CHÖÔNG 3: KEÁT QUAÛ 3.1 XAÙC ÑÒNH MAÃU NGHIEÂN CÖÙU
3.2.1.4. Tinh cheá vaø thuûy phaân flavonoid chieát töø voû Böôûi Tinh cheá
Tinh chế
Thăm dò dung môi kết tinh: Hoà tan 1g flavonoid chiết từ vỏ Bưởi (thu từ các
phương pháp chiết trên) vào 30ml hỗn hợp cồn 96% - nước ở các tỉ lệ khác nhau: 1:1, 1:2, 1:3 và để qua đêm. Kết quả cho thấy các tinh thể hình kim xuất hiện ở hỗn hợp cồn 96% - nước (1: 3). Do đó tỉ lệ này được chọn để kết tinh các mẫu sau này.
Tinh chế: Hòa tan 15g flavonoid thô của vỏ Bưởi trong 400ml hỗn hợp cồn 96% -
nước (1:3), thêm một ít than hoạt và đun trong 5 phút. Lọc và để kết tinh trong 12 giờ. Lọc lấy tinh thể, rửa bằng nước cất lạnh và kết tinh lại 3 lần nữa. Cuối cùng để các tinh thể khô ở nhiệt độ phòng rồi sấy ở 60 OC cho đến khối lượng không đổi. Hiệu suất tinh chế là 80% (12g). Độ tinh khiết 98-99% (HPLC). Mẫu tinh chế này được ký hiệu là NAR, được kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng và được sử dụng để xác định các hằng số vật lý và các loại phổ sau này.
Thủy phân
Điều kiện thủy phân: Hòa tan 3g NAR trong 200ml hỗn hợp dung môi MeOH -
HCl 2N (1:1) trong một bình cầu 500ml và đun hồi lưu cách thủy ở 100 OC trong 3 giờ. Thu hồi methanol bằng cô giảm áp đến khi còn khoảng 100ml. Để kết tinh trong 12giờ. Lọc, rửa các tinh thể bằng nước cất lạnh cho đến khi nước rửa có pH trung tính. Sấy khô ở 60 OC, thu được (0,90g). Hiệu suất thủy phân là 60% (so
với lý thuyết).
Tinh chế: Hòa tan sản phẩm thủy phân (0,90g) trong 25ml methanol, thêm một ít
than hoạt và đun hồi lưu cách thủy trong 10 phút, lọc nóng và để kết tinh trong 12 giờ. Lọc, rửa tinh thể bằng MeOH lạnh. Sấy khô ở 60 OC rồi làm khô tiếp
trong bình hút ẩm. Sản phẩm thủy phân được ký hiệu là NAG, được kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký và được sử dụng để đo các hằng số vật lý và các loại phổ sau này.