Sau khi phân lập được 31 chủng có khả năng sinh acid, chúng tôi tiếp tục làm thuần lần lượt từng chủng trên môi trường MRS [MT2], sau 3 ngày chúng tạo khuẩn lạc có hình dạng đặc trưng, tạm được đặt tên và mô tả ở bảng 3.1.
Kết quả quan sát hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào và quan sát khả năng di động của 2 chủng nghiên cứu được ghi trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Tổng hợp các đặc điểm hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào và khả
năng di động của các chủng VK trên môi trường MRS
Stt Kí hiệu chủng
Nguồn chế
phẩm phân lập Hình thái khuẩn lạc Hình thái tế bào
Khả năng di động
1 PA1 Antibio
(Hàn Quốc) Tròn (1,2 - 2,0 mm), trsữa, trơn láng. ắng Que, kết đôi, ba chuỗi ngắn -
2 PA2 Antibio
(Hàn Quốc) Tròn (1,2 – 2,0 mm), trngà, trơn láng. ắng Que, kba chuỗi ngắn ết đôi, -
3 PA3 Acidophilus
(Mỹ) Tròn (0,8 mm), trtrơn lồi ắng đục, Que, kchuỗi dài ết đôi, -
4 PA4 Acidophilus
(Mỹ) Tròn (1,5 mm), trtrơn, mép răng cưa ắng mờ Cchuầu, kết đôi, ỗi ngắn - 5 PB1 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (2,0 - 2,2 mm), trngà, trơn bóng. ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi dài - 6 PB2 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (3,0 - 3,5 mm), trsữa, trơn láng. ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn - 7 PB3 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (1,2 mm), trtrơn bóng ắng sữa, Que, tđôi, chuỗi dài ế bào kết -
8 PB4 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (1,2 mm), trtrơn láng, rìa trơn ắng ngà, Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn - 9 PB5 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (0,8 - 1,0 mm), trngà, trơn, ướt ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn - 10 PB6 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (0,8 - 1,0 mm), trngà, trơn ướt, lồi. ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn - 11 PB7 Biolactyl
(Việt Nam) Tròn (1,5 - 2,0 mm), trsữa, đục, trơn ướt, hơi lồi. ắng Que, kchuỗi ngắn ết đôi, -
12 PB8 Bio - acimin
(Việt Nam) Tròn (2,5 - 3,0), trTrơn, mép răng cưa. ắng ngà Cđôi, chuỗi dài ầu, tế bào kết - 13 PB9 Bio - acimin
(Việt Nam) Tròn (1,8 - 2,9 mm), trmờ, trơn ướt. ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn - 14 PB10 Bio - acimin
(Việt Nam) Tròn (1,2 - 1,5 mm), trsữa, trơn láng. ắng Que, kchuỗi dài ết đôi, -
15 PB11 Bilactin
(Việt Nam) Tròn (1,5 - 1,8 mm), trngà, trơn mờ. ắng Cchuầu, kết đôi, ba ỗi ngắn -
16 PB12 Biosubtyl DL
(Việt Nam) Tròn (1,5 mm), trtrơn ắng ngà, Cchuầu, kết đôi, ỗi ngắn - 17 PB13 Bio vita plus
Stt Kí hiệu chủng
Nguồn chế
phẩm phân lập Hình thái khuẩn lạc Hình thái tế bào Khnăng di ả động
18 PB14 Bio vita plus
(Việt Nam)
Tròn (1,2 - 1,6 mm), trắng ngà, trơn.
Cầu, kết đôi, ba chuỗi dài
- 19 PL1 Lactomin - Plus (Hàn Quốc) Tròn (2,2 - 2,5 mm), trắng sữa, trơn bóng. Cầu, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 20 PL2 Lactomin - Plus (Hàn Quốc) Tròn (0,9 - 1,2 mm), trắng sữa, trơn bóng Que, kết đôi, chuỗi dài - 21 PL3 Lactomin - Plus (Hàn Quốc) Tròn (1,8 - 2,0 mm), trắng sữa, trơn bóng. Cầu, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 22 PL4 Lactomin - Plus (Việt Nam) Tròn (2,5 - 3,0 mm), trắng sữa, trơn ướt.
Cầu, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 23 PL5 Lactomin - Plus (Việt Nam) Tròn (1,2 mm), trắng sữa, trơn bóng, lồi.
Cầu, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 24 PL6 Lactomin - Plus (Việt Nam) Tròn (1,0 - 1,3),trắng sữa, trơn Que ngắn, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 25 PL7 L - bio (Việt Nam) Tròn (0,8 - 1,2 mm), trắng sữa, trơn ướt.
Cầu, kết đôi, ba chuỗi ngắn - 26 PL8 L - bio - 3D (Việt Nam) Tròn (1,5 mm), trắng sữa, trơn bóng. Cầu, kết đôi, ba chuỗi dài
-
27 PL9 L – bio - 3D
(Việt Nam)
Tròn, (1,0 - 1,2 mm), trắng sữa, trơn láng, lồi.
Que dài, kết đôi, chuỗi dài
-
28 PL10 Labido Plus
(Việt Nam)
Tròn (2,0 - 2,5 mm), trắng sữa, trơn bóng
Cầu, kết đôi, chuỗi ngắn
-
29 PL11 Labido Plus
(Việt Nam)
Tròn (2,5 - 3,0 mm), trắng sữa, trơn ướt.
Cầu, kết đôi, chuỗi ngắn
-
30 PP pms - Probio
(Việt Nam)
Tròn (1,2 – 2,0 mm), trắng sữa, trơn láng, lồi ở giữa.
Que dài, kết đôi, chuỗi ngắn - 31 PY1 Ybio (Việt Nam) Tròn (1,3 - 1,5 mm), trắng mờ, trơn ướt Cầu, kết đôi, ba chuỗi dài
-
Bảng 3.1. Tổng hợp các đặc điểm hình thái khuẩn lạc và tế bào của các chủng
Để chọn chủng thuộc chi Lactobacillus, bước đầu chúng tôi đã chọn được 10 trong số 31 chủng VK sinh acid, có tế bào dạng hình que với kí hiệu: PA1; PA2; PA3; PB3; PB7; PL6; PL2; PB10; PL2; PL6; PL9; PP.
Chúng tôi tiến hành định tính khả năng sinh acid lactic (bằng thuốc thử Uphenmen) và định lượng acid lactic (bằng phương pháp chuẩn độ Therner) của 10 chủng trên, kết quả cho thấy các chủng đều có khả năng sinh acid lactic với hàm lượng từ 1,22 – 1,47g/l (hình 3.2, bảng 3.2).
Hình 3.2. Định tính acid lactic bằng thuốc thử Uphenmen
Ghi chú: ĐC (-): 3 ml [MT2] + 2 ml thuốc thử Uphenmen
ĐC (+): 3 ml acid lactic 2% + 2 ml thuốc thử Uphenmen
Tiếp tục khảo sát khả năng sinh bacteriocin của 10 chủng LAB nói trên bằng phương pháp khoan lỗ thạch. Kết quả cho thấy cả 10 chủng trên đều không có khả năng sinh bacteriocin. Các kết quả được thể hiện trong bảng 3.2.
Nhận xét: Kết quả ở bảng 3.2 cho thấy, tất cả các chủng nói trên đều có phản ứng dương tính với thuốc thử Uphenmen. Điều này khẳng định các chủng VK nói trên đều là LAB. Các chủng đều có khả năng ức chế cả 2 chủng VK kiểm định B. subtilis và E. coli.
Trong số các chủng LAB trên cho thấy: chủng PA2 và PP có khả năng tạo acid tổng nhiều nhất (với hàm lượng ≥ 1,46 g/l) và khả năng ức chế 2 chủng VK gây bệnh đường ruột cao nhất ( D –d ≥ 3,35cm).
Kết quả trên khẳng định, sản phẩm chính trong quá trình lên men của LAB là acid lactic có vai trò quan trọng đến khả năng kháng khuẩn của chúng.
ĐC(-) ĐC(+) PA2 PP PB7 PA3 PB3 PB1 0
Bảng 3.2. Kết quả khảo sát một số đặc điểm của các LAB Stt Kí hiệu chủng Phản ứng với thuốc thử Uphenmen Hàm lượng acid tổng (g/l) Hoạt tính đối kháng, (D – d, cm) Khả năng sinh bacteriocin VK kiểm định B. subtilis VK kiểm định E. coli 1 PA1 + 1,40 3,35 3,50 - 2 PA2 + 1,47 3,40 3,50 - 3 PA3 + 1,25 2,70 2,95 - 4 PB3 + 1,22 2,63 2,83 - 5 PB7 + 1,22 2,80 2,70 - 6 PB10 + 1,20 2,65 2,70 - 7 PL2 + 1,26 3,15 3,20 - 8 PL6 + 1,25 3,20 3,20 - 9 PL9 + 1,25 3,25 3,15 - 10 PP + 1,46 3,35 3,43 -
Ghi chú: +: dương tính -: âm tính
Mặt khác, 2 chủng này được phân lập từ nguồn là 2 loại chế phẩm probiotic chứa thành phần đơn chủng L. acidophilus (chủng PA2 được phân lập từ thuốc Antibio của công ty Hanwha - Hàn Quốc, chủng PP được phân lập từ thuốc pms - Probio của công ty Imexpharm - Việt Nam). Kết quả lăp lại nhiều lần đối với mỗi chế phẩm này đều chỉ cho một chủng LAB duy nhất.
Kết hợp các đặc tính sinh học và nguồn phân lập chúng tôi chọn 2 chủng PA2 và PP để tiếp tục nghiên cứu. Để tiện cho việc sử dụng, chúng tôi tạm thời kí hiệu 2 chủng này là PA2 và PP cho những nghiên cứu tiếp theo.