CHÖÔNG 2: VAÄT LIEÄU – PHÖÔNG PHAÙP NGHIEÂN CÖÙU 2.1 NGUYEÂN LIEÄU, TRANG THIEÁT BÒ
2.4.5. Phöông phaùp ñònh löôïng flavonoid
Dựa vào tính chất của flavonoid để chọn lựa phương pháp thích hợp:
- Phương pháp đo quang phổ UV - Vis: naringin được đo ở 283 nm, mẫu trắng là MeOH; hesperidin được đo ở 361 nm, mẫu trắng là dung dịch NaOH 0,5% trong MeOH 75%.
- Phương pháp HPLC được thực hiện trong điều kiện sau: cột pha đảo Discovery HS-C18 (250 mm x 4,6 mm, i.d; 5 µm tiểu phân), từ công ty Supelco. Pha động: acetonitril – acid acetic 0,1% trong nước (25:75, v/v), rửa giải theo chế độ isocratic. Tốc độ dòng: 1ml/phút. Nhiệt độ cột: 35 OC. Thể tích mẫu tiêm: 20 µl. Detector UV chỉnh ở 283nm.
- Phương pháp điện di mao quản (Capillary Electrophoresis - CE): Trong quá
trình khảo sát, chúng tôi đã chọn được điều kiện chạy sau đây:
Các ống mao quản mới (57 cm × 75 µm, i.d.) phải được xử lý trước khi dùng bằng cách cho chạy qua ống lần lượt 2 dung dịch: NaOH 1M trong 50 phút và NaOH 0,1M trong 10 phút. Trước khi chạy phân tích mỗi mẫu, ống mao quản còn được tráng tự động với nước khử khoáng trong thời gian 1 phút và tiếp theo với dung dịch điện giải trong thời gian 1,5 phút. Nguồn điện thế sử dụng: 20 kV
Dung dịch đệm: Borax (35mM; pH 9,4), thêm 0,03% HEC (hydroxyethyl cellulose), chạy theo mode CZE.
Detector UV: phát hiện ở bước sóng 214 nm
Điều kiện bơm mẫu: dùng áp suất nitrogen: 70 – 75 Psi trong 5 giây (tương đương 7,8 nl x 5 = 39 nl).
Nhiệt độ cột: 25 oC
Thời gian chạy cho 1 phân tích: 11 phút
định lượng phải được lọc qua đĩa lọc có kích thước 0,45 µm. Chạy theo chế độ đảo cực (Reverse of polarity)