CHÖÔNG 3: KEÁT QUAÛ 3.1 XAÙC ÑÒNH MAÃU NGHIEÂN CÖÙU
3.2.2.4. Tinh cheá vaø thuûy phaân flavonoid chieát töø voû Cam Tinh cheá
Tinh chế
Flavonoid từ vỏ Cam (3g), than hoạt (0,5 g), được đun hồi lưu với methanol (1 lít) ở 100 OC trong 60 phút. Lọc nóng, cô giảm áp đến còn khoảng 200ml. Để nguội cho kết tinh từ từ. Lọc, rửa kết tinh bằng methanol đến khi nước rửa không màu. Để khô ở nhiệt độ phòng, sấy ở 60 OC cho đến khô. Kết quả thu được 2,4g chất tinh khiết được đặt tên là HES. Hiệu suất tinh chế đạt 80%. Độ tinh khiết 95-97%.
Bột vỏ Cam
Dịch lọc kiềm
Dịch lọc trung tính
Tủa flavonoid thô
Ngâm dd xút loãng /EtOH 70%, lọc
Than hoạt, lọc
Cô cách thủy Để nguội
Flavonoid tinh
Lọc, rửa nước, EtOH D. lọc đã loại tạp
DD acid sulfuric 20% → pH 6
Thủy phân
- Điều kiện thủy phân: Hòa tan 2g HES trong 1 lít hỗn hợp dung môi MeOH–
HCl đậm đặc (9 : 1) trong 1 bình cầu 2 l và đun hồi lưu cách thủy sôi trong 5 giờ. Thu hồi MeOH bằng cô giảm áp đến khi còn khoảng 250ml. Để nguội cho kết tinh, lọc, rửa tủa bằng nước lạnh cho đến khi nước rửa có pH trung tính. Sấy khô ở 60 OC; thu được 0,68 g. Hiệu suất thủy phân là 68%
- Tinh chế: Hòa tan sản phẩm thủy phân trong 25ml cồn 96%; thêm 0,1g than
hoạt và đun hồi lưu cách thủy trong 10 phút, lọc nóng, để nguội cho kết tinh. Lọc, rửa các tinh thể bằng MeOH lạnh. Sấy khô ở 60 OC. Sản phẩm thủy phân được ký hiệu là HEG, được kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng và được sử dụng để đo các hằng số vật lý và các loại phổ về sau.