Từ các mẫu gửi xét nghiệm tới Trung tâm chẩn ựoán Thú y trung ương, qua kết quả xét nghiệm dương tắnh với virus cúm gia cầm H5N1, các mẫu dương tắnh này ựược lấy làm tiêu bản vi thể ựể nghiên cứu mức ựộ tổn thương ở cấp ựộ vi thể. Chúng tôi tiến hành lấy 10 con gà mắc bệnh ựiển hình. Ở mỗi mẫu nguyên con, chúng tôi tiến hành lấy nhiều cơ quan ựể nghiên cứu: não, phổi, gan, lách, thận, ruột, dạ dày tuyến, túi Fabricius, khắ quản, timẦ
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi dựa trên những tiêu bản dương tắnh ựiển hình và rất ựiển hình và ựược tổng hợp ở bảng 4.4 sau:
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 53
Bảng 4.4. Tổn thương vi thể ở các cơ quan của gà mắc cúm H5N1
Tổn thương vi thể
Sung huyết Xuất huyết Hoại tử
tế bào Thoái hóa tế bào Thâm nhiễm tế bào viêm TT Cơ quan nghiên cứu N N (+) (%) N (+) (%) N (+) (%) N (+) (%) N (+) (%) 1 Phổi 20 20 100 20 100 5 25 4 20 20 100 2 Khắ quản 20 20 100 15 75 8 40 10 50 17 85 3 Tim 20 14 70 17 85 9 45 17 85 15 75 4 Gan 20 20 100 18 90 17 85 18 90 20 100 5 Lách 20 20 100 20 100 5 25 8 40 20 100 6 Thận 20 20 100 20 100 9 45 9 45 20 100 7 Não 20 20 100 18 90 0 0 0 0 20 100 8 Dạ dày tuyến 20 18 90 17 85 10 50 15 75 20 100 9 Ruột 20 20 100 20 100 10 50 15 75 20 100 10 Tuyến tụy 20 20 100 20 100 16 80 20 100 20 100 11 Tuyến ức 20 20 100 12 60 8 40 8 40 10 50 12 Túi Fabricius 10 10 100 8 80 0 0 5 50 5 50
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 54 Qua bảng 4.4 cho thấy: hầu hết các cơ quan trong cơ thể gà mắc bệnh ựều có biến ựổi vi thể. Sự biến ựổi tập trung ở các cơ quan có tắnh biệt hóa cao như: phổi, gan, thận, nãoẦ
- Ở phổi: quan sát các block thấy có 100% có biểu hiện sung huyết, xuất huyết và có tế bào viêm xâm nhập, tỷ lệ hoại tử tế bào là 25% và thấp nhất là thoái hóa tế bào chiếm tỷ lệ 20%. Hiện tượng sung huyết và xuất huyết ở phổi có thể quan sát rất rõ trên hình ảnh chụp ựược, các tế bào hồng cầu tập trung lấp ựầy mạch quản và tràn ngập trong lòng các phế nang khi thành mạch bị tổn thương. Bên cạnh sự tràn ngập của tế bào hồng cầu ra lòng phế nang, còn quan sất thấy sự thâm nhiễm tế bào viêm ở tất cả các tiêu bản quan sát, vách phế nang dày lên. Qua ựây cho thấy sự tổn thương trầm trọng ở phổi của gà mắc cúm làm phổi suy giảm chức năng vốn có của nó.
- Khắ quản: sung huyết chiếm tỷ lệ 100% số block nghiên cứu, xuất huyết với tỷ lệ 75%, 40% hoại tử tế bào, 50% thoái hóa tế bào, thâm nhiễm tế bào viêm với tỷ lệ khá cao tới 85%. Bên cạnh ựó, ở cấp ựộ vi thể còn quan sát ựược sự phá hủy cấu trúc của khắ quản một cách trầm trọng.
- Tim: biến ựổi vi thể ựiển hình ở cơ tim trong bệnh cúm là cơ tim bị hoại tử, các sợi cơ tách biệt nhau, xen vào ựó là dịch phù chứa ựầy trong kẽ các sợi cơ và các tế bào hồng cầu chèn ép, xâm lấn các sợi cơ làm cấu trúc tim bị phá hủỵ Có lẽ ựây cũng chắnh là nguyên nhân làm cho tim gà mắc cúm bị nhãọ
- Gan: do có vị trắ xung yếu và chức năng khá phức tạp nên gan là cơ quan rất dễ bị tổn thương, diễn biến quá trình bệnh lý của gan phụ thuộc vào thời gian của virus xâm nhập vào cơ thể. Sự tổn thương của gan ngoài sự sung huyết (100%) và xuất huyết (90%) còn tập trung vào sự tổn thương của tế bào gan như: thoái hóa (90%), hoại tử (85%).
Tế bào gan bị thoái hóa không bào, nguyên sinh chất có nhiều khoảng trống, ựây là hậu quả của quá trình rối loạn trao ựổi protein. Hiện tượng thoái
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 55 hóa làm xuất hiện các khoảng trống trong nguyên sinh chất. Chúng tôi nhận thấy dạng thoái hóa này rất phổ biến trong tổn thương vi thể của gan gà mắc cúm, tỷ lệ lên tới 90% số block nghiên cứụ Ở mức ựộ nhẹ, các không bào tạo ra khoảng trắng lỗ trỗ, nhân tế bào vẫn bình thường không có biểu hiện gì. Nếu nặng các không bào chiếm gần hết dung tắch của tế bào chất, lúc này nguyên sinh chất chỉ thấy vệt mỏng quanh màng tế bào hoặc quanh nhân, nhân tế bào bị ảnh hưởng rõ rệt, chất nhân tiêu biến ựi, xuất hiện các khoảng không bào trong nhân. Quan sát dưới kắnh hiển vi chúng tôi thấy nhân to hơn bình thường hoặc chỉ còn lại vỏ nhân.
Ở những ca bệnh mà gà chết muộn, quan sát thấy tế bào gan bị thoái hóa mỡ, trong tế bào gan có nhiều giọt mỡ tròn và sáng. Bên cạnh tổn thương thoái hóa mỡ, còn quan sát thấy tế bào gan bị hoại tử, cấu trúc gan bị thay ựổi nhân tế bào gan vỡ ra hòa lẫn vào nguyên sinh chất tạo thành hình ảnh ựồng nhất, ranh giới các tế bào gan không rõ ràng, chúng bắt màu hồng ựều khi nhuộm Eosin.
Trong các tiêu bản quan sát, thấy có 100% ựều có sự thâm nhiễm của tế bào viêm, chủ yếu là tế bào lymphọ Một số tiêu bản còn quan sát thấy tế bào xơ ở gan.
- Lách: tổn thương chủ yếu tập trung ở tủy trắng, tế bào nhu mô lách bị thoái hóa chiếm 40%, nhân tế bào bắt màu nhạt hơn. Tế bào viêm thâm nhiễm ở tất cả các block nghiên cứụ Ngoài ra còn quan sát thấy các tế bào Heterophil, tế bào xơ.
Quan sát các tiêu bản vi thể lách, chúng tôi thấy các nang sinh trưởng trong lách giãn rộng, hồng cầu tập trung nhiều ở vùng tủy ựỏ và xâm nhập cả vào vùng tủy trắng của lách. Một số tiêu bản quan sát còn thấy các tế bào nội mạc huyết quản của lách bị thoái hóa làm cho ựộng mạch mỏng ựi nhiều so với bình thường.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 56 - Não: 100% tiêu bản não quan sát thấy sung huyết, hồng cầu tập trung lấp ựầy mạch quản nãọ Bình thường lòng mạch quản không có hồng cầu vì nhịp tim cuối cùng trước khi con vật chết là nhịp tim thu, vì vậy máu ựã dồn hết từ ựộng mạch sang tĩnh mạch. Trong các trường hợp sung huyết, do giãn ựộng mạch nên trong lòng các ựộng mạch này sẽ có hồng cầụ đó chắnh là ựặc ựiểm vi thể khi xác ựịnh mạch quản bị sung huyết. Bên cạnh ựó còn quan sát thấy xuất huyết ở não lên tới 90%. Ngoài ra, tế bào viêm thâm nhiễm trong não chiếm tỷ lệ 100%, ựặc biệt là các tế bào thần kinh ựệm, nhân tế bào bắt màu xanh ựứng tụ lại hoặc nằm rải rác khắp vi trường. đây cũng là một tổn thương vi thể rất ựặc trưng cho bệnh tắch của cúm. Chắnh những tổn thương trên ựã gây ra sự chèn ép ở não làm cho gà bệnh có những triệu chứng thần kinh như rối loạn vận ựộng.
- Thận: hiện tượng sung huyết, xuất huyết và thâm nhiễm tế bào viêm ựược quan sát thấy ở tất cả các block nghiên cứụ Ở những gà bị bệnh kéo dài, biến ựổi vi thể thấy rõ hơn. Một số ống thận bị phá hủy cấu trúc nằm xen kẽ với những ống thận còn nguyên vẹn, tế bào ống thận bị hoại tử và thoái hóa chiếm tỷ lệ 45%. Hoại tử tế bào ở ống thận ựược thấy ở 2 mức ựộ:
Mức ựộ 1: nhân tế bào ống thận co cụm lại thành một chấm nhỏ, nguyên sinh chất rộng ra bắt màu hồng của Eosin chiếm ưu thế.
Mức ựộ 2: là mức ựộ tổn thương nặng hơn, nhân tế bào tan vào nguyên sinh chất, tế bào thành một khối ựồng nhất thành một màu hồng ựềụ
Giữa các ống thận có sự xen kẽ của tế bào viêm và các tế bào hồng cầu do xuất huyết gây ra, làm chèn ép các ống thận.
- Ruột: ở các block nghiên cứu thấy có 100% tiêu bản có tổn thương sung huyết, xuất huyết và có sự thâm nhiễm tế bào viêm. Hoại tử tế bào ở ruột chiếm tỷ lệ 50%, thoái hóa tế bào chiếm 75%.
Tuy nhiên, mức ựộ tổn thương nặng hay nhẹ phụ thuộc vào từng trường hợp bệnh khác nhaụ Ở mức ựộ nhẹ, quan sát bằng kắnh hiển vi thấy cấu trúc
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 57 ruột hầu như không thay ựổi, tế bào biểu mô của niêm mạc ruột chỉ bị thoái hóa, chưa thấy hiện tượng hoại tử tế bào; vùng hạ niêm mạc quan sát thấy các mạch quản bị sung huyết. Ở mức ựộ nặng, cấu trúc lông nhung của niêm mạc ruột bị phá hủy, có hiện tượng xuất huyết tràn lan làm che khuất các tế bào nhu mô, ngoài hiện tượng thoái hóa tế bào còn thấy tế bào biểu mô niêm mạc ruột bị hoại tử bắt màu hồng ựều, mất cấu trúc tế bào không thể phân biệt ựược phần nhân và tế bào chất. Bên cạnh ựó còn tăng sinh tế bào viêm, chủ yếu là tế bào lympho và có sự teo ựi của tuyến tiết dịch tiêu hóạ
- Dạ dày tuyến: các biến ựổi tương tự như ở ruột nhưng ở mức ựộ nhẹ hơn. Hiện tượng sung huyết chiếm tỷ lệ 90%, xuất huyết với tỷ lệ 85% nhưng mức ựộ xuất huyết không phải trầm trọng ở tất cả các số block nghiên cứụ Hoại tử tế bào chiếm 50%, 75% có hiện tượng thoái hóa tế bàọ Ở tất cả các tiêu bản quan sát ựều thấy có thâm nhiễm tế bào viêm, có sự tổn thương tách rời giữa các nang tuyến, các tế bào hoại tử ở mức ựộ nặng không còn quan sát thấy nhân mà chỉ thấy tế bào bắt màu hồng ựồng nhất của Eosin. Bên cạnh những tế bào viêm thâm nhiễm có cả các tế bào xơ ở ranh giới giữa các nang tuyến với nhaụ
- Tuyến tụy: biến ựổi vi thể quan sát rõ ựược ngay cả ở gà mắc bệnh chưa có biến ựổi ựại thể nên có thể dùng ựể chẩn ựoán phân biệt trong các trường hợp bệnh tắch ựại thể giống nhaụ Tỷ lệ sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm ựều thấy ở tất cả các block nghiên cứu (20/20 block). Các tế bào hồng cầu xuất huyết tập trung thành từng ựám, nổi bật hơn cả là hình ảnh họai tử tế bào tuyến tụy một cách trầm trọng nhưng chỉ chiếm 80%, ở vi trường quan sát ựược hình ảnh nhiều ựám tế bào bắt màu hồng ựều một cách ựồng nhất do hoại tử tế bào, nhân tế bào vỡ và tan vào nguyên sinh chất nên không có vết tắch của nhân.
- Tuyến ức: các tổn thương vi thể bao gồm sung huyết ở tỷ lệ 100%, xuất huyết chiếm tỷ lệ 60% các block nghiên cứu, thoái hóa tế bào chiếm 40%.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 58 Trong ựó dạng thoái hóa không bào là chủ yếu, nhân tế bào co lại, khoảng không bào chiếm gần hết dung tắch của tế bàọ Các tế bào hồng cầu tập trung thành từng ựám xen kẽ và che lấp các tế bào tuyến ức.
- Túi Fabricius: chúng tôi tiến hành nghiên cứu túi Fabricius ở những gà dưới 6 tuần tuổi, bởi lẽ ở gà ựẻ thì túi Fabricius ựã bị teo chỉ còn các tế bào xơ.
Nhìn chung, ở các block nghiên cứu, cấu trúc vi thể của túi Fabricius vẫn chặt chẽ, rõ ràng và có hình thái bình thường.
Túi Fabricius ựược cấu trúc lympho-biểu mô, biểu mô ựược cấu tạo bằng lớp biểu mô hình trụ nhân dài, bắt màu xanh tắm, tế bào chất bắt màu hồng mịn. Các nang lympho ựược cấu tạo bằng các tế bào lâm ba cầu, vách ngăn giữa các nang mỏng, rõ rệt.
Dưới sự tác ựộng của virus, chúng tôi thấy có sự thay ựổi trên tế bào biểu mô, tế bào biểu mô thường trương to và thâm nhiễm tế bào viêm ở dưới biểu mô, kẽ các nang lympho làm dày tổ chức kẽ. Ngoài ra tế bào nhu mô trong các nang lympho bị thoái hóa hoặc hoại tử làm cấu trúc giữa các nang lympho trở lên rời rạc và thưa thớt. Quan sát cấu trúc các nang lympho cho thấy, có những nang cấu trúc ựã bị phá hủy, lòng nang giãn rộng, các tế bào biểu mô của nang bị thoái hóa nên bắt màu mờ nhạt hơn so với những nang cấu trúc còn nguyên vẹn. điều này ựược chứng minh bằng hình ảnh chụp ựược qua kắnh hiển vi trên tiêu bản quan sát.
Tóm lại: tổn thương vi thể chủ yếu ở gà mắc bệnh cúm gia cầm H5N1 là: sung huyết, xuất huyết, phù, thoái hóa, hoại tử và thâm nhiễm tế bào viêm ở hầu hết các cơ quan của gà bệnh như phổi, gan lách, thận, não, tim, ruột, tụy, túi Fabricius, dạ dày tuyến, khắ quản, tuyến ức trong ựó hiện tượng sung huyết, xuất huyết và thâm nhiễm tế bào viêm chiếm tỷ lệ rất cao, thường tới 100% các block nghiên cứụ
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 59
Một số hình ảnh vi thể ở các cơ quan gà mắc cúm gia cầm H5N1
Ảnh 4.17: Khắ quản sung huyết, xuất huyết (HE, x200) Ảnh 4.18: Cấu trúc khắ quản bị phá hủy (HE, x400)
Ảnh 4.19: Ruột: lông nhung bị phá hủy cấu trúc, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Ảnh 4.20: Phổi sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Ảnh 4.21: Não sung huyết (HE, x100)
Ảnh 4.22: Não xuất huyết, tăng sinh tế bào thần kinh ựệm, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 60
Ảnh 4.23: Gan sung huyết, xuất huyết, tế bào gan thoái hoá, hoại tử (HE, x400)
Ảnh 4.24: Lách xuất huyết, tế bào lympho thoái hóa, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Ảnh 4.25: Thận sung huyết, xuất huyết, tế bào viêm tập trung ở kẽ ống thận (HE, x400)
Ảnh 4.26: Cơ tim xuất huyết, tế bào cơ tim hoại tử, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Ảnh 4.27: Dạ dày tuyến sung huyết, các nang tuyến tách rời nhau (HE, x 100)
Ảnh 4.28: Tế bào tuyến hoại tử, tế bào viêm thâm nhập ở kẽ các nang tuyến (HE, x 400)
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 61
Ảnh 4.29: Tuyến tụy sung huyết (HE, x100)
Ảnh 4.30: Tế bào tuyến tụy hoại tử, xuất huyết (HE, x400)
Ảnh 4.31: Tuyến ức sung huyết (HE, x100)
Ảnh 4.32: Tuyến ức xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Ảnh 4.33: Tổ chức kẽ liên kết các nang lympho dày lên, xuất huyết nhẹ (HE, x100)
Ảnh 4.34: Tế bào biểu mô nang lympho thoái hóa, hoại tử, thâm nhiễm tế bào viêm (HE, x400)
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 62