- Đã được chẩn đoán đái tháo đường thể 2 Không đồng ý tham gia nghiên cứu.
2.2.1.7. Phương pháp định lượng các thành phần lipid máu
- Chuẩn bị đối tượng: chọn nhóm chứng và nhóm nghiên cứu. Thông báo cho bệnh nhân biết thời gian và qui trình tiến hành xét nghiệm.
Đối tượng nghiên cứu nhịn đói và được lấy máu tĩnh mạch đúng quy cách để định lượng thành phần lipid máu cùng với thời điểm lấy máu tĩnh mạch để định lượng glucose máu. Các xét nghiệm được thực hiện trên máy Olympus AU640 (Hình 2.2) tại Khoa Sinh Hóa, Bệnh viện Trung ương Huế.
- Nguyên lý:
+ Nguyên lý định lượng cholesterol toàn phần: cholesterol ester huyết thanh được thủy phân bởi cholesterol esterase (CHE). Cholesterol tự do tạo ra sẽ bị oxy hóa bởi cholesterol oxidase (CHO) để tạo thành cholest-4-en-3-one và hydrogen peroxide (H2O2). H2O2 sẽ kết hợp với 4-aminoantipyrin và phenol với sự hiện diện của peroxidase để tạo thành chất quinoneimin. Chất quinoneimin có màu đỏ được đo bằng máy đo quang phổ ở bước sóng 540/600nm. Đơn vị biểu thị: mmol/l [8], [150].
+ Nguyên lý định lượng triglycerid máu: triglycerid được thủy phân bởi lipase để tạo ra glycerol và các acid béo. Sau đó glycerol được phosphoryl
hóa bởi adenosin triphosphat ATP cùng với glycerol kinase (GK) tạo thành glycerol-3-phosphat. Glycerol-3-phosphat bị oxy hóa với sự hiện diện của glycerol phosphat oxidase (GPO) tạo thành H2O2 và dihydroxyaceton phosphat. H2O2 kết hợp với p-chlorophenol và 4-aminoantipyrin (4AAP) dưới sự xúc tác của peroxidase để tạo ra quinoneimin có màu đỏ và được đo bằng máy quang phổ ở bước sóng 500 nm. Đơn vị biểu thị: mmol/l [8], [150].
+ Nguyên lý định lượng HDL cholesterol máu: thử nghiệm bao gồm 2 pha riêng biệt. Trong pha 1, cholesterol tự do trong các lipoprotein không HDL được hòa tan và dưới tác dụng của cholesterol oxidase (CO), peroxidase và DSBmT sẽ tạo ra một sản phẩm không màu. Trong pha 2, một chất tẩy đặc hiệu cho HDL làm hòa tan HDL-lipoprotein. HDL cholesterol được phóng thích sẽ phản ứng với cholesterol esterase, cholesterol oxidase và hệ thống chromogen để tạo ra một phức hợp màu xanh dương và được đo bằng máy quang phổ ở bước sóng 600/700nm. Đơn vị biểu thị: mmol/l [8], [150].
+ Nguyên lý định lượng LDL-cholesterol máu: thử nghiệm bao gồm 2 pha riêng biệt. Trong pha 1, chất tẩy đặc biệt hòa tan cholesterol từ các hạt lipoprotein không LDL. Dưới tác dụng của cholesterol esterase, cholesterol oxidase, peroxidase và 4-aminoantipyrin (4-AAP), cholesterol sẽ tạo ra một sản phẩm cuối không màu. Trong pha 2, một chất tẩy thứ hai sẽ giải phóng cholesterol ra khỏi các LDL-lipoprotein. Cholesterol được phóng thích sẽ phản ứng với cholesterol esterase, cholesterol oxidase và hệ thống chromogen để tạo ra một phức hợp màu xanh dương và được đo bằng máy quang phổ ở bước sóng 540/660nm. Đơn vị biểu thị: mmol/l [8], [150].
- Kỹ thuật: định lượng các thành phần lipid máu được thực hiện trên máy Olympus AU640, gồm các bước tiến hành:
+ Nhịn ăn khoảng 10-12 giờ, trước khi lấy máu làm vào buổi sáng. + Đối tượng được lấy 2ml máu tĩnh mạch, để đông tự nhiên.
+ Bảo quản mẫu nghiệm ở nhiệt độ 0- 40C, không lưu giữ quá 2 ngày. + Ly tâm tại chỗ, tách huyết thanh để định lượng
+ Định lượng các thông số: cholesterol, triglicerid, HDL- C + LDL- C được tính theo công thức FriedWald:
LDL- C = CT- TG/2,2 (mmol/l) hoặc LDL- C = CT- TG/5 (mmol/dl) Với điều kiện triglycerid < 4,6 mmol/l hay < 400 mg/dl [32].