3.4.3.1. Kiểm tra hình thái học
Dùng phương pháp nhuộm Gram - Vi khuẩn Gram dương bắt màu tắm - Vi khuẩn Gram âm bắt màu ựỏ
3.4.3.2. Kiểm tra khả năng di ựộng
+ Kiểm tra di ựộng bằng phương pháp cấy vi khuẩn vào môi trường thạch bán cố thể
+ Phương pháp tiến hành: Dùng que cấy ựầu nhọn vô trùng lấy vi khuẩn sau ựó cấy chắch sâu vào giữa ống thạch bán cố thể, ựến gần ựáy ống thì rút ra, ựể tủ ấm 37oC trong vòng 24 giờ.
+ đọc kết quả: Nếu vi khuẩn có khả năng di ựộng thì dọc theo ựường cấy vi khuẩn sẽ mọc lan rạ
3.4.3.3. Phản ứng chuyển hóa ựường
+ Thành phần:
Nước cất :1000 ml Peptone :15 g Andrade :10 ml
+ Cách pha: Trộn ựều hỗn hợp trên, khuấy cho tan hết rồi cho vào mỗi ống nghiệm ựã có sẵn 1 ống duyn Ờ ham 5ml. Hấp vô trùng 121oC trong 15 phút, ựể nguộị Pha các loại ựường: glucose, saccarosea, lactose, galactose, maltose, mannit, manitol, fructose, oxylose, aribinose với nồng ựộ cuối cùng là 10%, hấp ướt 110oC trong 30 phút hoặc 100oC trong 30 phút/ngày ( hấp 3 ngày liên tiếp).
+ Tiến hành: Dùng pipet vô trùng nhỏ vào mỗi ống 100ộl ựường (mỗi ống 1 loại ựường). Kiểm tra vô trùng trong tủ ấm ở 37oC trong 24 giờ. Sau ựó, nhỏ 100ộl canh trùng, ựể tủ ấm 370C/24 giờ.
+ đọc kết quả: Nếu vi khuẩn lên men sinh hơi thì phần môi trường trong ống duyn Ờ ham sẽ bị ựẩy ra ngoàị
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 28
Nếu vi khuẩn lên men ựường, môi trường ựổi sang màu hồng ựậm. Nếu vi khuẩn không lên men ựường, môi trường không ựổi màụ
3.4.3.4. Phản ứng sinh Indol
+ Phương pháp làm: Cấy vi khuẩn vào môi trường nước thịt, nuôi cấy ở 37oC trong 4 Ờ 6 giờ. Nhỏ 0,5 ml thuốc thử KovacỖs vàọ
+ đọc kết quả: Phản ứng dương tắnh khi quan sát thấy một vòng màu ựỏ ở trên mặt môi trường. Nếu trên bề mặt môi trường không có màu ựỏ ựậm thì phản ứng sinh Indol âm tắnh.
3.4.3.5. Phản ứng sinh H2S
+ Nguyên lý: Một số vi khuẩn có khả năng phân giải axitamin có chứa lưu huỳnh và làm sản sinh H2S. để xác ựịnh khả năng sinh H2S người ta cấy vi khuẩn vào trong môi trường có chứa Pb(CH3COO)2.
Pb(CH3COO)2 + H2S PbS + 2CH3COOH Có màu ựen
+ Phương pháp làm: Dùng que cấy ựầu nhọn vô trùng lấy vi khuẩn sau ựó cấy chắch sâu vào môi trường thạch TSI ựể tủ ấm 37 oC trong 24 giờ.
+ Kết quả: Nếu vi khuẩn sinh H2S thì dọc theo ựường cấy sẽ xuất hiện màu ựen.
3.4.3.6. Phản ứng Oxidaza:
+ được tiến hành trên giấy có tẩm dung dịch 1% Tetramethyl Ờ P. phenylene diamine hydrochloridẹ
+ Phương pháp làm: Dùng que cấy lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch chà sát lên mặt giấy ựã thấm thuốc thử.
+ đọc kết quả: Nếu chỗ ựược chà sát sau 30 giây xuất hiện màu tắm ựen là phản ứng dương tắnh. Nếu không xuất hiện màu tắm ựen hoặc không ựổi màu là phản ứng âm tắnh.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 29
3.4.3.7. Phản ứng Catalaza:
+ Phương pháp làm: Lấy 1 phiến kắnh sạch, dùng que cấy lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch ựặt lên trên 1 phiến kắnh ựó, nhỏ 1 giọt dung dịch H2O2 3% (Hydrogen peroxidaza).
+ đọc kết quả: Nếu có hiện tượng sủi bọt là phản ứng dương tắnh. Nếu không thấy có hiện tượng sủi bọt là phản ứng âm tắnh.