Cỏc gen c/a vi khuHn vàn (m m5c

Một phần của tài liệu Ebook cytochrome p450 phần 2 PGS TS nguyễn thị ngọc dao (Trang 53 - 56)

- Cỏc sqc t# Cỏc phõn t S b e o v !

5.1.8.Cỏc gen c/a vi khuHn vàn (m m5c

NH NG GEN Cyt-P450 VÀ S BIU HIN C A CHÚNG

5.1.8.Cỏc gen c/a vi khuHn vàn (m m5c

Kớch th��c c�a nh�ng protein Cyt-P450 ���c d�ch mó suy ra t�trỡnh t� gen, ngo�i tr� P45055A c�a Fusarium oxysporum, ��i v�i gen này trỡnh t� mó húa �ó nh�n ���c t� m�t cDNA dũng hoỏ. Ch� cú 2 gen Cyt-P450 n�m m�c cho th�y cú c�u t�o gen b�

chia tỏch: Saccharomyces sp. CYP56A ch�a 2 intron và

Neurospora crassa CYP54A cú ớt nh�t 2 intron nh�ng vựng mó húa hoàn toàn khụng ���c xỏc ��nh. Khụng cú intron nào t�n t�i trong gen Cyt-P450 vi khu�n nh�là bỡnh th��ng. Nh�ng quan sỏt

Ch ng V. Nh�ng gen Cyt-P450 và s�bi�u hi�n c�a chỳng 133 này phự h�p v�i nh�ng ��c �i�m c�u trỳc chung c�a nh�ng gen vi khu�n và n�m.

Nh�ng gen Cyt-P450 vi khu�n���c��nh v�trong nh�ng v�trớ khỏc nhau trong NST ho�c plasmid. Streptomyces sp.CYP105C

���c phiờn mó m�t cỏch �a gen ��i v�i gen cholesterol oxydase (choA) do t� tiờn �� l�ị Gi�ng nh� v�y, P.putida CYP101A t�o ra m�t operon Cam DCAB v�i nhi�u gen khỏc �ỏp �ng cho nh�ng b��c m�i c�a s� chuy�n húa D-camphor, vớ d�: gen 5- exo- alcohol dehydrogenase (Cam D), gen NADH-putidaredoxin reductase (cam A) và gen Putidaredoxin (cam B). Agrobacterium tumefaciens CYP103 và 104 ���c s�p x�p m�t cỏch ng�u nhiờn trong vựng vir c�a plasmid Ti, cỏi này t�o ra cỏc kh�i u trong cỏc loài cõy hai lỏ m�m (dicotyledonouos) trong khi

Streptomyces griseolus CYP105A và 105B ���c��nh v� � nh�ng loci tỏch bi�t trong genom. M�t khung ��c m� trong y�u t� nifD

c�a Anabaena sp. mó húa m�t trỡnh t� protein gi�ng Cyt-P450 nh�ng ho�t tớnh enzym c�a protein này ch�a ���c xỏc ��nh. Y�u t� nifD ch�a m�t s� gen và nú b� c�t t�NST trong quỏ trỡnh phỏt tri�n bi�t húa (heterocyst). �õy là trỡnh t�s�p x�p c�a nhi�m s�c th� ���c�i�u hoà liờn quan ��n s� phỏt tri�n duy nh�t ���c bi�t tham gia vào cỏc gen Cyt-P450.

Hàm l��ng G+C c�a nh�ng vựng mó húa cho cỏc gen Cyt-P450 vi sinh v�t thay ��i l�n t� kho�ng 35% ��n hơn 70% (b�ng 5.4). Hàm l��ng C+G thay ��i r�ng càng ���c th�y rừ n�u ch� xem xột nh�ng v�trớ codon th�3, vớ d�kho�ng 25% ��i v�i gen Candida và 92%-96% ��i v�i gen Streptomyces. Theo �ú, vi�c s� d�ng codon là xu h��ng chớnh trong nh�ng gen nàỵ Cú 3 codon khụng k�t thỳc khụng bao gi� ���c s� d�ng trong 6 gen Cyt-P450 Candida. Kawaguchi và cs ch� ra r�ng dũng MS-5 Candida cyclindracea ��c CUG là Serin thay cho Leu nh� quy ��nh. Codon CUG ���c s�

d�ng 4 l�n trong 6 gen c�aCandidạ Tr�t t�s�p x�p c�a nh�ng gen t�ơng ��ng g�i ý r�ng nh�ng codon CUG này ���c ��c là Leu trong cỏch th�c chung ph�bi�n.

Nhi�u codon lo�i Cyt-P450 vi khu�n và n�m cú kh�n�ng ���c kớch thớch t�ng h�p. Bi�u hi�n c�a CYP102A B.megaterium ���c

�i�u hũa d�ơng tớnh, trong khi s� �i�u hũa õm tớnh ���c g�i ý là ��i v�i s� kớch thớch t�ng h�p cho CYP 101A c�a P. Putida b�i camphor. Nh�ng h� th�ng t�ơng ��i �ơn gi�n này cú th�cung c�p

Nguy�n Th�Ng�c Dao 134 nh�ng mụ hỡnh h�u ớch cho vi�c gi�i thớch cơ ch� �i�u hũa bi�u hi�n cỏc gen Cyt-P450 ��ng v�t. 5.2. Nh:ng Cyt-P450 1 ;c kớch thớch t>ng h;p b@i thuAc M�t s� nhúm c�a ��i gia �ỡnh Cyt-P450 và cơ ch�t c�a chỳng v�n ch�a���c bi�t rừ. Nh�ng enzym này th�hi�n ho�t tớnh oxy húa m�nh ��i v�i nh�ng h�p ch�t t�bờn ngoài và chỳng ���c g�i m�t

cỏch quy ��c là nh�ng enzym chuy�n hoỏ thu�c. Núi chung, nh�ng lo�i Cyt-P450 này bi�u hi�n tớnh ��c hi�u

r�ng��i v�i nh�ng cơch�t khỏc nhau c�a riờng chỳng, trong m�t s�

tr��ng h�p cú s� trựng l�p gi�a chỳng v�i nhaụ Theo thu�t ng�

m�i�õy ���c��ngh�b�i Nebert và cs, chỳng ���c x�p lo�i vào gia

�ỡnh Cyt-P450 1,2,3. H�u h�t nh�ng lo�i Cyt-P450 này là nh�ng enzym cú kh� n�ng ���c t�ng h�p c�m �ng. S� t�ng h�p m�t s�

l��ng Cyt-P450 ���c c�m �ng m�t cỏch ��c bi�t � ��ng v�t thớ nghi�m b�ng vi�c cho thờm cỏc húa ch�t. Nh�ng húa ch�t nh�PB, 3-MC, 2,3,7,8- TCĐ, pregnenolon 16x-carbonnitrile (PCN), ethanol, polychlorinated biphenyl (PCB), isosafrole, clofibrate và nh�ng ch�t khỏc ���c bi�t là nh�ng ch�t cú kh� n�ng kớch thớch t�ng h�p ��i v�i nh�ng d�ng Cyt-P450 ��c bi�t. �ó cú nh�ng nghiờn c�u và cụng b� v� vi�c s� d�ng nh�ng ch�t �c ch� phiờn mó và d�ch mó. H�th�ng d�ch mó in vitro cho th�y cú s�t�ng ho�t tớnh c�a nh�ng d�ng khỏc nhau c�a Cyt-P450, trong �a s� tr��ng h�p d�n t�i t�c �� t�ng c�a s� t�ng h�p sinh h�c nh�ng ph�n t�

Cyt-P450, cỏi này cú th� ���c gi�i thớch b�i s�phỏt tri�n trong s� �ỏp �ng mRNA � nh�ng t� bào ���c x� lý v�i cỏc ch�t gõy t�ng h�p c�m �ng. Kh� n�ng c�a cDNA ho�c DNAsgenom c�a nh�ng Cyt-P450 khỏc nh�là m�u lai �ó cung c�p ch�ng c�tr�c ti�p v�s�

t�ng n�ng �� c�a mRNA ��i v�i nh�ng phõn t� Cyt-P450 cú th� ���c t�ng h�p c�m �ng và hơn n�a bi�u hi�n r�ng s� t�ng phiờn mó cỏc gen Cyt-P450 là �ỏp �ng ��u tiờn cho s� sinh t�ng h�p, m�c dự trong m�t s�tr��ng h�p, �� b�n c�a mRNA �úng m�t vai trũ to l�n.

Vi�c tỏch cỏc gen Cyt-P450 và ph�ơng phỏp di truy�n ng��c (reverse genetics) �ó gúp ph�n �ỏng k� vào quỏ trỡnh tỡm hi�u cơ

ch� �i�u hũa nh�ng gen Cyt-P450 cú th� ���c kớch thớch t�ng h�p b�i thu�c�m�c��phõn t�.

Ch ng V. Nh�ng gen Cyt-P450 và s�bi�u hi�n c�a chỳng 135

Một phần của tài liệu Ebook cytochrome p450 phần 2 PGS TS nguyễn thị ngọc dao (Trang 53 - 56)