phân lập ñược
Chúng tơi đã tiến hành xác định gen quy định ñộc tố (Salmonella toxin; Stn) và yếu tố xâm nhập (Invation A; InvA) bằng phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction). Ưu ñiểm của phương pháp này là độ nhạy và độ đặc hiệu cao, có thể thực hiện với số lượng mẫu lớn và cho kết quả nhanh, chính xác trong thời gian ngắn.
Các cặp mồi thích hợp ñược sử dụng trong phản ứng PCR ñể xác ñịnh một số yếu tố ñộc lực của các chủng vi khuẩn Salmonella bao gồm (1) Stn – F (mồi xi) và Stn – R (mồi ngược) dùng để xác ñịnh gen sản sinh độc tố đường ruột Stn (cho kích cỡ sản phẩm là 259 bp), (2) InvA – F (mồi xi) và InvA – R (mồi ngược) để xác định gen quyết định yếu tố xâm nhập InvA (cho kích cỡ sản phẩm là 521 bp). Các bước tiến hành phản ứng PCR như đã mơ tả ở phần phương pháp nghiên cứu. Kết quả xác ñịnh các gen quy ñịnh ñộc tố được trình bày ở bảng 4.11.
Trường ðại học Nơng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 57
Bảng 4.11. Kết quả kiểm tra một số yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược vi khuẩn Salmonella phân lập ñược
Yếu tố gây bệnh Stn InvA TT Serotyp Số chủng kiểm tra (+) (%) (+) (%) 1 S.agona 5 4 80,00 5 100,00 2 S.meleagridis 2 1 50,00 2 100,00 3 S.ruzizi 2 1 50,00 1 50,00 4 S.typhimurium 16 16 100,00 16 100,00 5 S.anatum 6 5 83,33 6 100,00 Tổng 31 27 87,10 30 96,77 0 20 40 60 80 100
S.agonaS.meleagridisS.ruziziS.typhimuriumS.anatumAverage
80 5050 100 83,33 87,1 100100 50 100100 96,77 T ỷ l ỷ % Serotyp Stn InvA
Hình 4.16. So sánh tỷ lệ dương tính với một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn
Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp …………………………… 58
Hình 4.17. Sản phẩm PCR xác định gen sản sinh ñộc tố ñường ruột và yếu tố xâm nhập với ñối chứng tương ứng ở giếng 5 (259 bp và 521 bp); các ñối chứng âm (giếng 6&7); các mẫu dương tính với Stn (giếng 1,3,4) và với InvA (1,2,3,4); giếng 8,
thang chuẩn 1000bp
Kết quả ở bảng 4.11 cho thấy trong tổng số 31 chủng Salmonella ñược kiểm tra, có 27 chủng mang gen Stn (chiếm tỷ lệ 87,10%); 30 chủng mang gen InvA (chiếm 96,77%).
- Tất cả các chủng thuộc serotyp S. typhimurium ñược kiểm tra có mang cả hai gen Stn và InvA.
- Tất cả 6 chủng thuộc serotyp S.anatum mang gen InvA nhưng chỉ có 5 chủng mang gen Stn (83,33%)
- Trong số 5 chủng thuộc serotyp S.agona, 4 chủng mang gen Stn (80,00%) nhưng tất cả các chủng mang gen InvA.
- Cả hai chủng thuộc serotyp S.meleagridis mang gen InvA trong đó 1 chủng chứa gen Stn.
Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… 59
- Trong số 2 chủng S.ruzizi được kiểm tra thì 1 chủng có chứa gen Stn và 1 chủng có gen InvA.
Từ kết quả này cho thấy: Hầu hết các chủng Salmonella mang gen mã hóa yếu tố xâm nhập (tỷ lệ chung mang gen này tới 96,77%, chỉ có một chủng thuộc serotyp S.ruzizi khơng mang gen này). Các chủng thuộc serotyp S. typhimurium ñều mang gen quy ñịnh ñộc tố. Tỷ lệ các chủng mang gen quy ñịnh ñộc tố cao ở serotyp S.anatum và S.agona. ðối với các serotyp khác, có thể do số chủng nghiên cứu chưa ñủ lớn nên tỷ lệ mang các yếu tố ñộc lựcvà yếu tố xâm nhập có thể chưa cao. Kết quả xác ñịnh gen quy ñịnh yếu tố xâm nhập và gen quy ñịnh ñộc tố cho thấy khả năng gây bệnh cao của Salmonella tại các cơ sở chăn nuôi. ðặc biệt với S.typhimurium, serotyp có tỷ lệ phát hiện, tỷ lệ mang yếu tố ñộc lực và yếu tố xâm nhập cao.