Khi kháng thể hoặc kháng - kháng thể ựược nhuộm màu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang (thường dùng Fluoescein isothiocyanat có màu xanh lục, rodamin có màu ựỏ gạch) cho kết hợp với kháng nguyên, thì phức hợp kháng nguyên - kháng thể khi soi dưới kắnh hiển vi huỳnh quang sẽ phát sáng. Thuốc nhuộm huỳnh quang phải ựạt các tiêu chuẩn:
Không làm tổn thương tới tắnh sinh miễn dịch của kháng thể. Kết hợp với kháng thể một cách bền vững.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Giáo trình Miễn dịch học Thuỷ sản ẦẦẦẦẦẦẦẦ69
Với một lượng ắt nhưng có màu sắc rõ rệt
Thuốc dễ sử dụng và dế phân biệt với các mầu khác.
a. Phản ứng miễn dịch huỳnh quang trực tiếp
Trong phản ứng này thường dùng kháng thể ựặc hiệu nhuộm màu ựể phát hiện kháng nguyên chưa biết.
Nguyên lý: Làm tiêu bản với bệnh phẩm cần chẩn ựoán, cố ựịnh ựể kháng nguyên gắn chặt lên phiến kắnh, sau ựó cho một giọt kháng thể ựặc hiệu ựã nhuộm huỳnh quang lên tiêu bản, ựể tác ựộng một thời gian, sau ựó rửa nước, ựể khô rồi quan sát dưới kắnh hiển vi huỳnh quang.
Nếu có kết hợp kháng nguyên kháng thể thì sẽ thấy phát sáng;
Nếu kháng thể không tương ứng với kháng nguyên thì sẽ không có kết hợp kháng nguyên - kháng thể, khi rửa nước kháng thể bị trôi ựi, do ựó không thấy phát sáng.
b. Phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp.
Có 3 thành phần tham gia phản ứng: kháng thể ựặc hiệu, kháng - kháng thể ựặc hiệu ựã nhuộm huỳnh quang và kháng nguyên cần chẩn ựoán. Như vậy kháng thể ựặc hiệu ở ựây có 2 chức năng: chức năng kháng thể ựối với kháng nguyên cần chẩn ựoán và chức năng là kháng nguyên ựối với kháng kháng thể ựã nhuộm màu.
Phương pháp:
Làm tiêu bản với bệnh phẩm cần chẩn ựoán, cố ựịnh ựể kháng nguyên gắn chặt trên tiêu bản.
Nhỏ một giọt kháng thể ựặc hiệu lên bệnh phẩm cần chẩn ựoán, ựể tác ựộng 10-15 phút, rửa nước;
Nhỏ tiếp một giọt kháng - kháng thể ựã nhuộm huỳnh quang, ựể tác ựộng một thời gian, rửa nước ựể khô, rồi quan sát ựánh giá kết quả dưới kắnh hiển vi huỳnh quang.
Nếu có phát sáng tức là có phức hợp kháng nguyên - kháng thể - kháng kháng thể, phản ứng dương tắnh, ựộng vật có mang mầm bệnh.
Nếu không có phát sáng, tức là không có phức hợp kháng nguyên - kháng thể - kháng kháng thể. Phản ứng âm tắnh, ựộng vật không mang mầm bệnh.