Nghiên cứu ghóp phần hoàn thiện quy trình nhân giống cây hoa đồng tiền gerbera jamesonii bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - VI THỊ HÀ Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU GHĨP PHẦN HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamesonii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 - 2014 Thái Nguyên, 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - VI THỊ HÀ Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU GHĨP PHẦN HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamesonii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NI CẤY MƠ TẾ BÀO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 - 2014 Người hướng dẫn : PGS.TS Ngơ Xn Bình Khoa CNSH - CNTP, ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Th.S Đào Duy Hưng Viện Khoa học Sự sống, ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, 2014 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Hoa đồng tiền có tên khoa học Gerbera jamesonii (còn gọi hoa mặt trời hay hoa phu lăng) [1] Hoa đồng tiền phong phú, đa dạng với nhiều màu sắc khác như: đỏ, cam, vàng, trắng, hồng phấn, tím,… Trên bơng hoa có màu đơn nhiều màu xen kẽ Hoa đồng tiền hoa lý tưởng để làm bó hoa, lẵng hoa cắm nghệ thuật Ngoài ra, đồng tiền trồng vào chậu để chơi chậu hoa suốt thời gian dài, đặt phòng làm việc, phòng khách phù hợp Trong sản xuất, hoa đồng tiền lồi hoa có giá trị kinh tế cao: Hoa đồng tiền trồng lần cho thu quanh năm, cho khoảng từ 50 - 60 bông/năm [1], hoa đồng tiền trồng khoảng 60.000 [3]; giá hoa đông tiền thị trường khoảng từ 2000 - 3000 đồng/bông Tuy giá trị đầu hoa đồng tiền không cao hoa lily, hoa phăng, hoa layon xét mặt hiệu kinh tế thu đơn vị diện tích lại cao Hoa đồng tiền nước ta nhập nội từ năm 1940 đến phát triển nhiều tỉnh thành nước Tuy nhiên, diện tích trồng hoa đồng tiền nước thấp, chất lượng hoa số vùng yếu, chủ yếu trồng số địa phương có điều kiện như: Đà Lạt, Hà Nội, Hải Phịng, Thành Phố Hồ Chí Minh,…Nguyên nhân hạn chế diện tích chất lượng hoa [3]: + Thiếu giống tốt thường xuyên phải nhập nội chủ yếu từ Hà Lan Trung Quốc với giá thành cao không rõ nguồn gốc, thiếu chủ động Do vây, chi phí sản xuất người trồng hoa bị nâng cao, từ giá thành sản xuất lên cao + Hoa đồng tiền thường nhiễm bệnh nấm phytophthora điều kiện trồng trọt vùng nhiệt đới nước ta Với nguồn nước ô nhiễm, vệ sinh đồng ruộng kém, cành hoa bị cắt sát đất dễ mẫn cảm với bệnh nên giống đồng tiền bị thối hóa nhanh Do vậy, cơng tác nghiên cứu chọn tạo, nhập nội,tuyển chọn giống hoa đồng tiền thích nghi với điều kiện khí hậu nước ta có ý nghĩa quan trọng góp phần nâng cao hiệu sản xuất, tăng thu nhập cho người dân Xuất phát từ thực tế trên, để góp phần vào cơng tác nhân giống hồn thiện quy trình kỹ thuật thâm canh nâng cao suất, chất lượng hiệu sản xuất hoa đồng tiền, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ghóp phần hồn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) phương pháp nuôi cấy mô tế bào” 1.2 Mục đích nghiên cứu Hồn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) phương pháp nuôi cấy mô tế bào 1.3 Mục tiêu đề tài - Xác định hàm lượng chất kích thích sinh trưởng (Kinetine BAP), nước dừa tới khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền - Xác định hàm lượng chất kích thích sinh trưởng (NAA, IBA) than hoạt tính đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Giúp sinh viên củng cố hệ thống lại kiến thức học nghiên cứu khoa học - Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý phân tích số liệu, cách trình bày báo cáo khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết nghiên cứu góp phần hồn thiện quy trình kỹ thuật nhân giống hoa đồng tiền nhằm cung cấp giống với số lượng lớn, chất lượng đảm bảo, đồng thời giữ đặc tính di truyền chọn lọc PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa đồng tiền 2.1.1 Nguồn gốc phân loại Cây hoa đồng tiền có tên khoa học Gerbera jameanii có nguồn gốc từ Nam Phi Theo hệ thống học thực vật nhất, hoa đồng tiền phân loại sau: Giới : Plantae Nghành : Magnoliopsida Lớp : Magnoliopsida (lớp mầm) Bộ : Asteraceae (hoa cúc) Phân họ : Mutisioideae Chi : Gerbera Chi đồng tiền Gerbera có khoảng 40 lồi Các giống trồng lai G viridifilia Schult Bip G jamesonii với giống lai tự nhiên Nam Phi Năm 1889, đồng tiền Hoorker miêu tả lần tạp chí tư vấn Curtis tên gọi Cúc Transrace hay Cúc barbetan Theo Hà Tiểu Đệ Cs (2000)[15], hoa đồng tiền thân thảo, rễ chùm, cao 50 - 60cm Thân có lơng, đứng, hình dạng thay đổi theo sinh trưởng từ dạng trứng đến dạng trứng dài, dài từ 15 - 25cm, rộng - 8cm hình xẻ thùy rộng sâu, mặt có lớp lơng nhung Hoa đồng tiền có dạng cụm, hoa đầu lớn, cụm hoa dạng đầu, bề ngồi bơng hoa, thực tế tập hợp nhiều hoa nhỏ riêng biệt Phía ngồi hoa hình lưỡi tương đối lớn mọc xếp thành vài vòng Do thay đổi hình thái màu sắc nên tâm hoa ý chọn tạo giống Hoa đồng tiền nở theo thứ tự ngồi vào trong, hoa hình lưỡi nở trước, hoa hình tia nở sau theo vịng Hoa đồng tiền có khoảng 40 lồi thuộc loại hoa lưu niên hoa quanh năm, độ bền hoa cắt cao, coi loại hoa đẹp giới hoa Dựa vào hình thái hoa, người ta chia thành nhóm: Hoa kép, hoa đơn, hoa đơn nhị kép [4] Nhóm 1: Đồng tiền đơn: hoa có tầng cánh, xếp xen kẽ tạo thành vòng tròn Hoa mỏng yếu hoa kép, màu sắc hoa hơn, điển hình trắng, đỏ, tím, hồng Nhóm 2: Hoa đồng tiền kép: cánh hoa to gồm tầng, to, đường kính đạt tới 12 - 15cm, cánh hoa tụ lại thành bơng nằm đầu trục chính, cuống dài 40 - 60cm Màu sắc đa dạng trắng, đỏ, vàng, hồng, gạch cua Nhóm 3: Hoa đồng tiền đơn nhị kép: bên cánh đơn, bên cánh kép dày đặc, thường màu trắng lớp cánh kép màu cánh sen nhóm màu khơng đẹp hoa kép Như vậy, nhóm hoa trên, hoa đồng tiền kép nhóm hoa có giá trị cao, ưa chuộng đối tượng lý tưởng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.2 Đặc điểm thực vật học hoa đồng tiền Cây hoa đồng tiền thuộc loại thân thảo họ cúc - Thân, lá: thân ngầm, không phân cành mà đẻ nhánh, hoa phát triển từ thân Lá mọc chếch so với mặt đất góc 15 - 45o, hình dáng thay đổi theo giống sinh trưởng cây, từ hình trứng thn đến hình thn dài Lá dài từ 15 - 25cm, rộng - 8cm, có hình lơng chim, sẻ thùy nơng sâu, mặt lưng có lớp lông nhung [4] - Rễ: rễ đồng tiền thuộc dạng rễ chùm, phát triển khỏe, rễ hình ống, ăn ngang phía mặt luống, rễ thường vươn dài tương ứng với diện tích tỏa [4] - Hoa: đồng tiền hai loại hoa nhỏ hình lưỡi hình ống tạo thành, loại hoa tự đơn hình đầu Hoa hình lưỡi tương đối lớn mọc phía ngồi xếp thành vịng vài vịng nhỏ, thay đổi hình thái màu sắc nên gọi mắt hoa tâm hoa, trọng Trong trình hoa nở hoa hình lưỡi nở trước, hoa hình ống nở theo thứ tự ngồi vào theo vòng [4] - Quả: Quả đồng tiền thuộc dạng bế có lơng, khơng có nội nhũ, hạt nhỏ, 1g hạt có khoảng 280 - 300 hạt [4] 2.1.3 Tình hình sản xuất hoa đồng tiền giới Việt Nam 2.1.3.1 Tình hình sản xuất hoa đồng tiền giới Năm 1697 Relomen phái thấy vùng phía Nam châu Phi (Delasnia) ông đưa vườn thực vật nước Anh Irwin Luynch người tiến hành lai tạo giống đồng tiền với [4] Sau người Pháp người Hà Lan tiến hành lai tạo hai nước trở thành trung tâm tạo giống đồng tiền giới Từ năm 1980, năm giới tạo 80 chủng loại giống khác nhau, hoa có đường kính 8cm trở lên tạo giống lai cánh hoa kép Hiện nay, giống hoa đồng tiền to trồng rộng rãi sản xuất, phần lớn giống hoa đồng tiền nhà tạo giống Hà Lan tạo Hoa đồng tiền mười loại hoa quan trọng giới (sau hoa Hồng, Cúc, Lan, Cẩm chướng, layon) Các nước có sản lượng hoa lớn là: Hà Lan, Colombia, Pháp, Trung Quốc… Ở nước hầu hết đồng tiền trồng nhà có mái che có hệ thống điều chỉnh nhiệt độ, ẩm độ, ánh sáng, tưới nước, bón phân chế độ tự động bán tự động Do đó, suất, chất lượng hoa đồng tiền nước cao: đạt 4,8 triệu bơng hoa/ha/năm Theo Hà Tiểu Đệ, (2000)[15], diện tích trồng hoa Hà Lan 8.017 ha, đạt giá trị sản lượng 3.590 triệu USD Hầu hết giống hoa đồng tiền Hà Lan giống hoa lai, hoa to, nhà chọn tạo giống Hà Lan lai tạo ra, cơng ty Florist Hà Lan sở quan trọng nghiên cứu, buôn bán sản xuất hoa đồng tiền giới Ở Hà Lan, hoa đồng tiền trồng chủ yếu sản phẩm nuôi cấy mô, loại hoa quan trọng chiếm khoảng 90% tổng sản phẩm hoa từ nuôi cấy mô năm 1984 Tại Trung Quốc, từ năm 1920,hoa đồng tiền cắt cành sản xuất Mai Long, Thượng Hải song phát triển giống bị thối hóa trầm trọng Từ năm 1987 đến nay, nhờ ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô nên khắc phục tình trạng thối hóa giống, qua diện tích trồng hoa đồng tiền ngày mở rộng phát triển Cơ sở trồng hoa Thượng Hải có 35 ha, Giang Tơ có ha, sau Viện nghiên cứu khoa học rau nông trường Liên Vân lần thử nghiệm quy mơ lớn 2.1.3.2.Tình hình sản xuất hoa đồng tiền Việt Nam Hoa đồng tiền 10 loại hoa quan trọng giới, sau hồng, cúc, lan Layơn… Trong loại hoa đồng tiền trồng Việt Nam hoa đồng tiền kép nhập nội cho hiệu kinh tế cao Từ sào hoa đồng tiền giống chăm sóc kỹ thuật cho thu nhập gần 50 triệu/ha/năm [6] Ở Việt Nam giống hoa đồng tiền đơn nhập trồng khoảng từ năm 1940 Đặc điểm giống hoa đơn sinh trưởng khỏe, thích nghi tốt với điều kiện tự nhiên nhược điểm hoa nhỏ, cánh đơn, màu sắc đơn điệu, người ta trồng Từ năm 1990, vài Công ty nhà trồng hoa Việt Nam bắt đầu nhập giống đồng tiền lai (hoa kép) từ Đài Loan, Hà Lan, Trung Quốc trồng Các giống tỏ có nhiều ưu điểm: hoa to, cánh đầy, gồm nhiều tầng xếp lại với nhau, màu sắc phong phú, hình dạng hoa cân đối, đẹp, suất cao Vì vậy, giống tiếp nhận phát triển mạnh mẽ khắp vùng, tỉnh nước Trồng đồng tiền khơng khó, xong đặc tính đồng tiền khác biệt so với số loại hoa khác, nên cần phải có biện pháp kỹ thuật riêng biệt Nắm điều nghề sản xuất hoa đồng tiền Việt Nam cịn có hội phát triển 2.1.4 Phương pháp nhân giống hoa đồng tiền giới Việt Nam Hoa đồng tiền nhân giống phương pháp như: phương pháp hữu tính (nhân giống hạt) phương pháp nhân giống vơ tính (nhân giống tách cây, nuôi cấy mô tế bào) Các vùng trồng hoa đồng tiền chủ yếu sử dụng giống từ nuôi cấy mơ Có nhiều tác giả sử dụng biện pháp ni cấy mô để sản xuất giống hoa đồng tiền Cụ thể sau: 2.1.4.1 Phương pháp nhân giống hoa đồng tiền giới Theo điều tra nghiên cứu công nghệ sinh học thực vật giới hoa đồng tiền, người ta sử dụng đỉnh sinh trưởng, đế hoa, lá, cuống hoa, bầu nhụy, noãn,… làm mẫu cấy Việc tái sinh mẫu từ non thành công nhất, sử dụng mẫu cấy đỉnh sinh trưởng trải qua nhiều công đoạn để tạo khối lượng sinh khối lớn Theo Pierik Segers (1973), hình thành mơ sẹo cytokinin tăng lên có mặt auxin mơi trường, đặc biệt IBA Cytokini hiệu BAP [22] Thêm vào kết nghiên cứu Huang (2001) dùng môi trường MS bổ sung 1mg/l BA 0.05mg/l IBA thích hợp cho hình thành mô sẹo từ đỉnh chồi từ cuống [17] Kết nghiên cứu Jerzy Lubonskg (1991) cho thấy số chồi hình thành cao (8-11 chồi) mơi trường có 10 mg/l BAP, có vài chồi yếu xuất hiện tượng thủy tinh thể Trong mơi trường BA chứa 1-2mg/l BA hình thành 1-3 chồi [18] 2.1.4.2 Phương pháp nhân giống hoa đồng tiền Việt Nam - Theo Th.S Đặng Văn Đông PGS.TS Đinh Thế Lộc [4] Hoa đồng tiền nhân giống phương pháp ni cấy mơ tiến hành sau: Vật liệu vào mẫu đế hoa non Cắt lấy nụ có đường kính khoảng 1cm, lấy bơng thấm muối rửa sạch, đưa vào tủ nuôi cấy mô Rửa cho vào dung dịch chlorua thủy ngân 0,1% tiêu độc 20 phút, lấy dùng nước rửa - lần, dùng panh dao bóc vảy, cắt bỏ tất hoa nhỏ, giữ lấy đế hoa, cắt đế hoa thành miếng nhỏ vuông - 3mm Nuôi cấy 24 ± 2oC, cường độ chiếu sáng 2.000 - 3.000lux Mỗi ngày chiếu sáng 12 - 16 Môi trường nuôi cấy đời thứ là: MS + BA 4mg/l + NAA 0,2mg/l + IAA 0,2mg/l Sau tuần hình thành thân mầm Sau đó, mầm chuyển vào mơi trường: MS + KT 5mg/l + IAA 1mg/l nuôi cấy tiếp Đợi mầm cao 2cm, cắt chuyển vào môi trường 1/2 MS + NAA 0,1mg/l cho rễ, sau khoảng tuần rễ dài - 3cm Chuyển rễ trồng chất gồm phần mùn cưa, phần than bùn, phần vụn đá xốp dùng lưới cản quang che nắng, che mưa Ở nơi độ ẩm khơng khí cao, ngày phun nước lần, sau 2-3 tuần sống, tăng dần cường độ chiếu sáng, chăm sóc 5-6 tuần đưa trồng ngồi ruộng Ở nơi khơ hạn cần tăng cường phun mù để nâng cao tỷ lệ sống - Theo Hoàng Thị Phương Nga Cs [7]: Hoa đồng tiền nhân giống phương pháp nuôi cấy mô tiến hành sau: + Tạo nguồn vật liệu khởi đầu: Nguồn mô ban đầu để tạo ngun liệu khởi đầu cho q trình ni cấy ống nghiệm nụ hoa non số giống hoa đồng tiền Hà Lan Hóa chất khử trùng hai hóa chất: nước Javen 1/8 10 phút, rửa nước cất vô trùng lần khử trùng tiếp lần dung dịch HgCl2 0,1% phút, rửa mẫu nước vô trùng lần Môi trường tái sinh tối ưu: MS + BAP 1mg/l + Kinetine 0,2mg/l + IAA 0,2mg/l + 2,5% Sucrose + Agar 6,5g/l Trên môi trường sau 8-10 tuần mẫu ni cấy hình thành chồi hay callus Để tăng cường nguồn mẫu ban đầu phục vụ cho trình nhân nhanh áp dụng phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào Lớp mỏng giống cắt với kích thước 0,5 - 0,7mm lấy từ mẫu đồng tiền cấy môi trường tái sinh tối ưu: MS + BAP 1mg/l + Kinetine 0,2mg/l + IAA 0,2mg/l + Sucrose 2,5% + Agar 6,5g/l Cấy 5-7 lát/bình ni cấy Sau 6-7 tuần nuôi cấy thu lượng mẫu tăng - lần so với dùng phương pháp nhân chồi thông thường + Kỹ thuật nhân nhanh Môi trường tối ưu sử dụng cho môi trường nhân nhanh: MS + Kinetin 1mg/l + 10% nước dừa + sucrose 2,5% + Agar 6,5g/l Các mẫu nuôi cấy Sau số lần nhân nhanh khả đẻ chồi tăng lên chất lượng chồi giảm mạnh thể số chồi nhiều chồi nhỏ, yếu, khả rễ kém, vườn ươm tỷ lệ chết cao Chính mà cần phải có q trình vào mẫu liên tục để thay thế, 36 PHỤ LỤC Một số kết ảnh thí nghiệm kinetin 0,0mg/l Kinetin 1,0mg/l Kinetin 1,5mg/l Hình 4.1 Ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau 30 ngày ni cấy) BAP 0,0mg/l BAP 0,8mg/l BAP 1,2mg/l Hình 4.2 Ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau 30 ngày nuôi cấy) BAP 0,8mg/l + ND 0% BAP 0,8mg/l + ND 3% BAP 0,8mg/l + ND 5% Hình 4.3: Ảnh hưởng phối hợp BAP ND đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau 30 ngày nuôi cấy) 37 NAA 0,25mg/l NAA 0,0mg/l Hình 4.4: Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền (sau 25 ngày nuôi cấy) IBA 0,9mg/l IBA 0.5mg/l IBA 0,0mg/l Hình 4.5: Ả nh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền (sau 25 ngày nuôi cấy) THT 1,5g/l THT 0,0g/l Hình 4.6: Ảnh hưởng hàm lượng THT đền khả rễ chồi hoa đồng tiền (sau 25 ngày nuôi cấy) 38 PHỤ LỤC KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU TN1: Ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE LY 20/ 5/14 15:27 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 15.5401 3.88502 519.84 0.000 R 100134E-01 500668E-02 0.67 0.542 * RESIDUAL 597875E-01 747344E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 15.6099 1.11499 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTBC FILE LY 20/ 5/14 15:27 :PAGE VARIATE V004 SLTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2.84831 712077 130.74 0.000 R 756001E-02 378000E-02 0.69 0.531 * RESIDUAL 435736E-01 544670E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.89944 207103 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE LY 20/ 5/14 15:27 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSNC 1.00000 3.48667 3.78000 3.40333 3.41667 SLTBC 3.43000 4.02000 2.82667 3.00333 2.96000 SE(N= 3) 0.499114E-01 0.426095E-01 5%LSD 8DF 0.162756 0.138945 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 3.01000 2.99000 3.05200 SLTBC 3.22400 3.27800 3.24200 SE(N= 5) 0.386612E-01 0.330051E-01 5%LSD 8DF 0.126070 0.107626 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE LY 20/ 5/14 15:27 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC SLTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.0173 15 3.2480 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0559 0.86449E-01 2.9 0.0000 0.45509 0.73802E-01 2.3 0.0000 |R | | | 0.5418 0.5307 | | | | 39 TN2: Ảnh hưởng hàm lượng kinetin đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE HA 20/ 5/14 14:59 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 9.03997 2.25999 254.55 0.000 R 639999E-03 320000E-03 0.04 0.965 * RESIDUAL 710267E-01 887833E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 9.11164 650831 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTRC FILE HA 20/ 5/14 14:59 :PAGE VARIATE V004 SLTRC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 219067E-01 547667E-02 3.30 0.071 R 937334E-02 468667E-02 2.82 0.117 * RESIDUAL 132934E-01 166167E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 445734E-01 318381E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HA 20/ 5/14 14:59 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSNC 1.00000 2.98667 3.05667 2.79333 2.87333 SLTRC 3.22333 3.12000 3.15667 3.13333 3.12333 SE(N= 3) 0.544008E-01 0.235349E-01 5%LSD 8DF 0.177395 0.767448E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 2.55000 2.53400 2.54200 SLTRC 3.14000 3.18600 3.12800 SE(N= 5) 0.421387E-01 0.182300E-01 5%LSD 8DF 0.137410 0.594463E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HA 20/ 5/14 14:59 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC SLTRC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.5420 15 3.1513 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.80674 0.94225E-01 3.7 0.0000 0.56425E-010.40764E-01 1.3 0.0710 |R | | | 0.9652 0.1175 | | | | 40 TN3: Ảnh hưởng phối hợp BAP + ND đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE ND 20/ 5/14 14:17 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 125360 313400E-01 0.94 0.491 R 188653 943266E-01 2.82 0.118 * RESIDUAL 267680 334600E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 581693 415495E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTBC FILE ND 20/ 5/14 14:17 :PAGE VARIATE V004 SLTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 610267E-01 152567E-01 1.60 0.264 R 272133E-01 136067E-01 1.43 0.295 * RESIDUAL 762534E-01 953167E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 164493 117495E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE ND 20/ 5/14 14:17 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSNC 3.43000 3.25000 3.53000 3.36333 3.37333 SLTBC 2.94667 3.13667 3.03667 3.08667 3.08000 SE(N= 3) 0.105609 0.563669E-01 5%LSD 8DF 0.344381 0.183807 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 3.25800 3.53200 3.37800 SLTBC 3.07800 2.99800 3.09600 SE(N= 5) 0.818047E-01 0.436616E-01 5%LSD 8DF 0.266757 0.142376 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE ND 20/ 5/14 14:17 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC SLTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.3893 15 3.0573 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.20384 0.18292 5.4 0.4905 0.10840 0.97630E-01 3.2 0.2642 |R | | | 0.1176 0.2953 | | | | 41 TN4: Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBR FILE NAA 25/ 5/14 8:21 :PAGE VARIATE V003 CDTBR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1.25037 312593 57.69 0.000 R 190533E-01 952667E-02 1.76 0.232 * RESIDUAL 433466E-01 541833E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.31277 937695E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTBC FILE NAA 25/ 5/14 8:21 :PAGE VARIATE V004 SRTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 11.2231 2.80578 203.88 0.000 R 989733E-01 494867E-01 3.60 0.076 * RESIDUAL 110094 137617E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 11.4322 816584 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 25/ 5/14 8:21 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 CDTBR 1.44000 2.25667 2.14667 1.81333 1.80000 SRTBC 1.19667 2.75000 2.94667 3.44667 3.65333 SE(N= 3) 0.424983E-01 0.677292E-01 5%LSD 8DF 0.138583 0.220858 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 CDTBR 1.84400 1.93000 1.90000 SRTBC 2.89200 2.69400 2.81000 SE(N= 5) 0.329191E-01 0.524628E-01 5%LSD 8DF 0.107346 0.171076 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 25/ 5/14 8:21 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CDTBR SRTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.8913 15 2.7987 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.30622 0.73609E-01 3.9 0.0000 0.90365 0.11731 4.2 0.0000 |R | | | 0.2324 0.0763 | | | | 42 TN5: Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBR FILE IBA 20/ 5/14 8: :PAGE VARIATE V003 CDTBR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 138627 346567E-01 13.19 0.002 R 665333E-02 332667E-02 1.27 0.334 * RESIDUAL 210133E-01 262667E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 166293 118781E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTBC FILE IBA 20/ 5/14 8: :PAGE VARIATE V004 SRTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 16.2758 4.06895 149.87 0.000 R 700000E-02 350000E-02 0.13 0.881 * RESIDUAL 217201 271501E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.5000 1.17857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IBA 20/ 5/14 8: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 CDTBR 1.43000 1.71333 1.59667 1.49333 1.55333 SRTBC 1.25000 3.68000 3.73667 3.94667 3.98667 SE(N= 3) 0.295898E-01 0.951317E-01 5%LSD 8DF 0.964893E-01 0.310215 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 CDTBR 1.53600 1.58600 1.55000 SRTBC 3.35000 3.30000 3.31000 SE(N= 5) 0.229202E-01 0.736887E-01 5%LSD 8DF 0.747403E-01 0.240291 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IBA 20/ 5/14 8: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CDTBR SRTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.5573 15 3.3200 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.10899 0.51251E-01 3.3 0.0016 1.0856 0.16477 5.0 0.0000 |R | | | 0.3336 0.8805 | | | | 43 TN6: ảnh hưởng hàm lượng than hoạt tính đến khả rễ chồi hoa đồng tiền BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBR FILE THT 30/ 5/14 1:34 :PAGE VARIATE V003 CDTBR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 9.98277 2.49569 436.81 0.000 R 123600E-01 618000E-02 1.08 0.385 * RESIDUAL 457072E-01 571340E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 10.0408 717203 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTBC FILE THT 30/ 5/14 1:34 :PAGE VARIATE V004 SRTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 4.93003 1.23251 166.97 0.000 R 220133E-01 110067E-01 1.49 0.282 * RESIDUAL 590538E-01 738172E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.01109 357935 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE THT 30/ 5/14 1:34 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 CDTBR 1.62333 3.73667 3.53000 3.49667 3.80333 SRTBC 1.25000 2.37667 2.57000 2.93000 2.57000 SE(N= 3) 0.436402E-01 0.496042E-01 5%LSD 8DF 0.142306 0.161754 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 CDTBR 3.21200 3.27800 3.22400 SRTBC 2.39200 2.30200 2.32400 SE(N= 5) 0.338036E-01 0.384232E-01 5%LSD 8DF 0.110230 0.125294 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE THT 30/ 5/14 1:34 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CDTBR SRTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.2380 15 2.3393 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.84688 0.75587E-01 2.3 0.0000 0.59828 0.85917E-01 3.7 0.0000 |R | | | 0.3854 0.2817 | | | | 44 PHỤ LỤC MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Table 1: Preparation of modified Murashige AND Skoog’s MS medium Bottle Component Stock Solution Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/l) 20 1.650,0 1.900,0 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4.7H2O MgSO4.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O 37,0 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44,0 0,083 0,0025 IV KH2PO4 H3BO3 NaMoO4.2H2O 17,0 0,62 0,025 10 170,0 6,2 0,25 V FeSO4.7H2O 2,784 Na2MoO4.2H20 3,724 10 27,85 37,25 Nicotinic acid Glycine Thiamine HCl Pyridoxine HCl 0,5 0,1 0,5 0,5 0,1 0,5 mg/100ml Vitamins 100 100 100 100 Inositol 100,0 Saccarose 30.000,0 Agar 8.000,0 pH 5,8 45 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình thực tập khu Cơng nghệ tế bào thuộc Viện khoa học Sự sống, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, nhận nhiều giúp đỡ từ ban lãnh đạo Viện Khoa học Sự sống, thầy cô hướng dẫn, bạn bè gia đình Trước hết tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Ngơ Xn Bình, giảng viên khoa CNSH & CNTP, tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Đào Duy Hưng công tác mô nuôi cấy mô tế bào thực vật, Viện Khoa học Sự sống, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, người tận tình bảo, hướng dẫn, cho tơi nhiều ý tưởng, sai lầm giúp hồn thành tốt khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn cán kỹ thuật phong thí nghiệm, bạn thực tập tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn đến thầy cô khoa CNSH & CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn đến quan tâm sâu sắc từ gia đình, bạn bè ln bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi q trình thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu ! Thái Nguyên,ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Vi Thị Hà 46 DANH MỤC TỪ, CỤN TỪ VIẾT TẮT BAP Cs CT CV Đc DNA IBA Kinetin LSD MS MT NAA ND TB THT TN : 6-benzylaminopurine : Cộng : Công thức : Coefficient of variation : Đối chứng : Acid Deoxyribo Nucleotit : Indole-3-butyric acid : 6-Furfurylaminopurine : Least Significant Difference : Murashige and Skoog’s : Môi trường : α-Naphlene axetic acid : Nước dừa : Trung bình : Than hoạt tính : Thí nghiệm 47 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 22 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 24 Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng phối hợp BAP ND đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 26 Bảng 4.4 :Kết ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 27 Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 29 Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng THT đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 31 48 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 4.1: Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 22 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 24 Hình 4.3: Biểu đồ thể ảnh hưởng phối hợp BAP ND đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 26 Hình 4.4.Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 28 Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 30 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng THT đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 31 49 MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Mục tiêu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa đồng tiền 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học hoa đồng tiền 2.1.3 Tình hình sản xuất hoa đồng tiền giới Việt Nam 2.1.4 Phương pháp nhân giống hoa đồng tiền giới Việt Nam 2.2 Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Điều kiện nuôi cấy mô tế bào 11 2.2.3 Môi trường nuôi cấy tế bào thực vật 12 2.2.4 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào 15 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 17 3.1.1 Vật liệu thực vật 17 3.1.2 Hóa chất thiết bị sử dụng 17 3.1.3 Phạm vi nghiên cứu 17 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 17 3.3 Điều kiện nghiên cứu 17 3.4 Nội dung nghiên cứu 17 3.5 Phương pháp nghiên cứu 18 3.5.1.Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số loại chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 18 50 3.5.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 20 3.6 Phương pháp xử lý số liệu 21 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến trình nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 22 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 22 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BAP đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 24 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp BAP ND đến khả nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 26 4.2.Kết ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đền khả rễ chồi hoa đồng tiền 27 4.2.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi hoa dồng tiền 27 4.2.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 29 4.2.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng THT đến khả rễ chồi hoa đồng tiền 31 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 ... hồn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) phương pháp nuôi cấy mơ tế bào? ?? 1.2 Mục đích nghiên cứu Hồn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) phương pháp. .. giống hoa đồng tiền giới Việt Nam Hoa đồng tiền nhân giống phương pháp như: phương pháp hữu tính (nhân giống hạt) phương pháp nhân giống vơ tính (nhân giống tách cây, nuôi cấy mô tế bào) Các vùng... đề tài: “NGHIÊN CỨU GHĨP PHẦN HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamesonii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun