nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của bệnh do PARVOVIRUS gây ra trên chó và ứng dụng phương pháp hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh

luận văn thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI -------***------- NGUYỄN NGỌC HÙNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA BỆNH DO PARVOVIRUS GÂY RA TRÊN CHÓ VÀ ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP HÓA MÔ MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ðOÁN BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. BÙI TRẦN ANH ðÀO HÀ NỘI – 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào. Tôi xin cam ñoan rằng mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ. Tác giả luận văn Nguyễn Ngọc Hùng Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN Nhân dịp hoàn thành luận văn, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - TS. Bùi Trần Anh ðào, người hướng dẫn khoa học trực tiếp ñã ñóng góp nhiều ý kiến quan trọng từ những bước nghiên cứu ban ñầu ñến quá trình thực hiện viết luận văn. - Các thầy cô trong bộ môn Bệnh lý, cùng toàn thể các thầy cô giáo Khoa Thú y và Viện Sau ðại học, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn này. - Ban lãnh ñạo và các bạn ñồng nghiệp tại Bệnh xá thú y – Viện Thú y Quốc gia ñã tạo ñiều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện ñề tài. - Ban lãnh ñạo và các bạn ñồng nghiệp tại Bệnh viện thú y số 240 Âu Cơ ñã tạo ñiều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện ñề tài. - Ban lãnh ñạo và các bạn ñồng nghiệp tại Phòng mạch công ty Hanvet ñã tạo ñiều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện ñề tài. - Gia ñình, người thân và bạn bè ñã tạo ñiều kiện về vật chất và tinh thần giúp tôi vượt qua khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu ñề tài. Xin trân trọng cảm ơn! Tác giả luận văn Nguyễn Ngọc Hùng Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG .vii DANH MỤC ẢNH viii PHẦN 1: MỞ ðẦU .1 1.1. ðẶT VẤN ðỀ 1 1.2. MỤC ðÍCH 2 PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1. MỘT SỐ TƯ LIỆU VỀ LOÀI CHÓ 3 2.1.1. Nguồn gốc loài chó .3 2.1.2. Một số giống chó chính trên thế giới 3 2.1.3. Một số giống chó nuôi ở Việt Nam .4 2.2. MỘT SỐ ðẶC ðIỂM SINH LÝ CỦA CHÓ 8 2.2.1. Thân nhiệt ( o C) 8 2.2.2. Tần số hô hấp (số lần thở/phút) .9 2.2.3. Tần số tim (lần/phút) .10 2.3. BỆNH DO PARVOVIRUS TRÊN CHÓ 11 2.3.1. Lịch sử bệnh 11 2.3.2. Phân loại và một số ñặc tính sinh học của virus .12 2.3.3. Dịch tễ học 13 2.3.4. Cách sinh bệnh 14 2.3.5. Triệu chứng .16 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iv 2.3.6. Tổn thương 16 2.3.7. Chẩn ñoán 17 2.3.8. ðiều trị .19 2.3.9. Phòng bệnh 19 2.4. PHƯƠNG PHÁP HÓA MÔ MIỄN DỊCH 20 2.4.1. Cấu trúc kháng thể 20 2.4.2. Sự chọn lọc các kháng nguyên 21 2.4.3. Sự liên kết kháng nguyên kháng thể .22 2.4.4. Các kháng thể ñơn dòng và ña dòng .22 2.4.5. Cố ñịnh mô 23 2.4.6. Sự sửa chữa kháng nguyên 24 2.4.7. Hệ thống phát hiện 25 2.4.8. Màu sắc của phản ứng kháng nguyên kháng thể 26 PHẦN 3: NỘI DUNG, ðỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 3.1. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 28 3.1.1. Theo dõi các biểu hiện triệu chứng lâm sàng của chó mắc bệnh do Parvovirus 28 3.1.2. Nghiên cứu các tổn thương ñại thể của chó mắc bệnh do Parvovirus 28 3.1.3. Nghiên cứu các tổn thương vi thể của chó mắc bệnh do Parvovirus 28 3.1.4. Ứng dụng phương pháp hóa mô miễn dịch chẩn ñoán bệnh do Parvovirus 28 3.2. ðỐI TƯƠNG, ðỊA ðIỂM, NGUYÊN LIỆU, CÁCH TIẾP CẬN, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU .28 3.2.1. ðối tượng nghiên cứu 28 3.2.2. ðịa ñiểm nghiên cứu .28 3.2.3. Nguyên liệu .28 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… v 3.2.4. Cách tiếp cận .29 3.2.5. Thời gian nghiên cứu 29 3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.3.1. Xác ñịnh chó bị bệnh do Parvovirus .29 3.3.2. Phương pháp theo dõi các triệu chứng lâm sàng 31 3.3.3. Phương pháp mổ khám 32 3.3.4. Phương pháp làm tiêu bản vi thể .33 3.3.5. Phương pháp nhuộm hóa mô miễn dịch .36 3.3.6. Phương pháp xử lý số liệu .37 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 4.1. CÁC TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CỦA CHÓ MẮC PARVOVIRUS39 4.1.1. Xác ñịnh chó mắc Parvovirus .39 4.1.2. Triệu chứng của chó mắc Parvovirus 40 4.2. CÁC CHỈ TIÊU LÂM SÀNG CỦA CHÓ MẮC PARVOVIRUS 41 4.2.1. Thân nhiệt 43 4.2.2. Tần số hô hấp 44 4.2.3. Tần số tim mạch 45 4.3. CÁC TỔN THƯƠNG BỆNH LÝ Ở CHÓ MẮC PARVOVIRUS 45 4.3.1. Tổn thương ñại thể 45 4.3.2. Tổn thương vi thể 49 4.4. ỨNG DỤNG KỸ THUẬT HÓA MÔ MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ðOÁN BỆNH DO PARVOVIRUS 55 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 5.1. KẾT LUẬN 60 5.2. KIẾN NGHỊ .60 VI. TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT .61 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CPV2 Canine Parvovirus type 2 FPV Virus Panleucopénie féline CPV Canine Parvovirus One – step Test Kit KN Kháng nguyên KT Kháng thể DICT Dose Infectieuse en Culture de Tissus Ig Immunoglobulin C L Constant light V L Variable light Fc Fragment cristallsable Fab Fragment antigen binding ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay CPE Cyto Pathogen Effect Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1. Quy trình chuyển ñúc mẫu 34 Bảng 4.1. Kết quả ghi nhận các ca thử test CPV (n = 90) 39 Bảng 4.2. Các triệu chứng ñiển hình ở chó mắc bệnh do Parvovirus 40 Bảng 4.3. Các chỉ tiêu lâm sàng ở chó mắc bệnh do Parvovirus .42 Bảng 4.4. Các tổn thương ñại thể ở chó mắc bệnh do Parvovirus .46 Bảng 4.5. Các tổn thương vi thể ở một số cơ quan của chó mắc Parvovirus50 Bảng 4.6. Kết quả hóa mô miễn dịch ở các cơ quan của chó mắc Parvovirus .55 Bảng 4.7. Sự phân bố và mật ñộ của Parvovirus trong các cơ quan của chó mắc bệnh .57 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC ẢNH Ảnh 3.1. Tets thử CPV (Canine Parvovirus One – step Test Kit ) .31 Ảnh 4.1. Chó chết do mắc Parvovirus 46 Ảnh 4.2. Ruột ñầy hơi .48 Ảnh 4.3. Ruột xuất huyết 48 Ảnh 4.4. Dạ dày sung huyết 48 Ảnh 4.5. Hạch lâm ba sưng, xuất huyết 48 Ảnh 4.6. Gan sưng, sung huyết .48 Ảnh 4.7. Tim dãn, nhạt màu 48 Ảnh 4.8. Xoang ngực tích nước 49 Ảnh 4.9. Phổi tụ huyết, xuất huyết 49 Ảnh 4.10. Teo lớp lông nhung của ruột non, xuất huyết, lớp ñệm có thâm nhiễm các tế bào viêm. x100, HE. 53 Ảnh 4.11. Niêm mạc ruột bị tổ chức hóa, nhiều huyết quản mới ñược hình thành. x 400, HE 53 Ảnh 4.12. Xuất huyết ở biểu mô ruột non. Các tế bào mầm trong lớp biểu mô ruột non bị phá hủy. x 400. HE .53 Ảnh 4.13. Giảm mật ñộ tế bào lympho trong mảng Payer ở ruột non. x 400, HE 53 Ảnh 4.14. Biểu mô niêm mạc dạ dày bị phá hủy, xuất huyết . x 400, HE 54 Ảnh 4.15. Sung huyết ở phổi, xâm nhiễm tế bào lympho ở vách các phế nang. x 200, HE .54 Ảnh 4.16. Sung huyết, xuất huyết ở hạch màng treo ruột. x 100,HE 54 Ảnh 4.17. Lách tăng sinh nang lympho, xuất huyết. x 100, HE 54 Ảnh 4.18. Virus phân bố trong tuyến Lieberkuhn ruột. (x 200) .59 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ix Ảnh 4.19. Virus phân bố trong các .59 khe ruột. (x 200) 59 Ảnh 4.20. Virus phân bố ở hạch màng treo ruột. (x 150) .59 Ảnh 4.21. Virus trong các ñại thực bào và tế bào lympho. (x 200) 59