- Cỏc sqc t# Cỏc phõn t S b e o v !
5.2.2.Cỏc gen Cyt-P450b và c (P4502B1 và 2B2)
NH NG GEN Cyt-P450 VÀ S BIU HIN C A CHÚNG
5.2.2.Cỏc gen Cyt-P450b và c (P4502B1 và 2B2)
Ng��i ta bi�t rừ r�ng vi�c tiờm PB cho chu�t c�ng gõy ra m�t s�
ho�t húa phiờn mó nhanh chúng gen Cyt-P450b và c. Tuy nhiờn, cơ
ch� v�s� �i�u hoà c�a hai gen này v�n cũn ớt ���c bi�t. �õy cú l�
là do khụng cú m�t dũng t�bào u gan �n ��nh mà trong �ú s�bi�u hi�n c�a hai gen này cú th� ���c kớch thớch c�m�ng, làm cho vi�c thu ���c thụng tin v�trỡnh t� �i�u hoà ��i v�i s�bi�u hi�n c�m�ng g�p khú kh�n. Hơn n�a, v�n ch�a rừ là li�u cỏc ch�t c�m �ng nh�
PB và PCB cú th� hi�n �nh h��ng kớch thớch t�ng h�p c�a chỳng qua m�t receptor hay khụng.
Nh�ng c�u trỳc gen c�a Cyt-P450b và c là r�t t�ơng t�ngo�i tr� ��i v�i intron ��u tiờn, cỏi này dài hơn nhi�u trong Cyt-P450b (kho�ng 12kb) so v�i trong Cyt-P450c (kho�ng 3.2kb). Trỡnh t�
nucleotid trong t�t c� 9 exon và vựng flanking c�a chỳng trong nh�ng intron th�hi�n s�t�ơng t�r�t l�n gi�a hai gen Cyt-P450. S�
t�ơng t� cao trong trỡnh t� c�ng ���c m� r�ng ra ��i v�i nh�ng vựng promoter c�a hai gen, v�i s�xen vào rừ ràng c�a m�t trỡnh t�
CA nh�c l�i 19 l�n trong gen Cyt-P450c. M�c dự cú s�t�ơng t�cao v� trỡnh t�, nh�ng nh�ng khỏc bi�t rừ r�t �ó ���c quan sỏt th�y trong s� bi�u hi�n c�a chỳng. Cyt-P450c ���c bi�u hi�n liờn t�c trong gan, nh�ng khụng th�y cú bi�u hi�n trong ph�i, th�n ho�c tinh hoàn khi x� lý v�i cỏc ch�t c�m �ng. Hơn n�a, Cyt-P450c ���c bi�u hi�n m�t cỏch liờn t�c trong ru�t non, nh�ng s�bi�u hi�n c�a nú khụng t�ng trong t� ch�c khi x� lý v�i PB. Ng��c l�i Cyt- P450b ���c bi�u hi�n r�t hi�m�gan, nh�ng ���c bi�u hi�n liờn t�c
�ph�i và tinh hoàn. X�lý ��ng v�t thớ nghi�m v�i PB làm t�ng s�
bi�u hi�n c�a nú trong gan, nh�ng khụng t�ng � ph�i ho�c tinh hoàn. Trong ru�t non, Cyt-P450b mRNA ���c phỏt hi�n r�t ớt. Khi
Nguy�n Th�Ng�c Dao
140
x� lý v�i cỏc ch�t c�m �ng nh� PB và PCB, mRNA c�a nú t�ng m�t cỏch �ỏng k�.
M�i �õy, h� th�ng phiờn mó in vitro �ó ���c s� d�ng �� xỏc
��nh v�trớ c�a trỡnh t� �i�u hoà c�c b� ��i v�i s�bi�u hi�n c�a gen Cyt-P450b và Cyt-P450c. Trỡnh t� �i�u hoà ch� y�u ���c th� hi�n trong nucleotid-179 c�a vựng 5’- upstream. Phõn tớch s� d�ch chuy�n trong gel cho th�y r�ng d�ch chi�t nhõn t� gan chu�t ���c x� lý b�ng phenobarbital (PB) ch�a nh�ng y�u t� liờn k�t DNA, nh�ng y�u t� này g�n m�t cỏch ��c hi�u vào trỡnh t� t� -179 ��n +29 bp, làm gi�m��chuy�n d�ch �i�n di c�a�o�n DNẠ S�cú m�t c�a y�u t�liờn k�t DNA trong nhõn ���c cụng b�là ph�thu�c m�t cỏch ��c hi�u do s�x�lý v�i PB. Phõn tớch footprinting b�i DNase I cho th�y trỡnh t� ���c b�o v� b�i y�u t�nhõn trỏnh kh�i s�tiờu húa b�i DNase I �� thành cỏc �o�n dài 34 bp, t� -89 ��n -56bp. B�ng ���c b�o v� này �ó ���c phỏt hi�n là ch�a m�t trỡnh t� (13 nucleotid t�ơng �ng trong s� 16 nucleotid) r�t gi�ng v�i trỡnh t�
BTE trong trung tõm c�a �o�n DNA, m�t trỡnh t� �i�u hoà d�ng ho�t ��ng cis���c tỡm th�y trong gen Cyt-P450c �ó���c t�ng h�p c�m �ng b�i MC. M�i �õy, Sogawa và cs. phỏt hi�n r�ng trỡnh t�
này c�a gen Cyt-P450b/Cyt-P450c cú ch�c n�ng th�c s�nh�là m�t ch�t làm t�ng phiờn mó khụng k� ��n s� x� lý v�i PB và s� tranh ch�p v�i trỡnh t�BTE c�a y�u t�liờn k�t DNA, g�i ý r�ng m�t y�u t� �i�u hũa tham gia vào s�phiờn mó 2 gen Cyt-P450 v�i ki�u�i�u hũa phiờn mó khỏc nhaụTrong tr��ng h�p gen Cyt-P450c, 1 XRE trỡnh t�cis-acting thờm vào và y�u t�trans- acting cựng ngu�n g�c cung c�p kh� n�ng c�m �ng t�ng h�p ��c hi�u v�i ch�t c�m �ng cho gen. V�i trỡnh t�t�-89 bp ��n -56 bp �ó ���c cụng b� là �ỏp
�ng cho s�th�hi�n c�m �ng c�a gen Cyt-P450b khi x�lý v�i PB, nú ���c g�i ý r�ng khụng ch� protein liờn k�t BTE, mà m�t y�u t�
gõy c�m�ng ��c hi�u c�ng t�ơng tỏc v�i trỡnh t�nàỵ Protein �i�u hoà c�ng ph�i ���c �i�u hoà b�i hemin nh� trong cụng b� c�a Dwarki và cs. V�n �� cũn l�i là v�n ph�i xem xột li�u cú trỡnh t�
nào khỏc �ỏp �ng ��c hi�u cho s� t�ng h�p c�m�ng b�i thu�c�
trong nh�ng vựng tr��c c�a gen hay khụng.