Sự cố ựịnh làm thay ựổi cấu trúc bậc ba của các protein kháng nguyên, nhiều lần làm cho chúng không bị phát hiện bởi các kháng thể ựặc trưng. Thực tế này ựược hiểu rõ hơn nếu nhớ rằng phản ứng kháng nguyên kháng thể phụ thuộc vào hình dáng của chúng trước ựó (Hayat, 2002). Trong thời gian cố ựịnh mẫu, do có sự thay ựổi cấu trúc bậc ba của protein kháng nguyên nên việc sửa chữa một trong số những thay ựổi ựó của kháng nguyên là rất cần thiết. Khoảng 85% các kháng nguyên cố ựịnh trong formalin yêu cầu một số loại sửa chữa kháng nguyên ựể tối ưu hóa phản ứng miễn dịch (Ramos Vara, 2000). Sự sửa chữa kháng nguyên không chỉ phụ thuộc vào kháng
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 25 nguyên kiểm tra mà còn trên kháng thể sử dụng. Phổ biến nhất của sửa chữa kháng nguyên sử dụng trong hóa mô miễn dịch là enzym và nhiệt.
Sửa chữa kháng nguyên với enzym là phương pháp thông dụng nhất trước khi có sự ra ựời của phương pháp dựa trên nhiệt. Nhiều enzym ựã ựược sử dụng cho mục ựắch này, bao gồm trypsin, protein K, pronase, ficin, và pepsin. Sự ảnh hưởng của enzyme protease gây ra sửa chữa epitope phụ thuộc vào nồng ựộ, loại enzym, và các thông số thời gian, nhiệt ựộ, ựộ pH, và giới hạn của sự cố ựịnh. Nó có thể gây ra thay ựổi hình thái mô, tiêu hủy các epitope (Nez và cs, 1988; Van Hecke, 2002).
Sửa chữa kháng nguyên với nhiệt là phương pháp thúc ựẩy hóa mô miễn dịch phát hiện sự có mặt của các kháng nguyên trong chất cố ựịnh liên kết (formaldehyde). Các cơ chế liên quan ựến sửa chữa epitope bởi nhiệt là chưa ựược biết rõ, nhưng hiệu quả cuối cùng của nó là sự trở lại hình dạng ựã thay ựổi trong suốt quá trình cố ựịnh. Ở nhiệt ựộ cao (1000C) trong một thời gian ngắn (10 phút) cho kết quả nhiều thành tựu hơn so với một nhiệt ựộ tương ựối thấp trong thời gian dài (Hayat, 2002). Không có dung dịch sửa chữa kháng nguyên chung. Dung dịch sửa chữa kháng nguyên bằng nhiệt khác là từ các chất ựệm khác nhau (vắ dụ: citrate, Tris) với pH khác nhau (3- 10) ựã ựược sử dụng. độ pH của dung dịch là rất quan trọng.