Cõy chuy@n gen

Một phần của tài liệu Ebook cytochrome p450 phần 2 PGS TS nguyễn thị ngọc dao (Trang 106 - 109)

- Cỏc sqc t# Cỏc phõn t S b e o v !

NH NG NGHIấN CUNG D NG CYTOCHROME-P

6.5. Cõy chuy@n gen

Vớ d� ��u tiờn v� s� d�ng thành cụng vào s�n xu�t c�a Cyt- P450 là t�o ra cõy chuy�n gen P450. Vỡ s� lai truy�n th�ng khụng t�o ra �ư�c hoa h�ng xanh da tr�i nờn th�t là thỳ v� khi trong nh�ng th�p niờn v�a qua ngư�i ta �ó thành cụng trong vi�c t�o ra hoa h�ng cú màu như v�y nh� ỏp d�ng cụng ngh�

gen. Cỏc nhà khoa h�c � Florigen/Australia và Santon/Japan

cu�i cựng �ó thành cụng trong vi�c t�o ra delphindin, ch�t ch�u trỏch nhi�m cho màu xanh da tr�i � hoa h�ng b�ng cỏch t�o ra

gen P450 tương �ng (CYP75A) tham gia vào quỏ trỡnh sinh

t�ng h�p ch�t này t� hoa bư�m (pansy), bi�u hi�n c�a dihydroflavonol t� cõy thu�c lỏ d�i và ng�n ch�n s� t�o ra dihydroflavonol reductase (Holton và cs, 1993; Ozata, 2005). Tuy nhiờn, cho ��n nay màu xanh t�o ra �ư�c v�n cũn chưa ��t so v�i “xanh hoa bư�m” vỡ v�y k�t qu� này v�n chưa cú giỏ tr�

thương m�ị Nhưng phương phỏp này l�i �ư�c ỏp d�ng thành cụng trong vi�c t�o ra hoa c�m chư�ng (Fukui và cs., 2003) v�i nh�ng màu m�i và r�t ��p (màu �� tớa t� nh�t ��n ��m), lo�i hoa này ngay l�p t�c �ư�c bỏn r�t ch�ỵ Tớnh toỏn thương m�i toàn c�u cho nhu c�u s�d�ng hoa là kho�ng 27 tri�u USD/n�m thỡ th�y vi�c ỏp d�ng thành cụng này cú s�c h�p d�n m�nh m�

Nguy n Th Ng c Dao 186

6.6. S"d$ng vi khu6n nh là mMt trong nhNng chKt xỳc tỏc sinh hQc ti2m nRng hQc ti2m nRng

N ng l c t ng h p c a vi khu n t nhiờn

Khi sàng l�c nh�ng vi khu�n cú ch�c n�ng t�ng h�p ��c hi�u ngư�i ta �ó khỏm phỏ ra nh�ng t� bào cú ho�t tớnh xỳc tỏc c�a Cyt-P450 khỏc nhau tham gia vào s� sinh t�ng h�p c�a nh�ng h�p ch�t cú giỏ tr� cụng ngh� r�t thỳ v�. Tuy v�y, như �ó nờu trờn, ti�m n�ng c�a nh�ng Cyt-P450 vi sinh v�t m�i b�t ��u

�ư�c s� d�ng. M�t trong nh�ng vi sinh v�t ��u tiờn cú ti�m n�ng ỏp d�ng trong cụng ngh� sinh h�c là n�m men thu� phõn alkane (Shulk, 1978; Ohkuma, 1995). G�n �õy hơn, s� chuy�n hoỏ c�a axit bộo b�i candida tropical và s� tham gia c�a cỏc isozyme Cyt-P450 c�a vi khu�n này vào nh�ng bư�c ph�n �ng nh�t ��nh làm cơ s� cho vi�c s� d�ng c�a nh�ng n�m men này

�ó �ư�c ti�n hành (Eschenfeld., 2003). Nh�ng loài candida

khỏc nhưcandida bombicola �ư�c c� ��nh trờn nh�ng b�n phim

ưa m� �ó �ư�c s� d�ng �� chuy�n hoỏ arachidonic acid thành 20- hydroxy licosatetraenoic acid (20-HETE) (Phadtarẹ, 2003) và r�t g�n �õy vi�c s� d�ng yarana lipolytica cho s� hoỏ giỏng oxy hoỏ c�a alkan và triglycerid �ó �ư�c �ưa ra (Fichker., 2005). Thờm vào �ú, cỏc ��i tư�ng khỏc �ó�ư�c ki�m tra trong m�t s� n�m qua kh�ng ��nh kh� n�ng c�a chỳng cú th� t�o ra nh�ng h�p ch�t thỳ v� s� d�ng Cyt-P450 n�i sinh. Sàng l�c 1800 loài vi khu�n cú kh� n�ng thu� phõn alkan, ngư�i ta phỏt hi�n m�t vi khu�n mycobacterium sp dũng HXN-1500 là cú kh�

n�ng thu� phõn ��c hi�u 1 himonene � v� trớ 7 �� t�o ra enentiopure (-) perillyl alcohol, ch�t này �ư�c coi là h�p ch�t cú

thu�c tớnh khỏng ung thư (Van Beilen và Funhoff, 2005).

Chuy�n hoỏ sinh h�c t�o thành pravastin, m�t thu�c �c ch� s�

t�ng cholesterol mỏu c�ng như là t�o ra ch�t khỏng sinh b�i

streptomices sp �ó �ư�c mụ t�. S� t�o ra epothilone, m�t ch�t ch�ng ung thư do mixa-bacteria s�n xu�t c�ng �ư�c cụng b�

(Lamb etal, 2003; Beyer et al, 1999; Tagetal, 2000; Monar et al 2000; Gerth, 2003; Park et al, 2003).

Rừ ràng là s� chuy�n hoỏ sinh h�c m� ra m�t l�nh v�c r�ng l�n cho kh� n�ng ỏp d�ng m�i c�a nh�ng ph�n �ng chuy�n hoỏ do Cyt-P450 xỳc tỏc. Xu th� này cho ��n nay v�n chưa �ư�c s�

Ch ng VỊ Nh ng nghiờn c u ng d ng Cytochrome-P450 187 hi�n ra nhi�u ��i tư�ng m�i cho vi�c ỏp d�ng vào CNSH nh�ng s�n ph�m �ư�c t�o thành v�i s� xỳc tỏc c�a Cyt-P450. �� ỏp d�ng Cyt-P450 trong CNSH, ho�c là h� th�ng t� bào nguyờn v�n bi�u hi�n cỏc isozym P450 s� �ư�c phỏt tri�n ho�c h� th�ng dư�i t� bào tỏch bi�t cú b� sung NAD(P)H s� �ư�c s� d�ng. Núi chung, s� d�ng toàn b� t� bào thư�ng ph� bi�n hơn là nh�ng isozym tỏch r�i cho m�c �ớch cụng ngh� (Storathof – 2002).

Cyt-P450 �ư�c s� d�ng ph� bi�n nh�t trong CNSH cho ��n nay là CYP102 t� Bacillus megaterium do kh� n�ng thu� phõn c�a nú ��i v�i cỏc alkan, axit bộo, c�ng như nh�ng ch�t thơm và ch� y�u là do chỳng cú ho�t tớnh khỏ cao (Urlacher, 2004 và cỏc tỏc gi�khỏc).

Vi�c ỏp d�ng CYP102 trong h�th�ng t�bào nguyờn v�n sau khi bi�u hi�n trong Ẹcoli �ó khụng �ũi h�i ph�i thờm NADPH

��t ti�n t� bờn ngoài vào và s� là m�t kh� n�ng �ng d�ng hi�u

qu� enzyme này cho chuy�n hoỏ sinh h�c cỏc acid bộo

(Schneidert al, 1998).

Saccaromyces Cerevisaea là m�t v�t ch� ph� bi�n nh�t cho s� bi�u hi�n d� th� c�a Cyt-P450. Tuy nhiờn, ��n nay m�c bi�u hi�n c�a Cyt-P450 ��ng v�t cú vỳ trong n�m men v�n cũn quỏ th�p khi so sỏnh v�i bi�u hi�n � ẸColi nh�ng Cyt-P450 b� ��t bi�n mang nh�ng trỡnh t� ��c trưng c�a Cyt-P450 17�- hydroxylase bũ. Khỏc v�i trong ẸColi, s� bi�u hi�n trong n�m men cho ra m�t lư�ng l�n P450-reductase n�i sinh t�o ra m�t h�

th�ng hoàn ch�nh �� ho�t ��ng mà khụng c�n ph�i thờm vào b�t c� c�u t� bờn ngoài nào khỏc. Toàn b� t� bào ho�c microsome

�ư�c �i�u ch� t� n�m men cú th� tr� thành ��i tư�ng l�a ch�n cho m�c tiờu sàng l�c ho�t tớnh ho�c nghiờn c�u v� m�i liờn quan c�u trỳc-ch�c n�ng. �ó cú nh�ng nghiờn c�u nh�m k�t h�p m�c �� bi�u hi�n và s�lư�ng enzyme chuy�n húa �� t�o ra nh�ng dũng n�m men “ngư�i húa” ho�c “th�c v�t húa”, ngh�a là nh�ng dũng n�m men cú th� s�n xu�t cỏc Cyt-P450 ngu�n g�c t�ngư�i hay t� th�c v�t (Dennis Pompon et al. 1994).

189

Ph tr ng

Một phần của tài liệu Ebook cytochrome p450 phần 2 PGS TS nguyễn thị ngọc dao (Trang 106 - 109)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(139 trang)