phương phỏp CE – C4
D kết hợp chiết pha rắn xử lý mẫu phõn tớch
Giới hạn phỏt hiện của phương phỏp (MDL) và giới hạn định lượng của phương phỏp (MQL) được xỏc định bằng cỏch thờm chuẩn Sal với cỏc nồng độ là 20 ppb, 30 ppb, 40 ppb vào ba mẫu trắng, rồi tiến hành chiết pha rắn và phõn tớch
Hỡnh 3.40. Điện di đồ xỏc định MDL của phương phỏp CE – C4D xỏc định salbutamol kết hợp chiết pha rắn xử lý mẫu nước tiểu lợn
(1,2,3 tương ứng với cỏc nồng độ chiết 20 ppb, 30 ppb, 40 ppb)
Điều kiện CE: Dung dịch đệm Arg/Ace (10 mM), pH = 4,9; bơm mẫu kiểu xi phụng 10 cm, 20 s; mao quản 60 cm, l/L = 53/60 cm; ID = 50 àm; U = 18 kV
Kết quả trờn hỡnh 3.40 cho thấy ở nồng độ 20 ppb trong nền mẫu nước tiểu khụng xuất hiện pớc của Sal, ở nồng độ 30 ppb bắt đầu xuất hiện pớc của Sal cú thể quan sỏt được. Như vậy MDL của phương phỏp là 30 ppb và MQL tương ứng là 100 ppb.
Để đỏnh giỏ độ lặp lại của phương phỏp, tiến hành chiết ba cột giống nhau ở mức thờm chuẩn là Sal 100 pbb vào 10 ml mẫu trắng, kết quả được trỡnh bày trong bảng 3.27.
Bảng 3.27. Độ lặp lại của phương phỏp CE – C4D xỏc định salbutamol kết hợp
chiết pha rắn xử lý mẫu nước tiểu lợn
Cột 1 2 3
Nồng độ Sal thờm chuẩn (ppb) 100 100 100
Nồng độ Sal thu hồi (ppb) 98,3 97,1 97,5
Hiệu suất thu hồi (%) 98,3 97,1 97,5
500 400 300 200 100 0 (1) (2) (3) 10mV
Thời gian di chuyển (s)
sal
Từ kết quả bảng 3.27 ta thấy hiệu suất thu hồi của Sal qua cỏc lần chiết là tương đương nhau, giỏ trị RSD % nhỏ hơn 5 % chứng tỏ độ lặp của phương phỏp là tương đối tốt theo AOAC (RSD khoảng 8 % ở nồng độ 1 ppm và 15 % ở nồng độ 10 ppb).
Độ đỳng của phương phỏp được đỏnh giỏ qua hiệu suất thu hồi của phương
phỏp phõn tớch, bao gồm cả xử lý và phõn tớch mẫu trờn thiết bị CE – C4D. Quỏ
trỡnh đỏnh giỏ được thực hiện ở 3 mức thờm chuẩn khỏc nhau trờn nền mẫu trắng. + Mức 1: Thờm 10,0 àl dung dịch chuẩn 100 ppm vào 10,0 ml mẫu trắng + Mức 2: Thờm 15,0 àl dung dịch chuẩn 100 ppm vào 10,0 ml mẫu trắng + Mức 3: Thờm 20,0 àl dung dịch chuẩn 100 ppm vào 10,0 ml mẫu trắng Cỏc mẫu trờn được xử lý theo quy trỡnh thu được ở trờn. Kết quả được trỡnh bày trong bảng 3.28 cho thấy hiệu suất thu hồi trung bỡnh đạt được tương đối cao 96,9 %.
Bảng 3.28. Độ thu hồi của phương phỏp CE – C4
D xỏc định salbutamol kết hợp chiết pha rắn xử lý mẫu nước tiểu lợn
Mức 1 Mức 2 Mức 3
Nồng độ Sal chuẩn thờm vào (ppb) 100,0 150,0 200,0
Nồng độ Sal thu hồi được (ppb) 98,3 146,9 189,2
Độ thu hồi (%) 98,3 97,9 94,6
Độ thu hồi trung bỡnh (%) 96,9
Như vậy, phương phỏp CE – C4
D kết hợp với chiết pha rắn để xử lớ mẫu cho độ lặp lại tốt, hiệu suất thu hồi cao và giới hạn định luợng (MDL) nhỏ cỡ 30 ppb, phự hợp để ỏp dụng vào thực tế để phõn tớch mẫu nước tiểu lợn. Giỏ trị MDL trong nghiờn cứu của chỳng tụi so với phương phỏp HPLC hay GC sử dụng detector MS
ở bảng 1.5 thỡ vẫn lớn hơn nhiều nhưng so với phương phỏp điện di CE – C4D ở
bảng 1.8 (LOD theo nghiờn cứu [38] là 2,39 ppm) đó giảm đi khỏ nhiều và giỏ trị MDL này lớn hơn một chỳt so với giỏ trị LOD đạt 20 ppb trong phương phỏp làm giàu online của Gao và cộng sự [42], tuy nhiờn phương phỏp làm giàu online bị ảnh
hưởng lớn của nền mẫu phõn tớch nờn chỉ ỏp dụng được đối với những đối tượng mẫu cú nền đơn giản như thức ăn chăn nuụi. Kỹ thuật chiết pha rắn ngoài làm giàu cũn cú khả năng làm sạch mẫu, loại bỏ cỏc tạp chất gõy ảnh hưởng đến phương phỏp CE nờn cú hiệu quả cao đối với cỏc mẫu cú nền phức tạp (mẫu nước tiểu, mẫu thịt lợn). Đặc biệt đõy là lần đầu tiờn cú sự kết hợp giữa kỹ thuật chiết pha rắn
(SPE) với phương phỏp CE – C4D nhằm làm tăng độ nhạy của phương phỏp CE –
C4D, phự hợp để ỏp dụng phõn tớch cỏc mẫu thực tế.