K. pneumoniae thường gây viêm phổi, gây NKH, viêm màng não, áp xe gan, nhiễm khuẩn đường tiết niệu, Nhiễm khuẩn do pneumoniae còn hay
2.4.4.1. Phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán trong thạch (kỹ thuật Kirby-Bauer)
thuật Kirby-Bauer)
Với các chủng K. pneumoniae đã được kiểm tra mức độ kháng kháng sinh bằng phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán trong thạch (kỹ thuật Kirby-Bauer) [42].
* Nguyên lý: các chủng vi khuẩn khác nhau có mức độ nhậy cảm với các loại kháng sinh khác nhau, biểu hiện của sự khác nhau bằng đường kính vùng ức chế xung quanh khoanh giấy kháng sinh khi có sự tiếp xúc giữa vi khuẩn với kháng sinh.
+ Thạch Mueller - Hinton, để tủ ấm khoảng 15 phút cho khô mặt thạch trước khi làm kháng sinh đồ;
+ Chủng vi khuẩn thuần khiết được nuôi cấy sau 18 - 24 giờ;
+ Khoanh giấy kháng sinh các loại, để ở nhiệt độ phòng 30 phút trước khi sử dụng.
* Các bước tiến hành:
+ Pha loãng vi khuẩn: dùng que cấy vô trùng chấm vào ít nhất ba điểm trên mặt thạch nghiêng có vi khuẩn hoặc 5 khuẩn lạc thuần chủng trên thạch đĩa, hòa tan vào ống nghiệm có chứa sẵn 1ml nước muối sinh lý vô trùng. Lắc đều bằng máy lắc Vortex. So với độ đục chuẩn Mc Faland 0.5 bằng máy đo độ đục, độ đục này tương đương 108 CFU/ml (Colony Forming Unit);
+ Ria cấy vi khuẩn: dùng que tăm bông vô trùng nhúng vào hỗn dịch 108 CFU/ml vi khuẩn. Ép nhẹ tăm bông lên thành ống nghiệm cho bớt nước. Ria đều hỗn dịch vi khuẩn lên mặt thạch bằng cách vừa ria vừa xoay que tăm bông;
+ Đặt khoanh giấy kháng sinh theo quy định: mỗi khoanh cách nhau tối thiểu 2 cm và khoanh giấy cách thành đĩa tối thiểu 1 cm;
+ Để đĩa kháng sinh đồ ở nhiệt độ phòng 30 phút cho kháng sinh khuếch tán đều ra môi trường, sau đó để tủ ấm 350C qua đêm.
* Đọc kết quả: dùng thước chuẩn đo đường kính vùng ức chế (không có vi khuẩn mọc) tính theo mm, đối chiếu với hướng dẫn của CLSI để xác định mức độ nhạy cảm của K. pneumoniae với từng loại kháng sinh [42].
+ Lưu ý khi đọc kết quả:
- Khi thử mức độ nhậy cảm của kháng sinh nhóm sulfamide (co- trimoxazole, sulfisomidine...) với K. pneumoniae thì không cần để ý đến những khuẩn lạc mọc thứ phát trong vùng bị ức chế. Đường kính vùng ức chế được đo từ danh giới bị ức chế rõ nét nhất.
- Để đảm bảo tính chính xác thử nghiệm độ nhạy cảm của kháng sinh với chủng vi khuẩn phân lập được phải tiến hành thử nghiệm song song hàng tuần với các chủng chuẩn quốc tế [13], [42].