Phương pháp định lượng đồng thời resveratol, hesperidin và epigallocatechin gallat trong cao đặc hỗn hợp vang nho, trần bì, chè xanh.
- Điều kiện phân tích trên hệ thống HPLC – UV
Trong quá trình nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời resveratol, hesperidin và epigallocatechin gallat, thông qua các kết quả thực nghiệm, kết hợp cùng một số tài liệu tham khảo, chúng tôi đã lựa chọn được các điều kiện sắc ký HPLC – UV như sau:
+ Cột: RP18 (4,6 x 250 mm, 5µm)
+ Pha động: Acetonitril- Dung dịch acid formic 0,1% (30 : 70) + Detector: 280nm
+ Thể tích tiêm: 8µl + Tốc độ dòng: 1 ml/ phút + Nhiệt độ: nhiệt độ phòng
63
Trong quá trình nghiên cứu tìm ra pha động phù hợp, chúng tôi đã tham khảo nhiều tài liệu khác nhau, các tài liệu này chỉ định lượng được nhiều nhất hai trong ba chất nghiên cứu. Dựa vào đó chúng tôi đã lựa chọn và khảo sát để tìm ra pha động phù hợp nhất. Kết quả chúng tôi đã định lượng được đồng thời ba thành phần resveratrol, hesperidin và epigallocatechin gallat trong cao đặc hỗn hợp. Kết quả này có ý nghĩa lớn giúp đơn giản hoá việc xác định hàm lượng các hoạt chất trong cao.
- Thẩm định quy trình xây dựng
Tiến hành khảo sát bước sóng phát hiện để định lượng các hoạt chất bằng cách quét phổ. Kết quả trên phổ UV và trên sắc đồ cho thấy tại bước sóng 280nm phổ hấp thụ của cả ba chất đều cho đáp ứng phù hợp. Lựa chọn bước sóng phát hiện ở 280nm để định lượng đồng thời resveratrol, hesperidin và epigallocatechin gallat bằng phương pháp HPLC.
Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao là phương pháp phân tích hiện đại và ngày càng trở nên thông dụng trong các phòng thử nghiệm để phân tích định tính, định lượng các chất. Sau khi xác định được phương pháp phân tích chúng tôi tiến hành sắc ký mẫu cao theo quy trình đã lựa chọn ở trên. Kết quả đã xác định được sự có mặt và hàm lượng các hoạt chất resveratrol, hesperidin, epigallocatechin gallat có trong mẫu thử và xây dựng được phương pháp định tính, định lượng các hoạt chất đó trong mẫu cao đặc. Phương pháp định lượng các hoạt chất trong mẫu cao đặc hỗn hợp đạt yêu cầu về tính đặc hiệu, phương pháp phân tích không bị ảnh hưởng bởi các tạp chất có trong mẫu thử. Độ đúng của phương pháp có phần trăm tìm lại trong khoảng 98- 102% đảm bảo yêu cầu về độ đúng của một quy trình phân tích. Độ lặp lại có RSD < 2%. LOD và LOQ của phương pháp vào khoảng 2 µg/ml. Các kết quả thực nghiệm trên đã chứng minh phương pháp định lượng các hoạt chất trong cao đặc hỗn hợp vang nho, trần bì, chè xanh bằng HPLC–UV của chúng tôi có độ ổn định tốt.