P. ñoaïn N ñoaïn MP
3.5.5. Khaûo saùt söï chieát taùch naringin treân coät SPE pha thuaän
Điều kiện tiến hành:
- Cột SPE pha thuận, 500 mg silica gel, cỡ hạt 0,055 mm, thể tích 3 ml
- Hệ dung môi rửa cột: CHCl3 – MeOH (9 : 1), CHCl3 – MeOH (8 : 2) và MeOH
- Chuẩn bị mẫu và nạp mẫu:
Dịch chiết methanol toàn phần của 1 g vỏ Bưởi được cô bớt dung môi, cho
1
vào bình định mức 50 ml, bổ sung MeOH vừa đủ. Lấy 0,25 ml dịch cho lên cột SPE, để dịch chiết thấm đều vào trong silica gel, làm khô dung môi bằng cách hút chân không trong 10 phút.
- Rửa giải:
Phân đoạn 1: Dung môi CHCl3 - MeOH (9:1); thu phân đoạn kém phân cực; thể tích hứng lần lượt là 10 ml, 5 ml, 5 ml.
Phân đoạn 2: Dung môi CHCl3 - MeOH (8:2); thu phân đoạn giàu naringin; thể tích hứng lần lượt là 10 ml, (5ml × 7 lần).
Phân đoạn 3: Dung môi MeOH, thu tạp phân cực
Cô các dịch hứng đến cắn, hòa trong một lượng MeOH tương ứng với thể tích ban đầu. Quét phổ UV từ 200 – 400 nm (H.3.31). Tính hàm lượng tạp (phân đoạn 1 và 3) theo naringin và hàm lượng naringin ở phân đoạn 2 theo đường cong chuẩn.
Tiến hành khảo sát trên 3 cột SPE, kết quả được ghi trong bảng 3.26
Bảng 3.26. Hàm lượng naringin ở các lần hứng của phân đoạn 2
Thể tích hứng (ml)
Hàm lượng naringin (%)
Cột SPE 1 Cột SPE 2 Cột SPE 3
10 89,73 89,01 91,87 5 8,47 8,08 5,87 5 0,97 1,41 1,39 5 0,32 0,55 0,33 5 0,21 0,31 0,21 5 0,14 0,22 0,14 5 0,09 0,22 0,12 5 0,07 0,20 0,07 Nhận xét:
- Ở phân đoạn 2, khi dùng đến 35/45 ml dung môi thì đã thu được 99,8% naringin; đến 40/45 ml là 99,9%. Nếu dùng thêm 5 ml cuối thì chỉ thu được 0,1% so với tổng lượng naringin. Do đó, chỉ cần dùng 40 ml hỗn hợp dung môi là đã đủ để chiết kiệt naringin. (H.3.31)