Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 27 Phản ứng kháng nguyên kháng thể là không thể nhìn thấy trong kắnh hiển vi nếu không ựược gắn nhãn. Thông dụng nhất nhãn là các enzym, ựặc biệt peroxidase và phosphatase kiềm. Mỗi enzym có một nền ựặc trưng và chất tạo sắc ựể tạo ra một kết tủa. Các chất tạo sắc phổ biến là màu nâu, ựỏ, xanh. Sự lựa chọn enzym và chất tạo sắc sẽ phụ thuộc vào nhiều yếu tố: cường ựộ phản ứng, vị trắ của sự hiện diện kháng nguyên kháng thể, sự có mặt hoặc vắng mặt sắc tố nội sinh (Van Hecke, 2002). đối với peroxidase, 3,39 diaminobenzidine tetraclorua (DAB) là chất tạo sắc thường sử dụng, tạo ra màu nâu, không hòa tan trong dung môi hữu cơ. DAB không phải là chất tạo sắc tối ưu, chất tạo sắc khác hoặc phosphatase kiềm là nên ựược sử dụng (R.Morailon, 1993). 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC), một chất tạo sắc khác cho peroxidase, tạo nên màu ựỏ. Lưu ý khi sử dụng chất tạo sắc, vỏ bọc ựã qua xử lý hóa chất phải ựược tạo ra cùng với một dược chất tan trong nước (các kết tủa sẽ bị rửa sạch cùng với dung môi hữu cơ). 4-chloro-1-naphthol- precipitates tạo màu xanh, hòa tan trong dung môi hữu cơ. đối với phosphatase kiềm, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate tạo màu xanh, fucsin tạo màu ựỏ là các chất tạo sắc phổ biến nhất ựược sử dụng. Phosphatase kiềm ựược khuyến khắch cho hóa mô miễn dịch của mẫu mô xét nghiệm (Boenisch, 2001). Sự lựa chọn màu phụ chủ yếu sẽ phụ thuộc vào màu sắc của các phản ứng miễn dịch. Các màu phụ cần tạo ra sự tương phản ựủ ựể tránh nhầm lẫn với màu sắc kết tủa. Màu phụ sử dụng nhiều nhất là hematoxylin, methyl green. Trong một số trường hợp, ựặc biệt với kháng nguyên hạt nhân hiện diện với số lượng nhỏ, không khuyến khắch sử dụng màu phụ.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 28
PHẦN 3
NỘI DUNG, đỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU