Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý ở gà mắc bệnh cúm gia cầm (h5n1) và ứng dụng phương pháp hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh

luận văn thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn

B GIO DC V O TO TRNG I HC NễNG NGHIP H NI -------***------- NGUYN THNH LONG Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý ở gà mắc bệnh Cúm gia cầm (H5N1) và ứng dụng phơng pháp Hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh LUN VN THC S NễNG NGHIP Chuyờn ngnh : Thỳ y Mó s : 60.62.50 Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS. Tễ LONG THNH TS. BI TRN ANH O H NI 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. i LỜI CAM ðOAN - Tôi xin cam ñoan rằng số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược bảo vệ một học vị nào. - Tôi xin cam ñoan rằng, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn này ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, viện Sau ñại học, khoa Thú y cùng các thầy cô giáo trong nhà trường ñã tạo ñiều kiện cho tôi ñược tiếp cận với những kiến thức khoa học về nông nghiệp trong hơn 2 năm học ở trường. ðể hoàn thành Luận văn này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận ñược sự giúp ñỡ tận tình của toàn thể cán bộ công nhân viên chức ở Trung tâm chẩn ñoán Thú y trung ương-Cục Thú y, trực tiếp là thầy hướng dẫn khoa học PGS. TS Tô Long Thành. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trong bộ môn Bệnh lý-khoa Thú y của trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, trực tiếp là thầy hướng dẫn khoa học TS. Bùi Trần Anh ðào. Nhân dịp hoàn thành luận văn, một lần nữa tôi xin ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới nhà trường, các thầy cô giáo, cơ quan, bạn bè ñồng nghiệp cùng người thân ñã ñộng viên, tào ñiều kiện giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu thực hiện ñề tài . Hà Nội, ngày 9 tháng 9 năm 2011 Tác giả Nguyễn Thành Long Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN . i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .ix PHẦN I: MỞ ðẦU . 1 1.1. ðẶT VẤN ðỀ 1 1.2. MỤC TIÊU CỦA ðỀ TÀI . 2 1.3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ðỀ TÀI 2 PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3 2.1. LỊCH SỬ BỆNH CÚM GIA CẦM 3 2.1.1. Lịch sử bệnh cúm gia cầm trên thế giới 3 2.1.2. Bệnh cúm gia cầm ở Việt Nam . 8 2.2. ðẶC ðIỂM SINH HỌC CỦA VIRUS CÚM TYPE A – CĂN NGUYÊN GÂY BỆNH CÚM GIA CẦM 10 2.2.1. ðặc ñiểm về hình thái và cấu trúc . 10 2.2.2. ðặc tính kháng nguyên của virus cúm type A 13 1.2.3. Thành phần hóa học và sức kháng của virus 15 2.2.4. Quá trình nhân lên của virus . 15 2.2.5. ðộc lực của virus . 16 2.2.6. Sức ñề kháng của virus 18 2.2.7. Nuôi cấy và lưu giữ virus 18 2.3. DỊCH TỄ HỌC BỆNH CÚM GIA CẦM 18 2.3.1. Loài vật mang virus . 18 2.3.3. Sự truyền lây . 20 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. iv 2.4. TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CỦA BỆNH CÚM GIA CẦM . 20 2.4.1. Triệu chứng lâm sàng ñiển hình của bệnh cúm gia cầm chủng ñộc lực cao 21 2.4.2. Triệu chứng lâm sàng của bệnh do những chủng virus cúm ñộc lực thấp 21 2.5. TỔN THƯƠNG 22 2.6. CHẨN ðOÁN BỆNH CÚM GIA CẦM 22 2.7. KHỐNG CHẾ BỆNH CÚM GIA CẦM 25 2.8. NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VỀ BỆNH CÚM GIA CẦM . 29 PHẦN 3. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 32 3.2. NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ, HÓA CHẤT 32 3.2.1. ðộng vật 32 3.2.2. Sinh phẩm, hóa chất 32 3.2.3. Dụng cụ, thiết bị thí nghiệm 32 3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.3.1. Phương pháp quan sát: 32 3.3.2. Phương pháp mổ khám toàn diện: . 33 3.3.3. Phương pháp làm tiêu bản vi thể: 35 3.3.4. Chẩn ñoán bằng phương pháp Hóa mô miễn dịch (IHC- Immonohistochemistry): 37 1.3.5. Phương pháp thống kê sinh học: .38 PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 39 4.1. TÌNH HÌNH DỊCH CÚM GIA CẦM Ở MỘT SỐ ðỊA PHƯƠNG TRONG 02 NĂM NGHIÊN CỨU (NĂM 2010-2011) . 39 4.2. MỘT SỐ TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG Ở GÀ MẮC BỆNH CÚM 41 4.3. TỔN THƯƠNG ðẠI THỂ TRÊN GÀ MẮC CÚM A - H5N1 . 45 4.3. TỔN THƯƠNG VI THỂ TRÊN GÀ MẮC CÚM A H5N1 . 52 4.5. KẾT QUẢ NHUỘM HOÁ MÔ MIỄN DỊCH MỘT SỐ CƠ QUAN CỦA GÀ MẮC CÚM A - H5N1 62 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. v PHẦN V: KẾT LUẬN - ðỀ NGHỊ 67 5.1. KẾT LUẬN 67 5.2. ðỀ NGHỊ 67 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1.a. Tình hình dịch cúm gia cầm H5N1 năm 2010 . 39 Bảng 4.1.b. Thống kê số mẫu cúm gia cầm H5N1 tới tháng 7 năm 2011 40 Bảng 4.2. Triệu chứng lâm sàng ở gà mắc cúm A (H5N1) 41 Bảng 4.3. Tổn thương ñại thể trên gà mắc cúm A (H5N1) . 45 Bảng 4.4. Tổn thương vi thể ở các cơ quan của gà mắc cúm H5N1 53 Bảng 4.5. Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch 62 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1: Cấu trúc virus H5N1 . 12 Ảnh 4.1: Mào, tích tím tái, phù ñầu 44 Ảnh 4.2: Gà xù lông 44 Ảnh 4.3: Xuất huyết da chân vùng không lông . 44 Ảnh 4.4: Phân xanh trắng 44 Ảnh 4.5: Phù keo nhày dưới da ñầu 50 Ảnh 4.6: Mỡ phủ tạng xuất huyết . 50 Ảnh 4.7: Khí quản xuất huyết . 50 Ảnh 4.8: Phổi viêm, xuất huyết, phù . 50 Ảnh 4.9: Tuyến tụy xuất huyết, hoại tử 50 Ảnh 4.10: Dạ dày tuyến xuất huyết . 50 Ảnh 4.11: Lách xuất huyết 51 Ảnh 4.12: Gan xuất huyết . 51 Ảnh 4.13: Tim xuất huyết . 51 Ảnh 4.14: Não sung huyết . 51 Ảnh 4.15: Thận xuất huyết 51 Ảnh 4.16: Ruột xuất huyết 51 Ảnh 4.17: Khí quản sung huyết, xuất huyết (HE, x200) . 59 Ảnh 4.18: Cấu trúc khí quản bị phá hủy (HE, x400) 59 Ảnh 4.19: Ruột: lông nhung bị phá hủy cấu trúc, . 59 xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) 59 Ảnh 4.20: Phổi sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) 59 Ảnh 4.21: Não sung huyết (HE, x100) 59 Ảnh 4.22: Não xuất huyết, tăng sinh tế bào thần kinh ñệm, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) 59 Ảnh 4.23: Gan sung huyết, xuất huyết, tế bào gan thoái hoá, hoại tử (HE, x400) . 60 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. viii Ảnh 4.24: Lách xuất huyết, tế bào lympho thoái hóa, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) . 60 Ảnh 4.25: Thận sung huyết, xuất huyết, tế bào viêm tập trung ở kẽ ống thận (HE, x400) . 60 Ảnh 4.26: Cơ tim xuất huyết, tế bào cơ tim hoại tử, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) . 60 Ảnh 4.27: Dạ dày tuyến sung huyết, các nang tuyến tách rời nhau (HE, x 100) 60 Ảnh 4.28: Tế bào tuyến hoại tử, tế bào viêm thâm nhập ở kẽ các nang tuyến (HE, x 400) 60 Ảnh 4.29: Tuyến tụy sung huyết (HE, x100) 61 Ảnh 4.30: Tế bào tuyến tụy hoại tử, xuất huyết (HE, x400) . 61 Ảnh 4.31: Tuyến ức sung huyết (HE, x100) . 61 Ảnh 4.32: Tuyến ức xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) . 61 Ảnh 4.33: Tổ chức kẽ liên kết các nang lympho dày lên, xuất huyết nhẹ (HE, x100) . 61 Ảnh 4.34: Tế bào biểu mô nang lympho thoái hóa, hoại tử, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400) 61 Ảnh 4.35: Sự phân bố virus ở lách (HMMD, x100 65 Ảnh 4.36: Sự phân bố virus ở lách (HMMD, x400) . 65 Ảnh 4.37: Sự phân bố virus ở phổi (HMMD, x100) . 65 Ảnh 4.38: Sự phân bố virus ở phổi (HMMD, x400) . 65 Ảnh 4.39: Sự phân bố virus ở não (HMMD, x100) 65 Ảnh 4.40: Sự phân bố virus ở não (HMMD, x400) 65 Ảnh 4.41: Sự phân bố virus ở ruột (HMMD, x100) .66 Ảnh 4.42: Sự phân bố virus ở ruột (HMMD, x400) . 66 Ảnh 4.43: Sự phân bố virus ở gan (HMMD, x100) 66 Ảnh 4.44: Sự phân bố virus ở gan (HMMD, x400) . 66 Ảnh 4.45: Sự phân bố virus ở thận (HMMD, x100) . 66 Ảnh 4.46: Sự phân bố virus ở thận (HMMD, x400) . 66 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. ix DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AEC: Amino ethyl carbazole CPE: Cyto pathogen effect ELISA: Emzyme Linked Immunosozbent Assay FAO: Food and Agriculture Organization of the United Nations HA, H: Haemagglutinin HI: Hemagglutination inhibitory test HE: Hematoxylin - Eosin HMMD: Hóa mô miễn dịch HPAI: Highly Pathogenic Avian Influenza LPAI: Low pathogenic avian influenza MDCK: Madin – Darby – Canine - Kidney NA, N: Neuraminidase NP: Nucleoprotein-NP RT-PCR: Reverse Transcription - Polymerase Chain Reaction WHO: World Health Organization . NGUYN THNH LONG Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý ở gà mắc bệnh Cúm gia cầm (H5N1) và ứng dụng phơng pháp Hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh LUN VN THC. cứu một số ñặc ñiểm bệnh lý ở gà mắc bệnh Cúm gia cầm (H5N1) và ứng dụng phương pháp Hóa mô miễn dịch trong chẩn ñoán bệnh 1.2. MỤC TIÊU CỦA ðỀ TÀI -