Luận văn phân lập,xác định tính đặc sinh vật học,độc lực và định type 3 loại vi khuẩn pasteurrella, streptococus và actinobacillus từ phôi lợn trong đàn sảy ra hội chứng rối loạn

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

 ðỖ XUÂN THỬ PHÂN LẬP, XÁC ðỊNH ðẶC TÍNH SINH VẬT HỌC, ðỘC LỰC VÀ ðỊNH TYPE LOẠI VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA, STREPTOCOCCUS VÀ ACTINOBACILLUS TỪ PHỔI LỢN TRONG ðÀN SẢY RA HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS) TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC LUẬN VĂN THẠC SĨ NƠNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN NGỌC NHIÊN HÀ NỘI - 2009 LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, Ngày tháng năm 2009 Tác giả ðỗ Xuân Thử Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… i LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành luận văn này, với lỗ lực cố gắng thân, tơi xin đặc biệt bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy: TS Nguyễn Ngọc Nhiên, người trực tiếp hướng dẫn tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tới thầy: PGS TS.Trương Quang, thầy cô môn Vi sinh vật truyền nhiễm tồn thể thầy giáo Khoa Thú y; Viện sau ðại học – Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn Ban lãnh ñạo Viện Thú y, anh, chị, em Bộ môn Tiến triển khai mơn Vi trùng- Viện Thú Y, Lãnh đạo Cơng ty Cổ phần giống Bò sữa Mộc Châu, Chi cục Thú y tỉnh Thái Bình, Hải Phịng, Hưng n, Bắc Ninh bạn ñồng nghiệp ñặc biệt gia ñình ñã tạo ñiều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình hồn thành luận văn Hà Nội, Ngày tháng năm 2009 Tác giả ðỗ Xuân Thử Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… ii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng v Danh mục ảnh vi ðẶT VẤN ðỀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 2.2 Vi khuẩn Streptococcus suis bệnh liên cầu khuẩn vi khuẩn gây lợn 12 2.3 Vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh vi khuẩn gây lợn 16 2.4 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh vi khuẩn gây lợn 22 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 3.1 ðối tượng nghiên cứu 31 3.2 Nội dung nghiên cứu 31 3.3 Nguyên liệu dùng cho nghiên cứu 31 3.4 Phương pháp nghiên cứu 32 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 4.1 Tình hình dịch PRRS tỉnh Thái Bình, Hải Phịng, Hưng Yên Bắc Ninh 38 4.2 Kết xét nghiệm virus PRRS từ mẫu bệnh phẩm 41 4.3 Kết phân lập loại vi khuẩn P multocida, A pleuropneumoniae, S suis từ mẫu bệnh phẩm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp…………… 42 iii 4.4 Kết giám định hình thái, ni cấy số đặc tính sinh hố vi khuẩn phân lập ñược 44 4.4.1 ðặc điểm hình thái tính chất ni cấy 44 4.4.2 Kết giám định số đặc tính sinh hố vi khuẩn phân lập ñược 4.4.3 48 Kết kiểm tra khả lên men ñường vi khuẩn phân lập ñược 49 4.5 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn phân lập ñược 53 4.5.1 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn P multocida phân lập ñược 53 4.5.2 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập ñược 54 4.6 Kết xác ñịnh serotype vi khuẩn phân lập ñược 56 4.7 Kết ñối chiếu số mẫu dương tính với PRRS đồng thời phân lập ñược loại vi khuẩn P multocida, A pleuropneumoniae S suis 62 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 ðề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… 66 iv DANH MỤC BẢNG STT 4.1 Tên bảng Trang Tổng hợp số liệu tình hình dịch PRRS tỉnh Thái Bình, Bắc Ninh, Hải phịng Hưng Yên năm 2007 39 4.2 Kết xét nghiệm virus PRRS từ mẫu bệnh phẩm 42 4.3 Kết phân lập vi khuẩn P multocida, A pleuropneumoniae 43 S suis 4.4 Kết giám ñịnh số ñặc tính sinh hố chủng vi khuẩn phân lập ñược 4.5 48 Kết kiểm tra khả lên men ñường chủng vi khuẩn phân lập ñược 4.6 50 Kết kiểm tra tính chất sinh hóa chủng vi khuẩn Streptococcus phân lập ñược 51 4.7 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn P multocida phân lập ñược 54 4.8 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập ñược 4.9 55 Kết xác ñịnh serotype chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae P multocida phân lập ñược 57 4.10 Kết xác ñịnh serotyp chủng vi khuẩn S suis 4.11 61 Kết kiểm tra mẫu dương tính với PRRS đồng thời phân lập ñược loại vi khuẩn P multocida, A pleuropneumoniae S 62 suis Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… v DANH MỤC ẢNH STT 4.1 Tên ảnh Trang Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella phân lập mơi trường thạch máu 45 4.2 Hình thái vi khuẩn Pasteurella phân lập ñược (1500 x) 46 4.3 Khuẩn lạc vi khuẩn Actinobacillus phân lập mơi trường thạch máu 46 4.4 Hình thái vi khuẩn Actinobacillus phân lập ñược (1500 x) 47 4.5 Hình thái vi khuẩn S suis kính hiển vi 47 4.6 Phản ứng lên men ñường vi khuẩn Actinobacillus phân lập ñược 52 4.7 Phản ứng lên men ñường vi khuẩn Pasteurella phân lập ñược 52 4.8 Kết phản ứng PCR ñịnh type vi khuẩn P multocida 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vi ðẶT VẤN ðỀ Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome - PRRS) gọi bệnh Tai xanh bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, lây lan nhanh ñàn lợn lứa tuổi với tỷ lệ ốm chết cao Hội chứng lần ñầu tiên ñược phát Mỹ vào năm 1987 Từ đến bệnh lây lan bùng phát thành ổ dịch lớn nhiều nước khác thuộc Bắc Mỹ, châu Âu, châu Á, gây tổn thất lớn kinh tế cho ngành chăn nuôi lợn giới Theo kết đánh giá hàng năm nước Mỹ phải gánh chịu tổn thất chi phí cho cơng tác phịng chống bệnh lên đến 560 triệu USD Cho đến có nhiều biện pháp khống chế bệnh ñược ñưa tổn thất liên quan đến PRRS cịn tiếp tục xảy nhiều nước giới Vì vậy, hiểu biết sâu bệnh khâu quan trọng cơng tác phịng chống dịch nhằm giảm thiểu tổn thất khơng đáng có Ở Việt nam, dịch Tai xanh nổ lần ñầu tiên vào tháng năm 2007 tỉnh Hải Dương, sau lây lan nhanh ñã xuất ñợt miền Bắc, Trung Nam gây thiệt hại nặng nề kinh tế vấn ñề an sinh xã hội cho ñịa phương ðến nay, bệnh ñã ñang ñược bước khống chế diễn biến phức tạp Nguy dịch tái bùng phát, lây lan tất ñịa phương nước cao Thực tế cho thấy vùng dịch, tỷ lệ lợn mắc bệnh chết phải tiêu hủy cao ðiều giải thích phần nhiễm trùng kế phát lợn mắc bệnh, làm tình trạng bệnh trầm trọng hơn, dẫn ñến tỷ lệ chết cao Những nguyên nhân gây nhiễm trùng kế phát kể ñến vi khuẩn như: Pasteurella multocida, Actinobacillus pleuropneumoniae, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae, … Tuy nhiên chưa có nghiên cứu thức tiến hành để xác định vai trò vi khuẩn PRRS Xuất phát từ u cầu thực tiễn, với mục đích tìm hiểu vai trò gây bệnh vi khuẩn kế phát hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn, từ đưa biện pháp phịng chống có hiệu quả, giảm bớt thiệt hại bệnh gây ra, tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Phân lập, xác ñịnh ñặc tính sinh vật học, ñộc lực ñịnh type loại vi khuẩn Pasteurella multocida, Streptococcus Actinobacillus từ phổi lợn ñàn sảy hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS) số tỉnh phía Bắc ” Mục tiêu đề tài - Xác định tình hình hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản đàn lợn ni số tỉnh Thái Bình, Hải Phịng, Hưng n Bắc Ninh - Xác định vai trò gây bệnh vi khuẩn kế phát hội chứng hô hấp sinh sản lợn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome - PRRS) ñược ghi nhận lần ñầu tiên giới vào năm 1987 Mỹ vùng bắc bang California, bang Iowa Minnesota Năm 1988 bệnh lan sang Canada Sau bệnh xuất số nước Châu Âu ðức năm 1990, Hà Lan, Tây Ban Nha, Bỉ, Anh năm 1991 Pháp năm 1992 Thời gian ñầu chưa xác ñịnh ñược nguyên nhân nên người ta đặt nhiều tên gọi như: Bệnh bí hiểm lợn (Mistery Disease of Swine – MDS), Bệnh Tai xanh (Blue Ear Disease – BED), Hội chứng hô hấp xảy thai lợn (Porcine Endemic Abortion and Respiratory Syndrome – PEARS)… Năm 1992, Hội nghị quốc tế hội chứng ñược tổ chức Minesota (Mỹ), Tổ chức Thú y giới (OIE) ñã thống tên gọi Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome - PRRS) Từ năm 2005 trở lại ñây, 25 nước vùng lãnh thổ thuộc tất châu lục giới có dịch PRRS lưu hành (trừ châu Úc Newzeland) Có thể khẳng định PRRS ngun nhân gây tổn thất kinh tế cho ngành chăn nuôi lợn nhiều quốc gia giới (Nguyễn Bá Hiên cs, 2007)[3] Tại Việt Nam, PRRS ñược phát ñàn lợn nhập từ Mỹ vào tỉnh phía Nam năm 1997, kết kiểm tra huyết học cho thấy 10/51 lợn giống nhập có huyết dương tính với PRRS Tuy nhiên, bùng phát thành dịch gây tổn thất lớn ñáng báo ñộng cho ngành chăn nuôi lợn thực bắt ñầu từ tháng 3/2007, không quản lý ñược việc buôn bán, vận chuyển lợn ốm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… ... tra khả lên men ñường vi khuẩn phân lập ñược 49 4.5 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn phân lập ñược 53 4.5.1 Kết kiểm tra ñộc lực vi khuẩn P multocida phân lập ñược 53 4.5.2 Kết kiểm tra ñộc lực vi. .. ảnh vi ðẶT VẤN ðỀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 2.2 Vi khuẩn Streptococcus suis bệnh liên cầu khuẩn vi khuẩn gây lợn 12 2 .3 Vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh vi. .. ra, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Phân lập, xác định đặc tính sinh vật học, độc lực ñịnh type loại vi khuẩn Pasteurella multocida, Streptococcus Actinobacillus từ phổi lợn ñàn sảy hội