Các nghiên cứu trong nước cũng như trên thế giới phân tích hesperidin trong dược liệu và trong dịch sinh học đã công bố cho thấy phương pháp phân tích chủ yếu được sử dụng là phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector UV hoặc detector khối phổ.
Để đánh giá sự thay đổi nồng độ của hesperidin trong huyết tương chuột sau khi dùng thuốc đường uống.Nhóm nghiên cứu của Nguyễn Thị Hà Ly và cộng sự đã sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với detector UV để định lượng hesperidin trong huyết thanh và huyết tương chuột. Dung môi pha động sử dụng là acetonitril và nước, chương trình rửa giải gradient với tốc độ dòng 0,5
30
ml/phút, quan sát tại bước sóng 280 nm. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) trong phân tích hesperidin lần lượt là 0,44 và 1,46 μg/ml. Độ thu hồi của hesperidin từ mẫu huyết tương là 94,4 ± 2,4% và độ lệch chuẩn tương đối của diện tích píc là 2,0%. Nhóm nghiên cứu đã sử dụng phương pháp chiết lỏng - lỏng với dung môi chọn lọc ethyl acetat để loại tạp và làm giàu mẫu phân tích. Sử dụng phương pháp xây dựng được, nhóm nghiên cứu đã định lượng nồng độ hesperidin trong huyết tương chuột tại nhiều thời điểm khác nhau sau uống thuốc, qua đó xây dựng đường cong nồng độ - thời gian và tính toán các thông số dược động học của hesperidin [14].
R. Omidbaigi, M. Faghih Nasiri và Z. Bashiri Sadr đã sử dụng phương pháp HPLC với detector UV để theo dõi sự thay đổi hàm lượng Hesperidin trong quả các loài cam quýt trong suốt quá trình quả chín để xác định thời điểm thu hoạch tốt nhất, nghiên cứu sử dụng cột sắc ký pha đảo Bondapak C18 (300× 3,9 mm) pha động acetonitril và nước với tỷ lệ (21,5: 78,5) tốc độ dòng 2ml/ phút, thể tích tiêm mẫu 5 µl detector 258nm. Kết quả đã xác định được hàm lượng hesperidin và nhận thấy hàm lượng hesperidin tăng liên tục từ lúc đậu quả đến 40 ngày tuổi [42].
Jaime A. Y´ a˜ nez, Xiao Wei Teng, Kathryn A. Roupe, Neal M. Davies sử dụng phương pháp HPLC để phân tích hesperidin trong dịch sinh học. Điều kiện sắc ký gồm hệ thống HPLC shimadzu, cột Chiralpak AD-RH(5 µm, 150 x 4,6 mm), pha động gồm acetonitril, nước và acid phosphoric với tỷ lệ (42: 58: 0,01), lọc và khử khí giảm áp suất trước khi sử dụng, tốc độ dòng 0,8 ml/ phút, bước sóng phát hiện ở 298 nm. Phương pháp được thẩm định các đặc tính: tính tuyến tính, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, độ chính xác và độ thu hồi. Tính tuyến tính của nồng độ trong khoảng 0,5 đến 100 µg/ ml với hệ số R2 = 0,999. Giới hạn phát hiện của hesperidin trong dịch sinh học là 0,5 mg/ml. Độ thu hồi trong khoảng từ 98,3 đến 99,9%. Các nghiên cứu này cho thấy hoàn toàn có thể sử dụng phương pháp HPLC với cột sắc ký pha đảo để định lượng hesperidin trong dược liệu cũng như trong dịch sinh học [30].
31