8 Hút 10µl sản phẩm PCR chạy điện di gel bằng agarose 1,5% sau đó phân tích và giải thích kết quả
4.1.1.1.Phân bố tỷ lệ K.pneumoniae theo các loại bệnh phẩm
Trong đề tài nghiên cứu này chúng tôi đã sử dụng hệ thống cấy máu tự động BACTEC 9050 – 9120 để nuôi cấy, phân lập vi khuẩn căn nguyên gây bệnh của những trường hợp lâm sàng nghi ngờ nhiễm khuẩn huyết. Hệ thống này có thể phát hiện được ngay khi vi khuẩn phát triển thường chỉ từ 4 giờ đến 24 giờ hoặc 48 giờ sau khi ủ chai cấy máu, như vậy thời gian đã được rút ngắn hơn so với phương pháp cấy thông thường. Đồng thời chúng tôi sử dụng hệ thống máy định danh vi khuẩn tự động VITEK 2 – Compact để định danh vi khuẩn từ bệnh phẩm máu, các loại bệnh phẩm khác và làm kháng sinh đồ. Thời gian để định danh vi khuẩn thường mất từ 6 giờ đến 18 giờ. Việc chẩn đoán sớm căn nguyên gây nhiễm khuẩn là rất cần thiết, giúp cho các thầy thuốc lâm sàng điều trị kịp thời, làm giảm biến chứng, giảm tỷ lệ tử vong cho bệnh nhân, giảm chi phí và ngày nằm điều trị góp phần làm giảm tính kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn gây bệnh.
Trong đề tài nghiên cứu này chúng tôi đã sử dụng 166 chủng K. pneumoniae được phân lập và lưu giữ ở tủ lạnh âm 200C tại khoa xét nghiệm Bệnh viện Bệnh nhiệt đới Trung ương. Từ 1/2009 đến tháng 12/2011, nhóm nghiên cứu cùng tập thể cán bộ nhân viên khoa xét nghiệm Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương tiếp tục được phân lập được 371 chủng K. pneumoniae
từ các loại bệnh phẩm của bệnh nhân nằm điều trị tại Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương.
Từ 537 chủng K. pneumoniae phân lập được ở các loại bệnh phẩm, cho thấy tỷ lệ nuôi cấy phân lập vi khuẩn K. pneumoniae cao hay thấp còn phụ thuộc vào nhiều yếu tố. Ví dụ như đối với bệnh phẩm cấy máu, những yếu tố
cơ bản ảnh hưởng lớn tới kết quả như: như thời điểm chỉ định cấy máu, đối tượng bệnh nhân, bệnh nhân đã dùng hay chưa dùng kháng sinh, kinh nghiệm của phòng xét nghiệm, chất lượng các môi trường nuôi cấy, phân lập vi khuẩn. Hoặc đối với bệnh phẩm đường hô hấp dưới muốn phân lập được vi khuẩn gây bệnh thì phải lấy được đờm, lấy tại thời điểm khi bệnh nhân mới nhập viện và chưa dùng kháng sinh là tốt nhất v.v…
Tùy từng đối tượng nghiên cứu, từng vùng và thời gian khác nhau thì tỷ lệ nuôi cấy phân lập vi khuẩn K. pneumoniae cũng có sự khác biệt giữa các bệnh viện, các quốc gia cũng khác nhau. Trong một nghiên cứu về NKH do vi khuẩn Gram âm ở Berlin - Đức, Geerdes H.F. và CS. đã nhận thấy: trong 10 năm (1979 - 1989), tỷ lệ nhiễm khuẩn do Klebsiella spp là 5,5%[52].
Ở Đài Loan, theo báo cáo tổng kết của Wang J. H. và CS. cho biết: trong số 182 trường hợp áp xe gan (từ năm 1990 đến năm 1996) được cấy từ bệnh phẩm máu và mủ, trong đó có 160 trường hợp được xác định nguyên nhân do K. pneumoniae chiếm 89%, chủ yếu là các trường hợp nhiễm khuẩn xảy ra trên bệnh nhân bị bệnh đái tháo đường. Tỷ lệ tử vong trong nhóm này lên tới 41% [98]. Theo Wen-Chien K. và CS. đã thực hiện một nghiên cứu trong thời gian 2 năm (1/1996 - 12/1997), với mạng lưới liên kết của 12 bệnh viện ở nhiều nước khác nhau, trên 440 bệnh nhân bị NKH do K. pneumoniae
với 445 mẫu bệnh phẩm cấy máu dương tính. Kết quả cho biết: tỷ lệ cấy máu dương tính ở Đài Loan là 68%, 43% ở Mỹ, 39% ở Úc, 34% ở Nam phi, 22% ở châu Âu và 17% ở Ác-hen-ti-na [99].
Victor L. Y. cùng CS. nghiên cứu (2007) tại 7 quốc gia đã thu thập được 455 chủng vi khuẩn K. pneumoniae phân lập từ bệnh phẩm máu trên bệnh nhân viêm phổi cộng đồng, áp xe gan, viêm màng não, viêm nội nhãn. Trong đó có
94% số các chủng K. pneumoniae gây viêm phổi và 100% chủng gây áp xe gan phân lập được ở Đài Loan và Nam Phi [97].
Theo Nikolay P. B. và CS. nghiên cứu tại Mỹ (1999-2010) cho thấy, có 14,7% trường hợp bệnh phẩm máu phân lập được K. pneumoniae, 21% trường hợp phân lập được K. pneumoniae ở bệnh phẩm đường hô hấp dưới và 25,5% trường hợp phân lập K. pneumoniae ở bệnh phẩm mủ [79]. Nghiên cứu tại Đài Loan năm 2008 của tác giả Chen-Hsiang L. tỷ lệ K. pneumoniae phân lập từ bệnh phẩm máu (58,2%), nước tiểu (19,8%), mủ (7,7%), đờm (5,5%), dịch não tủy (4.4%) và dịch màng bụng (4.4%) [38].
Năm 2012 tại bệnh viện Shahrekord ở Iran, tác giả Hadis A. nghiên cứu tỷ lệ chủng K. pneumoniae phân lập được từ các mẫu bệnh phẩm là 88,71%, trong đó bệnh phẩm nước tiểu tỷ lệ dương tính là 94,89%, máu (89,47%), dịch não tủy (71,42%), mủ (96%), đờm (94,44%), catheter 80%, dịch màng bụng (46,15%) và dịch mắt (60%) [58]. Một nghiên cứu khác cũng tại Iran (năm 2012-2013) của tác giả Majid H. tỷ lệ K. pneumoniae phân lập được trong mẫu bệnh phẩm nước tiểu là 52,5 %, máu (22,5%), mủ (2,5%), từ vết bỏng (5%), dịch họng (2,5%), các bệnh phẩm khác (10%) [72]. Tác giả Ravichitra K. N. và CS. nghiên cứu tại Ấn Độ năm 2013-2014 cho thấy, tỷ lệ
K. pneumoniae phân lập được ở bệnh phẩm mủ là 69,1%, đờm (67,9%) và nước tiểu (50,7%) [83]. Nghiên cứu của tác giả Savita J. năm 2006-2011 tại Chicago, tỷ lệ vi khuẩn K. pneumoniae phân lập từ bệnh phẩm máu là 25,7%, nước tiểu (24,4%), đờm (20,9%), mủ (21,8%) và dịch (7,1%) [85]. Trong nghiên cứu của chúng tôi, tỷ lệ phân lập được K. pneumoniae từ bệnh phẩm máu chiếm 25,0% (bảng 3.1, trang 63), kết quả này tương tự kết quả nghiên cứu của tác giả Savita J. trong giai đoạn 2006-2011 [85].
Nghiên cứu tại Bệnh viện Beijing S. ở Trung Quốc giai đoạn 2008- 2011 của tác giả Jing W. cho thấy, tỷ lệ phân lập chủng K. pneumoniae ở bệnh phẩm mủ chiếm 77,10% [63].
Tuy nhiên nghiên cứu của chúng tôi tỷ lệ phân lập được K. pneumoniae
từ bệnh phẩm máu thấp hơn kết quả nghiên cứu ở một số nước như Ấn Độ, Iran, Đài Loan, Mỹ, Úc và Nam phi [58], [79]. Nhưng tỷ lệ này cao hơn so với châu Âu và Ác-hen-ti-na, còn trong nước cũng cao hơn nghiên cứu của tác giả Ngô Thị Thi năm 1990, tỷ lệ này là 10,80%; của Lê Thị Thu Thảo nghiên cứu giai đoạn 1995-2000 là 28,3%; nghiên cứu tại Bệnh viện Bạch Mai giai đoạn 2004-2005 là 11,6%; nghiên cứu tại Bệnh viện Nhi Đồng 2 năm 2007 (8,47%) và Bệnh viện Nhân dân Gia định giai đoạn 2007-2008 là 26% [1], [20], [21], [23], và [79].
Phân bố tỷ lệ K. pneumoniae trong bệnh phẩm đờm (59,6%) (bảng 3.1, trang 63) cao hơn nghiên cứu của tác giả Savita J. năm 2006-2011 [71] nhưng lại thấp thấp hơn so với tác giả Hadis A. nghiên cứu tại Iran [58]. Tỷ lệ phân bố K. pneumoniae ở bệnh phẩm mủ là 7,1% và các bệnh phẩm khác dao động từ 0,4% đến 3,4% (bảng 3.1, trang 63), kết quả nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn nghiên cứu của Hadis A. nghiên cứu tại Iran, Chicago giai đoạn 2006- 2011 và Trung Quốc năm 2008-2011[58], [63], [85].