... trọng việc lựa chọn phươngpháp điều trị thích hợp cho bệnh nhân Có nhiều phươngpháp sử dụng để xác định E.coli gây tiêu chảy Trong đó, PCRphươngpháp sử dụng hữu hiệu Xuất phát từ lí trên, ... thu không đủ để phátphươngpháp điện di thông thường 3.2 KHUẾCH ĐẠI CÁCGEN ĐỘC LỰC CỦA CÁC NHÓM E.COLI 3.2.1 Gen độc lực eae M 872 bp 603 bp 270 bp 376 bp Hình 3.1 Kết khuếch đại gen eae M Marker ... chứng gen độc lực) 2.2 PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Các chủng E.coli chuẩn Quốc tế Nuôi cấy qua đêm môi trường MPA đặc, thu khuẩn lạc Tách DNA trực tiếp từ khuẩn lạc Khuếch đại gen phản ứng PCR Điện...
... Kt qu phn ng PCR 33 4.4.1 Kt qu phn ng PCR vi ADN mu thc hin qui trỡnh chit tỏch acid nucleic bng phng phỏp Phenol chloroform (Taggart et al, 1992) 33 4.4.2 Kt qu phn ng PCR vi ADN mu ... gia phn ng PCR (hm lng Tag DNA polymerase 5U/àl) 31 Bng 4.7 Thnh phn tham gia phn ng PCR (hm lng Tag DNA polymerase 4U/àl) 31 Bng 4.8 Thnh phn tham gia phn ng PCR (hm lng ... phng phỏp PCR phỏt hin E ictaluri t mụ cỏ bnh Ni dung Thc hin v chun húa phng phỏp ly trớch ADN t mụ cỏ bnh Ti u phng phỏp PCR phỏt hin E ictaluri Xỏc nh nhy v tớnh c hiu ca phng phỏp PCR phỏt...
... Thực chuẩn hóa phươngphápPCRphát A hydrophila phân lập từ cá tra bị bệnh xuất huyết - Xác định độ nhạy phươngphápPCRphát A hydrophila - Xác định tính đặc hiệu phươngphápPCRphát A hydrophila ... nhạy phươngphápPCRphát A hydrophila Để xác định giới hạn thấp hàm lượng DNA vi khuẩn mà phươngphápPCRphát Xác định pha loãng acid nucleic làm tinh Kết PCR xác định độ nhạy phươngpháp thể ... khuẩn A hydrophila 4.3 Phát vi khuẩn A hydrophila phươngphápPCRPCR công cụ giúp phát nhanh xác mầm bệnh vi sinh vật tôm, cá Với phươngphápPCR cần khoảng ngày nhanh chóng phát A hydrophila, mà...
... Thực chuẩn hóa phươngphápPCRphát A hydrophila phân lập từ cá tra bị bệnh xuất huyết - Xác định độ nhạy phươngphápPCRphát A hydrophila - Xác định tính đặc hiệu phươngphápPCRphát A hydrophila ... nhạy phươngphápPCRphát A hydrophila Để xác định giới hạn thấp hàm lượng DNA vi khuẩn mà phươngphápPCRphát Xác định pha loãng acid nucleic làm tinh Kết PCR xác định độ nhạy phươngpháp thể ... khuẩn A hydrophila 4.3 Phát vi khuẩn A hydrophila phươngphápPCRPCR công cụ giúp phát nhanh xác mầm bệnh vi sinh vật tôm, cá Với phươngphápPCR cần khoảng ngày nhanh chóng phát A hydrophila, mà...
... 88,89%) phát E coli mang gen độc lực, đó: - mẫu (66,67%) phátgen stb, chiếm tỉ lệ phát cao - mẫu (55,56%) phátgen lt 32 - mẫu (33,33%) phátgen vt2e - mẫu (22,22%) phátgen hly - mẫu (11,11%) phát ... 2.2.6 Các hạn chế phươngphápPCR Do độ nhạy cao PCR đồng thời với thao tác đơn giản, người ta có khuynh hướng sử dụng phươngpháp để giải nhiều vấn đề Tuy nhiên, ta khơng thể qn phươngpháp có ... mẫu phát E coli mang gen độc lực, đó: 36 3/10 (30%) mẫu phân phát E coli mang gen stx (stx1 hoặc/và stx2) 1/10 (10%) mẫu phân phát E coli mang gen eae 1/10(10%) mẫu phân phát E coli mang gen...
... khuẩn lạc riêng lẻ theo phươngpháp nhiệt Kết multiplex - PCR ghi nhận sau: (1) Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực chưa khuẩn lạc riêng lẻ có mang gen độc lực (2) Tần số phátgen độc lực E coli từ ... 2.2 Kỹ thuật PCR 11 2.2.1 Nguyên tắc 11 2.2.2 Các giai đoạn phản ứng PCR .12 2.2.3 Các thành phần phản ứng PCR 14 2.2.4 Phân tích kết PCR .15 2.2.5 ... PCR .15 2.2.5.1 PCR sử dụng để nghiên cứu lượng DNA nhỏ .15 2.2.5.2 PCR sử dụng chẩn đoán lâm sàng .16 2.2.5.3 PCR dùng để khuếch đại RNA .16 vi 2.2.5.4 PCR sử dụng để so sánh genome...
... trọng việc lựa chọn phươngpháp điều trị thích hợp cho bệnh nhân Có nhiều phươngpháp sử dụng để xác định E.coli gây tiêu chảy Trong đó, PCRphươngpháp sử dụng hữu hiệu Xuất phát từ lí trên, ... thu không đủ để phátphươngpháp điện di thông thường 3.2 KHUẾCH ĐẠI CÁCGEN ĐỘC LỰC CỦA CÁC NHÓM E.COLI 3.2.1 Gen độc lực eae M 872 bp 603 bp 270 bp 376 bp Hình 3.1 Kết khuếch đại gen eae M Marker ... chứng gen độc lực) 2.2 PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Các chủng E.coli chuẩn Quốc tế Nuôi cấy qua đêm môi trường MPA đặc, thu khuẩn lạc Tách DNA trực tiếp từ khuẩn lạc Khuếch đại gen phản ứng PCR Điện...
... coli mang gen stx (stx1 hoặc/và stx2) 1/10 (10%) mẫu phân phát E coli mang gen eae 1/10(10%) mẫu phân phát E coli mang gen hly - Trong 10 mẫu phân bê tiêu chảy, không phát E coli mang gen độc ... Scoland, 1998; Gyles, 1992) - Cácgen stx1, stx2, eae, hly phát hiện, gen vt2e không phát nhóm khuẩn lạc E coli phân lập từ 10 mẫu phân bê tiêu chảy Kết hoàn toàn hợp lý gen vt2e tìm thấy nhóm STEC ... (1997), gen vt2e biến chủng gen stx2, biến chủng phát dòng E coli gây phù thủng heo Có mẫu phát E coli mang gen độc lực mẫu 4, 6, Ở mẫu phân có loại khuẩn lạc HS HM Cả hai loại khuẩn lạc mang gen...
... multiplex - PCR - Việc phátgen độc lực E coli thực phản ứng multiplex – PCR với máy luân nhiệt (thermal cycler): Multiplex – PCR1 : Phátgen eae, hly, stx1, stx2 Multiplex – PCR2 : Phátgen stx2e, ... Loại bỏ ống NA giữ gốc Multiplex - PCR (+) Ly trích DNA riêng theo ống NA Multiplex- PCR Sơ đồ 3.1 Phân lập, xác định E coli phátgen độc lực 34 3.3.3 Xác định gen stx1, stx2, eae, hly, stx2e, ... lẻ ống thạch NA - Ly trích DNA E coli phân lập - Thực phản ứng multiplex – PCR để phátgen gây độc E coli 3.3 Phươngpháp nghiên cứu 3.3.1 Lấy mẫu - Mẫu phân tiêu chảy Được lấy từ trực tràng tăm...
... chảy d Phát chẩn đốn Việc phát nhóm ETEC dựa vào phát độc tố LT và/hoặc ST Có nhiều phươngphápphát ETEC như: radioimmunoassay, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), DNA-probe, PCR 2.2 ... 5mM (Hồ Huỳnh Thùy Dương, 1998) 2.2.4 Phân tích kết PCR Sản phẩm phản ứng PCR (đoạn DNA khuếch đại) phátphươngpháp điện di Ngun tắc phươngpháp điện di dựa vào đặc tính cấu trúc DNA DNA đại ... đốn lâm sàng PhươngphápPCR cho phép thơng tin giải trình tự thu nhận cách nhanh chóng, thơng qua việc khuếch đại vùng liên quan genome dựa kết phân tích trực tiếp từ sản phẩm PCR Khả nhận biết...
... nuôi Nhóm EPEC (Enteropathogenic E coli) mang gen eae sản sinh protein intimin, … Trước đây, để phát E coli, người ta sử dụng phươngpháp nuôi cấy truyền thống Phươngpháp gặp khó khăn tốn thời ... Do vậy, việc phátgen gây độc E coli kỹ thuật PCR bước cần thiết góp phần đánh giá nguy gây bệnh vật nuôi người PCRphươngpháp nhanh, đặc hiệu, cho kết thời gian ngắn, kịp thời phát mầm bệnh ... thuật multiplex – PCR để phátgen độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ phân bò, phân heo tiêu chảy thịt bò” 1.2 Mục tiêu - Phát số gen độc lực E coli kỹ thuật multiplex – PCR từ mẫu phân...
... khuẩn lạc riêng lẻ theo phươngpháp nhiệt Kết multiplex - PCR ghi nhận sau: (1) Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực chưa khuẩn lạc riêng lẻ có mang gen độc lực (2) Tần số phátgen độc lực E coli từ ... 2.2 Kỹ thuật PCR 11 2.2.1 Nguyên tắc 11 2.2.2 Các giai đoạn phản ứng PCR 12 2.2.3 Các thành phần phản ứng PCR 14 2.2.4 Phân tích kết PCR .15 2.2.5 ... dụng PCR 15 2.2.5.1 PCR sử dụng để nghiên cứu lượng DNA nhỏ 15 2.2.5.2 PCR sử dụng chẩn đoán lâm sàng 16 2.2.5.3 PCR dùng để khuếch đại RNA .16 2.2.5.4 PCR sử dụng để so sánh genome...
... huyết dengue phươngpháp ELISA phátkháng nguyên NS1-DEN” tiến hành với mục đích: - Phátkháng nguyên NS1-DEN phươngpháp ELISA bệnh nhân có chẩn đoán SD/SXHD lâm sàng - Xác định tỉ lệ có kháng nguyên ... cần kết hợp hai phươngphápphát virus phátkháng thể IgM kháng virus dengue Việc phát virus qua nuôi cấy tế bào, phát nucleic acid kỹ thuật sinh học phân tử phátkháng nguyên NS1 huyết bệnh ... trị Phươngpháp ELISA phátkháng thể IgM kháng virus dengue xuất vào năm đầu thập niên 90 kỷ trước kít thương mại hóa nâng cao hiệu chẩn đoán bệnh nhiễm virus dengue cấp tính Kháng thể IgM kháng...
... ứng miễn dịch kháng nguyên kháng thể có gắn men - GM1 có vai trò thụ thể bám diính độc tố LT KT1 (kháng thể 1) : huyết thỏ kháng độc tố LT - KT2 (kháng thể 2) : Là huyết dê ( Ig G dê kháng thỏ ) ... GM1 (nồng độ 5àg/ml): - Pha huyết thỏ kháng độc tố LT tỷ lệ 1/1000 (Kháng thể - KT1) 4àl KT1 + 4000 àl R4 - Pha IgG dê kháng thỏ có gắn enzyme tỷ lệ 1/1000 ( Kháng thể hay gọi cộng hợp men KT 2) ... thuận lợi cho phát triển ETEC thực phẩm nớc Trong năm gần để phát độc tố E.coli có nhiều kỹ thuật đợc áp dụng nh: kỹ thuật ELISA, ngng kết (latex aglutination) phản ứng chuỗi men (PCR) (3, 4) E.coli...
... 88,89%) phát E coli mang gen độc lực, đó: - mẫu (66,67%) phátgen stb, chiếm tỉ lệ phát cao - mẫu (55,56%) phátgen lt - mẫu (33,33%) phátgen vt2e - mẫu (22,22%) phátgen hly - mẫu (11,11%) phátgen ... 2.2.6 Các hạn chế phươngphápPCR Do độ nhạy cao PCR đồng thời với thao tác đơn giản, người ta có khuynh hướng sử dụng phươngpháp để giải nhiều vấn đề Tuy nhiên, ta khơng thể qn phươngpháp có ... multiplex – PCR với máy ln nhiệt (thermal cycler): Multiplex – PCR1 : Phátgen eae, hly, stx1, stx2 Multiplex – PCR2 : Phátgen stx2e, sta, stb, lt-I - Trong q trình thực phản ứng multiplex – PCR, ...