- Chuẩn bị mẫu:
+ Dung dịch chuẩn: từ các dung dịch chuẩn gốc trong mục 3.2.1.1. Hút chính xác 5 ml mỗi dung dịch này vào ba bình định mức 25 ml, hoà tan, thêm MeOH đến vạch, trộn đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm.
+ Dung dịch thử: pha đúng theo cách pha dung dịch thử ở mục 3.2.1.1.
- Phân tích: tiêm riêng biệt dung dịch thử và dung dịch chuẩn vào máy sắc ký, tiến hành sắc ký theo điều kiện đã định.
So sánh thời gian lưu và phổ UV-Vis của píc thu được từ sắc ký đồ dung dịch thử tương ứng với thời gian lưu và phổ UV-Vis của píc resveratrol, hesperidin, epigallocatechin gallat trên sắc ký đồ của các dung dịch chuẩn. Kết quả cho thấytrên
58
sắc ký đồ dung dịch thử phát hiện có 3 píc có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu các píc epigallocatechin gallat chuẩn (tR EGCG = 4,35 phút), píc hesperidin chuẩn (tR hesperidin = 7,29 phút), và píc resveratrol chuẩn (tR resveratrol = 15,88 phút). So sánh phổ UV-Vis của các píc resveratrol, hesperidin, epigallocatechin gallat chuẩn với phổ UV-Vis các píc trên sắc ký đồ dung dịch thử có thời gian lưu tương ứng với các píc chuẩn này. Kết quả so sánh về hình dạng phổ và các píc hấp thụ cho thấy sự phù hợp giữa phổ của chuẩn và thử. Do đó có thể khẳng định píc thu được trên sắc ký đồ dung dịch thử có thời gian lưu tương ứng với píc resveratrol, hesperidin và epigallocatechin gallat chuẩn chính là các píc resveratrol, hesperidin và epigallocatechin gallat.
59
(A)
(B)
Hình 3.11: Phổ UV-Vis của resveratrol. (A) chuẩn, (B) thử.
(A)
(B)
60
(A)
(B)
Hình 3.13: Phổ UV-Vis của epigallocatechin gallat. (A) chuẩn, (B) thử.