- Đã được chẩn đoán đái tháo đường thể 2 Không đồng ý tham gia nghiên cứu.
2.2.1.6.Phương pháp định lượng insulin máu
- Nguyên tắc định lượng insulin máu được Yalow và Beson đề ra năm 1955 và được áp dụng cho đến nay.Việc định lượng insulin dựa trên sự tranh chấp giữa insulin được đánh dấu I125 và insulin chuẩn (ống mẫu) hay insulin của bệnh nhân (trong ống huyết tương của bệnh nhân). Với một số lượng giới hạn các vị trí kháng thể kháng insulin. Kháng thể kháng insulin và insulin mẫu (hay insulin chuẩn) được cho kết hợp với nhau trước khi ủ với insulin đánh dấu I125. Sau thời kỳ ủ, lượng insulin đánh dấu thừa ra được rửa đi. Lượng insulin được đánh dấu gắn kết với kháng thể tỷ lệ nghịch với lượng insulin không đánh dấu hiện diện trong máu của bệnh nhân.
- Chuẩn bị đối tượng: chọn nhóm chứng và nhóm nghiên cứu. Thông báo cho bệnh nhân biết thời gian và qui trình tiến hành xét nghiệm.
- Kỹ thuật: Định lượng insulin máu bằng phương pháp miễn dịch điện hóa phát quang ECLIA dựa trên nguyên lý sandwich bằng máy Cobas 6000 (Hình 2.2, Hình 2.3). Sử dụng 2 kháng thể đơn dòng đặc hiệu insulin người. Thời gian xét nghiệm: 18 phút, đơn vị biểu thị (µU/ml), gồm các bước:
+ Tất cả đối tượng được lấy máu chi trên vùng cẳng tay. + Lượng máu lấy 2,5ml, không cần chống đông.
+ Quay ly tâm 3000 vòng/ phút để tách huyết thanh.
+ Thời điểm lấy máu để định lượng insulin cùng lúc với glucose.
+ Mẫu nghiệm máu được tiến hành phân tích trên máy Cobas 6000, trong cùng ngày.
- Nguyên lý: Mẫu nghiệm được ủ lần thứ nhất: insulin của mẫu máu được ủ với kháng thể đơn dòng kháng insulin được biotinyl hóa và kháng thể đơn dòng kháng insulin được gắn với phức hợp ruthenium để tạo thành một phức hợp kiểu sandwich. Mẫu nghiệm được ủ lần thứ hai: sau khi được thêm các vi hạt có phủ chất streptavidin, phức hợp nói trên được cố định ở pha rắn bởi cầu nối streptavidin-biotin. Hỗn hợp phản ứng được hút đến máy đo, các vi hạt bị giữ lại ở bề mặt điện cực bởi nam châm. Các mảnh tự do được loại bỏ bởi ProCell. Điện thế của điện cực tạo ra sự phát quang và được đo bởi máy đo ánh sáng. Kết quả được xác định bằng đường biểu diễn chuẩn độ được xác định bằng mã vạch của thuốc thử và được chia thành 2 điểm.
- Dùng chỉ số I0, I2 lần lượt để phản ánh nồng độ insulin máu lúc đói và 2 giờ sau nghiệm pháp dung nạp glucose.
- Giá trị mong đợi của IO theo máy là 3 - 17 µU/ml [8], [28].
Hình 2.3. Màn hình hiển thị các thông số và kết quả của máy Cobas 6000