Nhiên cứu sản xuất kháng thể bại liệt trên thỏ và đánh giá tính an toàn của vắc xin bại liệt trong phòng thí nghiệm

Luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI -

- NGUYỄN THỊ NGA NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ BẠI LIỆT TRÊN THỎ VÀ ðÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN CỦA VẮC XIN BẠI LIỆT TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Mã số : THÚ Y 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: HÀ NỘI - 2008 PGS.TS LÊ THỊ LUÂN LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan rằng, giúp ñỡ cho việc thực luận văn ñã ñược cám ơn thơng tin trích dẫn luận văn ñều ñã ñược rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Nga Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghip i LờI ờI CảM ƠN Trong trình học tập hoàn thành luận văn, với nỗ lực cá nhân, nhận đợc giúp đỡ, hớng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép đợc bày tỏ lòng biết ơn cảm ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu, thầy cô giáo Khoa Sau Đại học, Khoa chăn nuôi Thú y Trờng Đại học Nông nghiệp, cán Trung Tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế đặc biệt cán phòng Kiểm định chất lợng Vắc xin (QC), ngời đà giúp đỡ, tạo điều kiện để học tập, tiếp thu kiến thức chơng trình học Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Thị Luân Phó Giám đốc Trung Tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin vµ Sinh phÈm Y tÕ - Bé Y tÕ, đà tận tình giúp đỡ, hớng dẫn suốt thời gian thực đề tài, nh trình hoàn chỉnh luận văn tốt nghiệp Cảm ơn TS Ngun H÷u Nam - Tr−ëng khoa thó y Tr−êng Đại Học Nông nghiệp I Hà Nội đà hớng dẫn khoa học giúp đỡ hoàn chỉnh luận văn Xin cảm ơn PGS TS Nguyễn Đăng Hiền Giám Đốc Trung Tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm y tế đà tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành khoá học thực nghiên cứu thí nghiệm Cảm ơn sâu sắc tới gia đình, ngời thân bạn bè, đồng nghiệp đà động viên, chia sẻ, giúp đỡ vợt qua khó khăn suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Một lần xin trân trọng cảm ơn ! Tác giả luận văn Nguyễn ThÞ Nga Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii BẢNG KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DNA: Deroxyribonucleic acid (axit deroxyribo nucleic) RNA: Ribonucleic acid (axit ribonucleic) CCID50: Cell culture infective dose 50 (Liều gây nhiễm) CGI: Cell Goowth Index (Mẫu B tăng trưởng phát triển) CPE: Cytopathic Effect (Huỷ hoại tế bào) CFU: Clonial Forming Unit (ðám hoại tử) CT TCMR: Chương trình tiêm chủng mở rộng DMSO: Dymethyl Sulphoxide (Môi trường cất giữ tế bào) GLP: Good Laboratory Practive (Tiêu chuẩn thực hành tốt kiểm nghiệm) GM: Grow medium (Môi trường tăng trưởng) GMP: Good Manufacturing Practices (Tiêu chuẩn thực hành tốt sản xuất) HEP2C: Human Laryngocacynoma cincinnati (Tế bào ung thư quản người) HIV: Human immunodeficiency virus (Virus suy giảm miễn dịch người) HTK: Huyết khỉ IPV: Inactivated Polio vaccine (Vắc xin bại liệt bất hoạt) IgG: Immunoglobulin G (Globulin miễn dịch lớp G) IgM: Immunoglobulin M (Globulin miễn dịch lớp M) IgA: Immunoglobulin A (Globulin miễn dịch lớp A) LH: Lactabumin Hydrolysate ñệm Hanks LHE: Lactabumin Hydrolysate – Hanks - Eagle JVKT: Tế bào thận khỉ sơ sinh Xanh Châu phi PFU: Plasque forming unit (ðơn vị tạo ñám hoại tử) FBS: Fetal Bovine Serum (huyết bê ) TCID50: Tissue culture infective dose 50 (liều gây nhiễm 50% tế bào) WHO: World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) MA104: Tế bào thận khỉ bào thai Rhesus Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MM: Maintenance medium (Môi trường trì) MEM: Eagles Minimum Essential Medium (Mơi trường Eagle tối thiểu) OPV: Oral Polio vaccine (Vắc xin bại liệt sống uống giảm ñộc lực) QA: Quality Assurance (Bảo ñảm chất lượng.) QC: Quality Control (Kiểm ñịnh chất lượng) SFV: Simian Foamy virus (Virus nước bọt khỉ) SIV: Simian immunodeficiency virus (Virus gây suy giảm miễn dịch khỉ) SV40: Siman Virus 40 (Virus 40 khỉ) Vero: Tế bào thận khỉ xanh Châu phi HGKT Hiệu giá kháng thể FCA Adjuvant Complexte Freund (tá dược toàn phần) FIA Adjuvant Incomplexte Freund (tá dược khơng tồn phần) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv MỤC LỤC MỞ ðỞU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích đề tài: TỞNG QUAN TÀI LIỞU 2.1 Bệnh bại liệt virus 2.2 Lịch sử phân bố 2.3 Ở Việt Nam 2.4 ðặc ñiểm virus bại liệt 2.5 Bệnh bại liệt người 2.6 Tiêu chuẩn Việt Nam phương pháp kiểm tra tính an tồn 13 văcxin phòng bại liệt 16 2.7 Văcxin phòng bệnh bại liệt 18 2.8 Nghiên cứu sản xuất kháng thể bại liệt 21 ðỞI TỞỞNG, ðỞA ðIỞM, NỞI DUNG VÀ PHỞỞNG PHÁP NGHIÊN CỞU 23 3.1 ðối tượng nghiên cứu 23 3.2 ðịa ñiểm 23 3.3 Nội dung nghiên cứu 23 3.4 Phương pháp nghiên cứu 24 KỞT QUỞ - BÀN LUỞN 50 4.1 Kết nghiên cứu sản xuất kháng thể bại liệt 50 4.1.1 Kết sản xuất kháng nguyên bại liệt 50 4.1.2 Kết sản xuất kháng thể từ huyết Thỏ lần thứ 51 4.1.3 Kết sản xuất kháng thể từ huyết Thỏ lần thứ hai 57 4.2 Kết kiểm tra tính an tồn văcxin bại liệt phịng thí nghiệm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v 63 4.2.1 Kiểm tra nguyên liệu ñầu cho sản xuất văcxin bại liệt – khỉ sản xuất 63 4.2.2 Kết kiểm tra tế bào sử dụng cho sản xuất văcxin bại liệt bảy năm từ năm 2000 – 2006 65 4.2.3 Kết kiểm tra an toàn văcxin bán thành phẩm 70 4.3 77 Bàn luận 4.3.1 Nguyên liệu ñầu khỉ 77 4.3.2 Chất lượng tế bào 79 4.3.3 Hiệu giá kháng huyết 81 KỞT LUỞN - KIỞN NGHỞ 84 5.1 Kết luận 84 5.2 Kiến nghị 85 TÀI LIỞU THAM KHỞO Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi 87 DANH MỤC HÌNH Hình Hình Ởnh cỞa virus BỞi liỞt Hình Hình Ởnh minh hoỞ virus bỞi liỞt Hình Ni cỞy tỞ bào thỞn khỞ tiên phát 11 Hình BiỞu hiỞn sỞt li bì 14 Hình BỞnh có thỞ gây tàn phỞ suỞt đỞi 14 Hình ChỞn thỞ 25 Hình Ni nhỞt cách ly mỞi mỞt lỞng 25 Hình ThỞ trỞỞc tiêm 26 Hình ThỞ tiêm 26 Hình 10 ThỞ sau tiêm 26 Hình 11 VỞt sỞo tiêm da ThỞ sau tuỞn 26 Hình 12 ChuỞn bỞ lỞy máu 27 Hình 13 VỞ trí lỞy máu 27 Hình 14 LỞy máu tỞ mũi đỞn mũi 27 Hình 15 LỞy máu toàn bỞ (mũi 5) 27 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG BỞng 4.1 Các thông sỞ cho sỞn xuỞt kháng nguyên bỞi liỞt khỞ 50 BỞng 4.2 ThỞ tích kháng nguyên bỞi liỞt 50 BỞng 4.3 SỞ lỞỞng huyỞt thu ñỞỞc cỞa lỞn thỞ nghiỞm thỞ 51 BỞng 4.4 HiỞu giá kháng thỞ týp II (lỞn 1) 52 BỞng 4.5 HiỞu giá kháng thỞ chéo (týp I) 54 BỞng 4.6 HiỞu giá kháng thỞ chéo (týp III) 56 BỞng 4.7 SỞ lỞỞng huyỞt thu ñỞỞc cỞa lỞn thỞ nghiỞm thỞ 58 BỞng 4.8 HiỞu giá kháng thỞ týp II (lỞn 2) 58 BỞng 4.9 HiỞu giá kháng thỞ týp II lỞn (Theo phỞỞng pháp tiêm bỞp ñùi) 60 BỞng 4.10 HiỞu giá kháng thỞ chéo (týp I ) 61 BỞng 4.11 KỞt quỞ kiỞm tra test thỞ nghiỞm cho khỞ năm (2000 - 2006) 64 BỞng 4.12 TỞ lỞ khỞ sỞch cho sỞn xuỞt vỞc xin bỞi liỞt 65 BỞng 4.13 ChỞt lỞỞng tỞ bào sỞ dỞng cho sỞn xuỞt vỞc xin bỞi liỞt 66 BỞng 4.14 KỞt quỞ kiỞm tra tác nhân ngoỞi lai nỞỞc nỞi nuôi tỞ bào sỞ dỞng cho sỞn xuỞt vỞc xin bỞi liỞt (mỞu 1) 67 BỞng 4.15 KỞt quỞ kiỞm tra tác nhân ngoỞi lai nỞỞc nỞi nuôi tỞ bào sỞ dỞng cho sỞn xuỞt vỞc xin bỞi liỞt Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii (mỞu 2) 68 BỞng 4.16 ChỞt lỞỞng tỞ bào sỞ dỞng cho sỞn xuỞt văcxin bỞi liỞt 69 BỞng 4.17: ChỞt lỞỞng văcxin bỞi liỞt bán thành phỞm năm 2000-2006 72 BỞng 4.18 HiỞu giá tính Ởn ñỞnh nhiỞt văcxin bỞi liỞt týp 74 BỞng 4.19 HiỞu giá tính Ởn đỞnh nhiỞt cỞa Văcxin bỞi liỞt týp 75 BỞng 4.20 HiỞu giá tính Ởn đỞnh nhiỞt cỞa Văcxin bỞi liỞt týp III Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix 76 ...LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan rằng, giúp ñỡ cho việc... triển Thế giới Việt Nam nước sản xuất văcxin sống giảm ñộc lực, sản xuất tế bào thận khỉ tiên phát, vacxin ñảm bảo yêu cầu: An toàn - Hiệu lực Sự an toàn vacxin ñược kiểm tra ñánh giá theo tiêu chuẩn... miễn dịch khỉ) SV40: Siman Virus 40 (Virus 40 khỉ) Vero: Tế bào thận khỉ xanh Châu phi HGKT Hiệu giá kháng thể FCA Adjuvant Complexte Freund (tá dược toàn phần) FIA Adjuvant Incomplexte Freund