Phản ứng kháng nguyên kháng thể không nhìn thấy ựược bằng kắnh hiển vi quang học trừ khi nó ựược gắn nhãn. Nhãn ựược gắn vào bậc nhất, bậc hai, bậc ba của một hệ thống phát hiện ựể cho phép tưởng tượng phản ứng miễn dịch. Một loạt các chất gắn ựã ựược sử dụng, bao gồm các hợp chất huỳnh quang và kim loại (Lucocq và Roth, 1985; Van Hecke, 2002). Chất gắn thường ựược sử dụng nhất là các enzyme (peroxidase, phosphatase kiềm, glucose oxidase). Enzym trong sự hiện diện của một chất nền ựặc trưng và
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 26 một chất tạo sắc sẽ tạo nên một chất kết tủa có màu sắc tại vị trắ phản ứng kháng nguyên kháng thể. Sự chọn lọc hệ thống phát hiện là rất quan trọng, xét về ựộ nhạy của một phản ứng miễn dịch sẽ phụ thuộc chủ yếu vào các hệ thống phát hiện sử dụng. Hệ thống phát hiện ựược phân loại là phương pháp trực tiếp và gián tiếp.
- Phương pháp trực tiếp:
đây là phương pháp ựơn giản nhất của kỹ thuật hóa mô miễn dịch. Phản ứng này là quá trình từng bước một kháng thể chắnh kết hợp với một phân tử gián tiếp (gắn). Các chất gắn khác nhau ựã ựược sử dụng như chất tạo sắc huỳnh quang, enzym, chất keo màu vàng, vitamin H (Polak và Van Noorden, 2003). Các phương pháp này nhanh chóng nhưng lại thiếu ựộ nhạy ựể phát hiện kháng nguyên.
- Phương pháp gián tiếp:
đầu tiên, kháng thể chắnh không ựược gắn, còn nhưng kháng kháng thể ựược gắn. độ nhạy của phương pháp này cao hơn so với phương pháp trực tiếp bởi vì các kháng thể chắnh ựược giữ lại ựể hoạt ựộng tạo ra một dấu hiệu mạnh và một số chất gắn cho mỗi phân tử kháng thể chắnh cao hơn, tăng cường ựộ phản ứng. Kết quả, tăng khả năng phát hiện một lượng nhỏ kháng nguyên hoặc tăng pha loãng kháng thể chắnh. Một kháng thể thứ hai có thể ựược sử dụng ựể phát hiện nhiều kháng thể chắnh khác nhau miễn là chúng ựược tạo ra trong cùng loài (Polak và Van Noorden, 2003).
Ngoài ra, các phương pháp phát hiện khác cũng ựang ựược sử dụng: - Phương pháp Avidin- biotin: dùng với các mô giàu biotin như gan và thận - Phương pháp peroxidase- antiperoxidase (PAP)
- Phương pháp gắn polymer hai bước - Phương pháp khuếch ựại tyramine.