Phương phỏp sinh học xỏc định cỏc beta-agonist

Một phần của tài liệu Nghiên cứu phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc xác định một số phụ gia thực phẩm và beta agonist (Trang 40 - 41)

Phương phỏp hấp thụ miễn dịch cú gắn enzyme (ELISA – Enzyme Linked Immunosorbent Assay) đó được ứng dụng để xỏc định beta-agonist dựa trờn nguyờn lý khỏng nguyờn – khỏng thể. Phương phỏp ELISA cú độ nhạy cao, thao tỏc tương đối đơn giản, thời gian phõn tớch nhanh nhưng cú nhược điểm là kộm chớnh xỏc trong cỏc nền phức tạp, kộm linh hoạt vỡ phải phụ thuộc vào húa chất của nhà sản xuất. Phương phỏp ELISA xỏc định clenbuterol và salbutamol [10] cú rất nhiều dạng, dựa trờn sự kết hợp đặc hiệu giữa khỏng nguyờn và khỏng thể, trong đú khỏng thể được

vào phản ứng, enzym sẽ thủy phõn cơ chất thành một chất cú màu. Sự xuất hiện màu chứng tỏ đó xảy ra phản ứng đặc hiệu giữa khỏng thể với khỏng nguyờn và thụng qua cường độ màu sẽ biết được nồng độ khỏng nguyờn hay khỏng thể cần phỏt hiện. Kĩ thuật này khỏ nhạy và đơn giản, cho phộp ta xỏc định khỏng nguyờn hoặc khỏng thể ở một nồng độ rất thấp (khoảng 0,1 ng/ml).

Meyer và cỏc cộng sự [72] đó xỏc định được salbutamol và clenbuterol cú trong mẫu nước tiểu bằng cỏch sử dụng enzym immunoassay (EIA) và HPLC. Mẫu

nước tiểu được làm sạch qua cột chiết SPE C18 silicagel (100 mg), dựng HPLC tỏch

lấy phõn đoạn salbutamol và clenbuterol rồi dựng EIA để phõn tớch. Phương phỏp EIA này sử dụng hoúc mụn đỏnh dấu, được điều chế bằng cỏch đun Sal và monocloractic trong mụi trường kiềm để hỡnh thành salbutamol– 4– carbonxylmethyl ether (CME), được nối với coenzim biocytin qua liờn kết peptit. Thờm vào mẫu glubomin miễn dịch G của cừu (hoặc thỏ) và ủ cho đến khi phản ứng đạt trạng thỏi cõn bằng. Thờm vào đú dung dịch streptavidin – perosidase và ủ cho tới khi cú màu, dựa vào màu sắc cú thể tớnh được nồng độ salbutamol trong mẫu. Nhúm tỏc giả khẳng định, HPLC là phương phỏp hữu hiệu để phõn tớch cỏc beta-agonist nhưng để sàng lọc thỡ sử dụng EIA sẽ nhanh, rẻ hơn và cú thể phõn tớch hàng loạt mẫu.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc xác định một số phụ gia thực phẩm và beta agonist (Trang 40 - 41)