cho thể chuyển gen là DNA của cây đậu nành Maverick chưa chuyển gen. Sau phản ứng PCR, sản phẩm được chạy điện di trên gel Agarose 1% và quan sát qua máy chụp gel, kết quả thu được như sau (hình 3.18):
- Ở mẫu nước cất làm đối chứng âm cho phản ứng, khơng cĩ vạch nào xuất hiện trên bảng diện di.
- Ở mẫu đối chứng âm cho cây đậu nành Maverick chưa chuyển gen, khơng phát hiện vạch nào trên bảng điện di chứng tỏ cây đậu nành trước khi chuyển gen khơng mang gen bar.
- Ở mẫu chứng dương là plasmid pZY 101 – Tnt1, một vạch sáng được ghi nhận tại vị trí gần với vạch 200 bp của thang 1 kb. Như vậy, cĩ sự xuất hiện của sản phẩm khuếch đại dài 231 bp trên mẫu chứng dương.
- Ở các giếng DNA chuyển gen giả định cĩ kết quả là S-S-S trong thử nghiệm leaf – painting, khơng cĩ vạch nào được ghi nhận. Do vậy, cĩ thể khẳng định các cây này là các thể escape.
- Ở các cây R-R-R, vạch sản phẩm được thể hiện sáng rõ, đậm trên bảng điện di. Như vậy, các cây này là các cá thể đã được sáp nhập gen bar vào genome.
- Ở các cây R-R-S và R-S-S, sản phẩm PCR cũng được ghi nhận. Tuy nhiên các vạch này mờ hơn, do đĩ cĩ thể khẳng định đây là các cây dạng thể khảm.
Kết quả PCR trên chứng minh rằng cĩ sự hiện diện của gen chuyển trong DNA tế bào của các cây kháng với Liberty sau quá trình biến nạp gen.