... protein Chuyểngen công cụ thiếu nghiên cứu Hiện nay, nhiều phương pháp chuyểngen sử dụng chuyểngen thông qua tế bào trần (protoplast), chuyểngen xung điện, chuyểngen súng bắn genchuyểngen ... số gen thị dùng chuyểngenvi nấm Gen thị mã hóa protein tương ứng sử dụngtrong đánh giá hiệu chuyểngen dùng dấu hiệu để sàng lọc thể chuyểngen Sự có mặt gen thịkhiến tế bào /khuẩn lạc th chuyển ... pháp chuyểngen thông qua vikhuẩn A tumefaciens coi phương pháp đơn giản để chuyểngen vào nấm sợi Phương pháp ATMT chuyểngen vào nấm dựa chế chuyển đoạn T-DNA Ti-plasmid có mặt tế bào vi khuẩn...
... bp.T-DNA mang gen t ng h p auxin, cytokinin opine Các gen s tích h p vào h gen c a th c v t m t v trí ng u nhiên Ngồi T-DNA, Ti plasmid có vùng gen đ c, ch a gen virmã hóa protein (virA, virG, m t ... M tăs gen ch ăth ădùngătrongăchuy n genvi n m Gen ch th mã hóa protein t ng ng đ c s d ngtrong đánh giá hi u qu chuy n gen ho c dùng nh d u hi u đ sàng l c th chuy n gen S có m t c a gen ch ... cho trình chuy n gen 1.2.3.ăPh (ATMT) ngăphápăchuy n gen thôngăqua vi khu năA tumefaciens 1.2.3.1 C ch chuy n gen vào t bào ch c a A tumefaciens Vi khu n A tumefacienslà m t loài vi khu n Gram âm...
... protein Chuyểngen công cụ thiếu nghiên cứu Hiện nay, nhiều phƣơng pháp chuyểngen đƣợc sử dụng nhƣ chuyểngen thông qua tế bào trần (protoplast), chuyểngen xung điện, chuyểngen súng bắn genchuyển ... công để chuyểngen vào nấm [12] Phƣơng pháp chuyểngen thông qua vikhuẩn A tumefaciens đƣợc coi phƣơng pháp đơn giản để chuyểngen vào nấm sợi Phƣơng pháp ATMT chuyểngen vào nấm dựa chế chuyển ... Một số gen thị dùng chuyểngenvi nấm Gen thị mã hóa protein tƣơng ứng đƣợc sử dụng đánh giá hiệu chuyểngen dùng nhƣ dấu hiệu để sàng lọc thể chuyểngen Sự có mặt gen thị khiến tế bào /khuẩn lạc...
... virC, virD, virE, virG, virF vùng có kích thư c kho ng 30- 40 kbp Theo Stachel ctv (1987) [15] vùng có 20 gen n m operon, gen là: virA, virB, virC, virD, virE virG Nh ng gen vir có vai trò vi c t ... gen Vir Quá trình chuy n T-ADN t vi khu n Agrobacterium tumefaciens sang t bào ch ñư c th c hi n b i ho t ñ ng c a gen vir Có nh t 25 gen đư c nh n bi t ñơn v phiên mã là: virA, virB, virC, virD, ... c gen vir Các promoter c a gen vir có kích thư c kho ng 12 bp trình t “vir box” S phosphoryl hoá làm cho protein virG g n k t vào “vir boxes” kích ho t s mã c a gen virBCDEFGH [15] Các gen vir...
... cơng vi c chuyển nạp gen vào vải phương pháp tiêm DNA qua ống phấn, phương pháp gặp khó khăn vi c xác định chuyểngen nhiều tạo thành số chuyển nạp gen (Chen ctv, 2000) 11 2.3 Chuyểngenvikhuẩn ... tumefaciens để đưa gen mong muốn vào gen trồng Phương pháp sử dụng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens để chuyển nạp gen gọi phương pháp chuyển nạp gen gián tiếp 2.3.1 Đặc điểm vikhuẩnAgrobacterium ... hiểu khả chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens giống vải trồng Vi t Nam Vìvi c thực đề tài “Nghiên cứu khả chuyển nạp gen ba giống vải Coker 312 VN36P vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens...
... cơng vi c chuyển nạp gen vào vải phương pháp tiêm DNA qua ống phấn, phương pháp gặp khó khăn vi c xác định chuyểngen nhiều tạo thành số chuyển nạp gen (Chen ctv, 2000) 11 2.3 Chuyểngenvikhuẩn ... tumefaciens để đưa gen mong muốn vào gen trồng Phương pháp sử dụng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens để chuyển nạp gen gọi phương pháp chuyển nạp gen gián tiếp 2.3.1 Đặc điểm vikhuẩnAgrobacterium ... hiểu khả chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens giống vải trồng Vi t Nam Vìvi c thực đề tài “Nghiên cứu khả chuyển nạp gen ba giống vải Coker 312 VN36P vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens...
... NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN NẠP GEN CỦA HAI GIỐNG BÔNG VẢI COKER312 VÀ VN36P BẰNGVIKHUẨNAgrobacterium tumefaciens Giáo vi n hướng dẫn: TS.TRẦN THỊ CÚC HỊA Sinh vi n thực hiện: NGƠ VI T DUY Thành...
... bơng Vi t Nam 2.1.4 Tình hình sản xuất bơng Thế Giới 2.2 Một số nghiên cứu chuyển nạp gen vải .9 2.3 Chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens 11 2.3.1 Đặc điểm vikhuẩn ... TẮT NGƠ VI T DUY, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Tháng 8/2005 “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN NẠP GEN CỦA HAI GIỐNG BÔNG VẢI COKER 312 VÀ VN36P BẰNGVIKHUẨNAGROBACTERIUM TUMEFACIENS ” Giáo vi n hướng ... triển công nghệ sinh học, gen mong muốn chuyển vào bơng vải nhằm nâng cao suất, chất lượng xơ khả kháng sâu bệnh phương pháp khác phương pháp chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens...
... suất chuyểngen Trước chuyển gen, acetosyringone bổ sung vào dung dịch huyền phù vikhuẩn với nồng độ 50; 100 150 µM để đánh giá ảnh hưởng hợp chất phenolic đến hiệu suất chuyểngen Mật độ vikhuẩn ... tumefaciens) 3.5 Quy trình chuyểngen vào mầm cà chua 3.5.1 Khảo sát ảnh hưởng mật độ quang vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens (OD600nm) đến hiệu suất chuyểngen Kết khảo sát mật độ vikhuẩn cho thấy tỷ ... pCAMBIA 2301 – Cry1Ab, agarose (Invitrogen), ethidium bromide (Invitrogen), Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, cefotaxime (Vi t Nam), kanamycin sulphate (Invitrogen), glucose (Sigma), acetosyringone...
... đường mannose để ứng dụng vi c nghiên cứu khả chuyển nạp gen giống trồng Vi t Nam 34 CHƢƠNG TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VI T Lê Trần Bình, 2001 Thực trạng chuyển nạp genVi t Nam Hội Nghị Nhận Thức ... trồng biến đổi genvi c sử dụng gen đánh dấu chọn lọc gen kháng chất kháng sinh -Kỹ thuật tách nhỏ mô sẹo giai đoạn lọc đóng vai trò quan trọng vi c hạn chế phát triển mô không chuyển gen, đặc biệt ... ứng chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens hai giống vải Coker 312 VN36P vi c ứng dụng hệ thống lọc đường mannose chúng tơi có nhận xét sau: -Các giống vải Coker 312 VN36P sau chuyển...
... mannose gen thị gus chủng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens LBA 4404 (Hoekema ctv, 1983) Hình 3.3 Sơ đồ vector pManCa mang gen pmi gen gus 3.4.2.2 Chuẩn bị vikhuẩn Chủng vikhuẩn LBA4404 mang vector ... nuôi cấy với vi khuẩn, mẫu cấy rửa vikhuẩn nước cất vô trùng lần để loại bỏ vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens bám bề mặt mẫu cấy kháng sinh carbernicillin 500 mg/l để ức chế vikhuẩn mọc trở ... chuyển nạp gen 3.4.2.1 Nguồn plasmid Nguồn plasmid sử dụng để nghiên cứu vector pManCa (Hoa Bong, 2003) mang gen pmi (phosphomannose isomerase) giúp tế bào vikhuẩn biến dưỡng đường mannose gen...
... tumefaciens để đưa gen mong muốn vào gen trồng Phương pháp sử dụng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens để chuyển nạp gen gọi phương pháp chuyển nạp gen gián tiếp 2.3.1 Đặc điểm vikhuẩnAgrobacterium ... kiểu thuộc nhóm mannityl opine 2.3.2.2 Chức gen vir Vùng vir Plasmid Ti có khoảng 25 gen nhận biết đơn vị phiên mã là: virA, virB, virC, virD, virE, virG, virF (Nguyễn Đức Lượng ctv, 2002) vùng có ... tự “vir box” (Winans ctv, 1987) 15 Các gen vir có vai trò vi c tạo sợi đơn T-DNA vikhuẩn đưa sợi đơn TDNA vào tế bào Các protein mã hoá gen virD virE thực chức tạo phức hợp T-DNA Protein VirD2...
... lọc mẫu chuyểngen qua lần lọc với nồng độ kanamycin lần lƣợt 50mg/l, 25mg/l, 25mg/l 25mg/l (Haq, 2004) Điều làm cho số mẫu chuyển nạp gen mẫu chuyển nạp gen chƣa kịp thích nghi, gen đƣợc chuyển ... giúp giảm bớt khó khăn vi c xác định mô sẹo đƣợc chuyển nạp gen Kết lọc bảng 4.7 bảng 4.8 cho thấy tỉ lệ mẫu sống sót sau đƣợc chuyển nạp gen vải thấp Hiện nay, chuyển nạp gen vào vải, tác nhân ... cho mẫu chuyểngen sống sót đƣợc Trong đó, áp dụng bƣớc lọc nhƣ giúp làm giảm vi c mẫu chuyển nạp gen với cách thiết kế nhƣ tất mẫu có điều kiện phát triển nhƣ nhƣng mẫu đƣợc chuyểngen phát...
... hình thành mơ sẹo 4.2 Kết lọc Trong chuyển nạp gen, lọc mẫu điều quan trọng Thanh lọc mẫu giúp loại bỏ bớt mẫu không đƣợc chuyển nạp gen Các mẫu không chuyển nạp gen đƣợc loại bỏ cách đặt mẫu môi ... triển mô sẹo mẫu chuyển nạp gen Ở mẫu đối chứng không chuyển nạp gen, tỷ lệ chết 100% giống; mẫu chuyển nạp gen, tỷ lệ sống sót 1,73% giống Coker 312 3,67% giống SSR60F Vi c tách nhỏ khối mô sẹo ... mẫu môi trƣờng chứa tác nhân lọc Những mẫu không chuyển nạp gen không phát triển phát triển chậm mơi trƣờng có tác nhân lọc Trong đó, mẫu đƣợc chuyển nạp lại sống sót phát triển tốt mơi trƣờng...
... với vikhuẩn mẫu trụ hạ diệp đƣợc rửa nƣớc cất tiệt trùng kháng sinh carbenicillin để ức chế vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens Sau rửa mẫu trụ hạ diệp đƣợc làm khô giấy thấm tiệt trùng chuyển ... sơ khả đáp ứng chuyển nạp gen giống Phần mềm sử dụng trình phân tích số liệu: Microsoft Excel (Microsoft Office 2003) 37 Bảng 3.2 Tóm tắt quy trình chuyển nạp gen vào vải vikhuẩn Agrobactrieum ... huyền phù vikhuẩn đƣợc cấy chuyển sang 50 ml mơi trƣờng YEP có bổ sung kanamycin 50 mg/l nuôi cấy tiếp khoảng 16–18 280C, lắc 200 rpm Sau nuôi cấy khoảng 16-18 giờ, lấy 1ml dịch vikhuẩn để đo...
... khó khăn vi c xác định chuyểngen nhiều đƣợc tạo thành nhƣng số đƣợc chuyển nạp gen (Chen ctv., 2000) 2.3 Chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens Chuyển nạp gen kỹ thuật chuyểngen ngoại ... thông qua vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens để đƣa gen mong muốn vào gen trồng Phƣơng pháp sử dụng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens để chuyển nạp gen đƣợc gọi phƣơng pháp chuyển nạp gen gián ... nhóm mannityl opine 27 2.3.2.2 Chức gen Vir Vùng Vir plasmid Ti có khoảng 25 gen đƣợc nhận biết đơn vị phiên mã là: virA, virB, virC, virD, virE, virG, virF vùng có kích thƣớc khoảng 3040 kbp...
... SSR60F VÀ COKER 312 BẰNGVIKHUẨNAGROBACTERIUM TUMEFACIENS 13 1.2 Mục tiêu Khóa luận: “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN NẠP GEN CỦA HAI GIỐNG BÔNG VẢI SSR60F VÀ COKER 312 BẰNGVIKHUẨNAgrobacterium Tumefaciens” ... pháp vi tiêm, phƣơng pháp sử dụng PEG (polyethylene glycol), phƣơng pháp bắn gen phƣơng pháp chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens Nhƣng phổ biến chuyển nạp gen trực tiếp súng bắn gen ... thu nhận chuyểngen sau Hơn nữa, Vi t Nam chƣa có nghiên cứu xác định lồi bơng vải đƣợc trồng thích hợp vi c chuyển nạp gen Chính chúng tơi thực khóa luận: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN NẠP GEN CỦA...
... “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHUYỂN NẠP GEN CỦA HAI GIỐNG BÔNG VẢI SSR60F VÀ COKER 312 BẰNGVIKHUẨNAgrobacterium tumefaciens” Giảng vi n hƣớng dẫn: TS TRẦN THỊ CÚC HÒA Nghiên cứu chuyển nạp gen vào bơng vải ... thống 10 2.2.2 Một số nghiên cứu chuyển nạp gen vải 10 2.3 Chuyển nạp genvikhuẩnAgrobacterium tumefaciens 12 2.3.1 Đặc điểm vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens .13 2.3.2 Plamid Ti ... sợi… điều cần thiết ngành trồng nƣớc ta Vi c ứng dụng hệ thống lọc đƣờng mannose chuyển nạp gen thông qua vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens bơng mẻ Vi t nam Vi c sử dụng hệ thống lọc đƣờng mannose...