- áp lực khí mang He: 14 pSi.
6. Cách tiến hành:
6.1 Xử lý mẫu:
* Ph ơng pháp chiết mẫu:
- Cân 50g mẫu đất vào bình tam giác 250ml, cho vào 100ml Aceton (V1), đậy nắp bình tam giác lắc trên máy lắc trong 10 phút, chuyển bình tam giác vào bể siêu âm trong 10 phút để yên, lọc dung dịch vào ống đong.
- Lấy 10ml dịch lọc chuyển lên cột sắc ký có chứa 5g Silicagen và 5g Na2SO4 khan (đợc chuẩn bị nh sau: Lót một lớp bông thuỷ tinh vào đáy cột sắc ký, khoá van cột sắc ký, chuyển 30ml dung môi Aceton vào cột, cho từ từ (vừa cho vừa gõ nhẹ lên thành cột) lần lợt 2g Na2SO4 khan, 5g Silicagen, 3g Na2SO4 khan (Chú ý phần dung môi phải luôn ngập các chất nhồi cột), mở van cột sắc ký chỉnh tốc độ chảy khoảng 15-20ml/phút, rửa cột bằng 50ml Aceton.
- Rửa giải bằng 50ml n-Hexane và thu dung dịch rửa giải vào bình cầu cô quay chân không.
Cô quay chân không dịch chiết đến gần khô trên máy cô quay chân không, tháo bình cầu ra khỏi máy cô quay và tiếp tục làm bay hơi bằng dòng khí Nitơ.
- Thêm chính xác 1ml n-Hexane để hoà tan cặn trong bình cầu.
- Tiêm 1àl - 150àl dung dịch chuẩn và dung dịch mẫu trên máy sắc ký khí để xác định định tính và định lợng.
* Ph ơng pháp chiết pha rắn:
- Chuẩn bị mẫu: Cân 50g mẫu đất vào bình tam giác 250ml, cho vào 100ml Aceton (V1), đậy nắp bình tam giác lắc trên máy lắc trong 10 phút, chuyển bình tam giác vào bể siêu âm trong 10 phút, để yên, lọc dung dịch
vào ống đong. Lấy 10ml dịch lọc pha loãng đến 500ml bằng nớc cất, thêm 10ml Methanol, lắc đều.
- Hoạt hoá cột: Lắp cột vào thiết bị chiết pha rắn, khoá van xả, dùng pipet cho 5ml n-Hexane lên cột, mở van xả, tiếp tục cho 5ml Ethylacetat qua cột (không để khô dung môi trên cột). Cho 5ml Methanol lên cột, mở bơm chân không, mở van xả, (không để khô dung môi trên cột), tiếp tục cho 5ml nớc cất qua cột đến còn khoảng 1-2ml trên cột.
- Cho mẫu qua cột: Nối ống dẫn từ bình chứa mẫu đến cột C18, mở
bơm chân không, mở van xả, chỉnh tốc độ mẫu qua cột khoảng 10ml- 15ml/phút.
- Rửa cột: Sau khi mẫu qua cột, rửa cột bằng 10ml nớc cất và 10ml
dung dịch Methanol/nớc (20 : 80), làm khô cột bằng dòng Nitơ.
- Rửa giải: Rửa giải cột với 5ml dung dịch Hexane/Ethylacetat (70:
30) vào ống thuỷ tinh 10ml, làm khô dung dịch rửa giải bằng dòng khí Nitơ, dùng pipet cho chính xác 1ml Aceton vào ống thuỷ tinh, đậy nắp, lắc đều.
Tiêm 1àl - 150àl dung dịch chuẩn và dung dịch mẫu trên máy sắc ký khí để xác định định tính và định lợng.
6.2. Điều kiện sắc ký, khối phổ:6.2.1.Điều kiện sắc ký: 6.2.1.Điều kiện sắc ký:
- Chơng trình nhiệt độ cột:
+ Nhiệt độ đầu 85oC, giữ ở 2 phút.
+ Sau đó tăng lên 195oC với tốc độ gia nhiệt 30oC/phút, giữ ở nhiệt độ này trong 5phút.
+ Tiếp tục tăng nhiệt độ lên đến 250oC; với tốc độ gia nhiệt 5oC/phút, giữ ở nhiệt độ này trong 5phút.
- Tiêm mẫu: Tuỳ thuộc vào nồng độ mẫu có thể tiến hành các kỹ thuật tiêm mẫu sau đây:
+ Chơng trình chia/không chia: từ 0 đến 2 phút tỷ lệ chia 50:1
từ 2 đến 5 phút không chia Sau 5 phút tỷ lệ chia 50:1
+ Nhiệt độ bộ phận tiêm mẫu: Nhiệt độ đầu 50oC giữ trong 2 phút, sau đó tăng lên 270oC với tốc độ gia nhiệt 200oC/phút, giữ ở nhiệt độ 270oC trong 10 phút.
+ Thể tích mẫu tiêm: 5àl - 150àl * Tiêm mẫu chia dòng
+ Nhiệt độ bộ phận tiêm mẫu: 270oC + Thể tích mẫu tiêm: 1àl - 5àl
- áp lực khí mang He: 14 pSi
- Detector ECD: Nhiệt độ 300oC, khí make-up 30ml/phút
6.2.2 Điều kiện khối phổ:
* MS Tune file: (Pesticides Tunefile) - Nguồn Ion hoá: EI
- Năng lợng Ion hoá: 70eV - Nhiệt độ nguồn Ion: 240oC
- Nhiệt độ giao diện sắc ký khí với detector khối phổ: 270oC - Giá trị của bộ khuếch đại multiplier: trong khoảng 300 - 500V * MS method: (MS Me0thod for ChlorPest Full-SIM SPB-1701, HP-151)
- Chế độ quét Fullscan:
+ Thời gian trễ 0-5 phút + Thời gian quét: 5-25 phút + Khoảng khối quét: 50-500amu
- Chế độ quét Ion chọn lọc SIM (Các thông số: khối chọn, thời gian quét đã lu trong phơng pháp MS).