Nguyên tắc: dựa vào khả năng chịu pH thấp (1 - 3) và tồn tại sau thời gian tiêu hóa ở dạ dày (1 – 3 giờ) của các chủng probiotic. Do vậy, chúng tôi khảo sát khả năng chịu đựng pH thấp ở những độ pH 1,5; 2; 2,5. Tại các thời điểm 30; 60; 90; 120 phút.
Cách tiến hành:
- Chuẩn bị giống: VK được nuôi cấy 15 giờ trong môi trường MRS lỏng. - Chuẩn bị các bình tam giác chứa 50ml môi trường MRS lỏng với pH 1,5; 2; 2,5 và các bình tam giác chứa 50 ml môi trường MRS lỏng ĐC (pH = 6,5).
- Dùng pipet vô trùng hút 3ml dịch nuôi cấy (106
– 107 tế bào /ml MT) vào các bình MT đã chuẩn bị. Mỗi nồng độ bố trí 3 bình.
- Tiến hành đo OD610 ở các thời điểm 0 phút; 30 phút; 60 phút; 90 phút và 120 phút.
- Ghi nhận kết quả. Tính tỷ lệ tế bào sống sót thông qua mối tương quan OD610 với mật độ tế bào tại bình ĐC và bình thí nghiệm.
2.2.13. Khả năng chịu đựng acid mật [14]
Nguyên tắc: acid mật được coi là chất kháng khuẩn trong đường tiêu hóa,
bảo vệ ruột khỏi sự xâm nhập của các VSV gây bệnh. Do vậy, VSV probiotic khi qua ruột non chịu tác động của muối mật. Ở ruột non, nơi dịch mật toàn phần tiết ra có thể có nồng độ cao nhất khoảng 2%. Khả năng sống sót sau tác dụng của acid mật là một trong những tiêu chuẩn quan trọng của VSV probiotic.
Cách tiến hành:
- Tiến hành khảo sát khả năng chịu acid mật với các nồng độ acid mật 0,5%; 1%; 1,5% và 2% ở những thời điểm 0; 1; 5; 10 giờ.
- Chuẩn bị giống: LAB được nuôi cấy 15 giờ trong môi trường MRS lỏng. - Chuẩn bị các bình tam giác chứa 50ml môi trường MRS lỏng có bổ sung mật
heo ở các nồng độ 0% (bình ĐC); 0,5%; 1%; 1,5% và 2%.
- Dùng pipet vô trùng hút 2ml dịch nuôi cấy (106 – 107 tế bào/ml MT) vào các bình môi trường MRS lỏng có bổ sung mật heo ở các nồng độ 0,5; 1; 1,5; 2 và bình ĐC (không chứa mật heo). Mỗi nồng độ bố trí 3 bình.
- Tiếp đến, đưa các bình đã cấy VK trên vào tủ ấm ở nhiệt độ 370C. - Tiến hành đo OD610 ở các thời điểm 0; 1; 5 và 10 giờ.
- Ghi nhận kết quả. Tính tỷ lệ tế bào sống sót thông qua mối tương quan OD610 với mật độ tế bào tại bình ĐC và bình thí nghiệm.