Phương pháp David
Phương pháp David (1947), là một trong số những phương pháp xưa nhất và hiện vẫn được sử dụng để định lượng flavanon toàn phần trong trong Bưởi và Cam. Trong phương pháp này, dịch quả (0,5 ml) hoặc dịch chiết cồn vỏ quả (0,5 ml) được trộn với dung dịch NaOH 4N (0,5 ml) và diethylene glycol 90% (24 ml). Lắc kỹ, để trong 10 phút đối với naringin và 30 phút đối với hesperidin. Đo độ hấp thu ở 420 nm . Tiến hành song song với 1 mẫu trắng là nước cất (0,5 ml). Các mẫu đậm đặc cần được pha loãng trước khi phân tích.
Hàm lượng flavonoid toàn phần theo naringin được tính thông qua 1 đường cong chuẩn xây dựng bởi 1 dãy dung dịch naringin chuẩn có nồng độ 20, 40, 60, 80 và 100 mg / 100 ml nước. Phương pháp này được biết là không chuyên biệt nhưng đơn giản, nhanh chóng, ít tốn kém và vẫn cho được 1 giá trị gần đúng của flavonoid toàn phần [78].
Horowitz và Gentili (1959), Vanderrcook (1982) đã chứng minh phương pháp David không thích hợp để định lượng hesperidin trong quả cam vì hesperidin chalcon hấp thu yếu ở 420 nm, thời gian phản ứng quá dài. Nếu vẫn muốn dùng phương pháp này thì các mẫu hesperidin phải được hoà tan trong 1 ml NaOH 4N trước khi pha loãng thành 100 ml với nước.
Phương pháp định lượng naringin và hesperidin bằng đo phổ UV (Hendrickson et al., 1958,1959)
Trong phương pháp này, dịch quả Bưởi (50 ml) được trộn với dung dịch đồng sulfat 10% (0,4 ml), chỉnh đến pH 3,5 ± 0,1 bằng NaOH hoặc HCl và sục khí trong 1 giờ để phá hủy vitamin C, tránh gây nhiễu quá trình định lượng. Pha loãng mẫu định lượng với isopropanol 99% (1:20). Lắc kỹ và để lắng trong 2 giờ. Lọc bỏ tủa và đo độ hấp thu của dịch lọc ở 290 và 295 nm. Nồng độ của naringin từ dịch quả được tính thông qua đường cong chuẩn, xây dựng bởi 1 giai mẫu naringin từ 2-10 mg / 100 ml isopropanol [78]
Đối với dịch quả Cam, cách tiến hành cũng tương tự như ở dịch quả Bưởi, chỉ khác ở một vài điểm như pH chỉnh ở 3,8 ± 0,1; độ hấp thu của dịch lọc đo ở 290 và 300 nm (có sự chênh lệch khoảng 1/10 độ hấp thu giữa 2 bước sóng này); hesperidin chuẩn được pha trong nước (5 mg / 100 ml), là điểm khó khăn nhất của phương pháp vì hesperidin vô cùng kém tan trong nước ngay cả khi đun nóng.