CHÖÔNG 3: KEÁT QUAÛ 3.1 XAÙC ÑÒNH MAÃU NGHIEÂN CÖÙU
3.4.2.2. Phaân laäp caùc alcaloid chính
Phương pháp kết tinh
Tinh chế tủa alcaloid thô
Lấy 18g tủa alcaloid thô (ở 3.4.2.1), thêm 180ml MeOH, 1g than hoạt, đun hồi lưu 30 phút, lọc loại tạp bẩn. Dịch lọc được cô bớt và để yên cho kết tinh lại. Lọc, để khô, thu được 15g bột tinh thể màu trắng ngà (Kết tinh lần 1).
Thăm dò hệ dung môi kết tinh
Alcaloid từ Citrus tan mạnh trong MeOH nhưng tan ít trong nước. Do đó cơ sở để
chọn dung môi kết tinh là thăm dò 1 tỉ lệ thích hợp giữa MeOH – H2O. Trong quá trình thăm dò, 3 mẫu alcaloid kết tinh lần 1(0.1g/ mẫu), được hòa tan nóng lần lượt trong 2,5ml các hỗn hợp dung môi sau: MeOH - H2O (1: 3), MeOH - H2O (1:1) và MeOH - H2O (3:1) và theo dõi thời gian kết tinh. Kết quả được ghi ở bảng 3.17
Bảng 3.17. Kết quả thăm dò hệ dung môi kết tinh alcaloid từ Thanh bì
Hệ dung môi kết tinh Thời điểm xuất hiệân tinh thể đầu tiên
Thời gian tinh thể kết tinh hoàn toàn
MeOH - H2O (1: 3) Sau 2 giờ 8 giờ
MeOH - H2O (1:1) Sau 3 giờ 12 giờ
MeOH - H2O (3:1) Sau 5giờ 15 giờ
Nhận xét: Hệ dung môi MeOH - H2O (1: 3) cho tinh thể hình kim to, dài và thời gian xuất hiện tinh thể sớm. Do đó, hệ dung môi này được chọn để tinh chế alcaloid ở các giai đoạn sau.
Kết tinh alcaloid: Bột alcaloid tinh chế lần 1(1,5 g), được hoà trong 100 ml hỗn
hợp dung môi MeOH - H2O (1:3), đun nóng cho tan hoàn toàn, để kết tinh trong 12 giờ. Lọc lấy tinh thể, làm khô trong bình hút ẩm, thu được (0.8 g). Đặc điểm
tinh thể sau kết tinh: hình kim dài, màu trắng, được gọi là tinh thể S và chỉ cho 1 vết trên sắc ký đồ (H.3.26).
N O H O H H C H3 1 2 3 4 5 6 1 ' 2 ' 3 ' S = S y n e p h rin e