phương pháp
Pha dung dịch chuẩn resveratrol có nồng độ 16 μg/ml, hesperidin có nồng độ 15 μg/ml, epigallocatechin gallat có nồng độ 22 μg/ml, sau đó pha loãng dần nồng độ ban đầu theo tỷ lệ như trong bảng và phân tích theo điều kiện sắc ký đã chọn.
- Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với epigallocatechin gallat như trong bảng 3.8.
Bảng 3.8: Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với epigallocatechin gallat Nồng độ (μg/ml) 22,0 4,4 1,1 0,55 0,275 Thời gian lưu (phút) 4,350 4,355 4,356 4,356
S/N <3 Diện tích píc
(mAU.s)
Lần 1 103725 24976 6235 3334 Lần 2 102843 25107 6324 3489
Nhận xét: Ở nồng độ 0,275 μg/ml tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu đường nền S/N < 3 nên ở nồng độ 0,55 μg/ml được coi là giới hạn phát hiện của phương pháp phân tích đối với epigallocatechin gallat.
Theo lý thuyết LOQ = 3,3 x LOD với LOD = 0,55 μg/ml. Vậy giới hạn định lượng của phương pháp phân tích đối với epigallocatechin gallat là LOQ = 1,815 μg/ml.
- Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với hesperidin như trong bảng 3.9.
Bảng 3.9: Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với hesperidin
Nồng độ (μg/ml) 15 3 1,5 0,75 0,375 Thời gian lưu (phút) 7,287 7,292 7,301 7,301
S/N <3 Diện tích píc
(mAU.s)
Lần 1 97105 15137 7385 3426 Lần 2 98530 14936 7426 3509
Nhận xét: Ở nồng độ 0,375 μg/ml tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu đường nền S/N < 3 nên ở nồng độ 0,75 μg/ml được coi là giới hạn phát hiện của phương pháp phân tích đối với hesperidin.
Theo lý thuyết LOQ = 3,3 x LOD với LOD = 0,75 μg/ml. Vậy giới hạn định lượng của hesperidin theo phương pháp phân tích là LOQ = 2,475 μg/ml.
57
- Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với resveratrol như trong bảng 3.10.
Bảng 3.10: Kết quả xác định giới hạn phát hiện đối với resveratrol
Nồng độ (μg/ml) 16,0 3,2 1,6 0,8 0,4 0,2 Thời gian lưu (phút) 15,884 15,868 15,902 15,918 15,935
S/N <3 Diện tích píc
(mAU.s)
Lần 1 163427 30056 13814 6317 3105 Lần 2 161548 29264 12307 6130 3018
Nhận xét: Ở nồng độ 0,2 μg/ml tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu đường nền S/N < 3 nên ở nồng độ 0,4 μg/ml được coi là giới hạn phát hiện của phương pháp phân tích đối với resveratrol.
Theo lý thuyết LOQ = 3,3 x LOD với LOD = 0,4 μg/ml vậy giới hạn định lượng của phương pháp phân tích đối với resveratrol là LOQ = 1,32 μg/ml.
Kết luận: Phương pháp HPLC sử dụng detector UV đã được thẩm định độ đặc hiệu, độ đúng, độ chính xác, độ lặp lại và sự phụ thuộc tuyến tính, có thể áp dụng phương pháp này để định tính, định lượng resveratrol, hesperidin và epigallocatechin gallat trong cao đặc hỗn hợp vang nho, trần bì, chè xanh.
3.2.3. Áp dụng phương pháp đã xây dựng để định tính, định lượng resveratrol, hesperidin, epigallocatechin gallat trong cao đặc hỗn hợp gồm chiết xuất vang