UV 365, 254 nm và dung dịch Sắt (III) clorid 1% / cồn). Nhận xét:
Sắc ký đồ cho thấy hệ (1) thích hợp cho việc loại tạp kém phân cực, hệ (2) dùng để tách phân đoạn giàu naringin và MeOH được dùng để đẩy các tạp phân cực mạnh hơn naringin.
Thăm dò bằng sắc ký cột
- Sắc ký cột được thực hiện trên buret 25 ml, d = 1cm; nạp 1g silica gel Merck, cỡ hạt 0,015 - 0,040 mm theo phương pháp nạp cột khô; mẫu phân tích là 20 mg cao MeOH toàn phần của vỏ Bưởi, được hoà trong 1 lượng tối thiểu MeOH, trộn đều với 0,2 g silica gel, bốc hơi trên cách thủy thành 1 dạng bột
tơi xốp, đồng nhất; hệ dung môi lần lượt là CHCl3 – MeOH (9:1), CHCl3 – MeOH (8 :2) và MeOH; tốc độ dung môi là 0,2 ml/phút.
- Tách riêng, kiểm tra 3 phân đoạn bằng SKLM và phổ UV
Phân đoạn kém phân cực (LP) được đẩy bằng hệ CHCl3 – MeOH (9:1), Phân đoạn giàu naringin (N) được đẩy ra bằng hệ CHCl3 – MeOH (8 : 2), Phân đoạn phân cực mạnh hơn naringin (MP) được đẩy ra bằng MeOH Ba phân đoạn trên được cô đến cắn, hoà lại trong 25 ml MeOH và đem quét phổ UV từ 200 – 400 nm, mẫu trắng là MeOH.
- Kết quả quét phổ UV được ghi nhận trong H.3.28 và H.3.29
H.3.28. Phổ UV của 3 phân đoạn tách
từ dịch chiết vỏ Bưởi ( đã bỏ vỏ xanh)
H.3.29. Phổ UV của 3 phân đoạn tách
từ dịch chiết của vỏ Bưởi (còn vỏ xanh)
Nhận xét:
Trên phổ UV cho thấy phân đoạn naringin có dạng phổ đặc trưng của naringin, 2 phân đoạn còn lại không có dạng phổ đặc trưng và có độ hấp thu khá thấp. Tuy nhiên để ngăn ngừa hiện tượng cộng phổ làm sai lệch kết quả định lượng, việc loại tạp là cần thiết.
Khảo sát sự hấp phụ của silica gel trên mẫu định lượng