Nghiên cứu phân lập và thiết kế vector chuyển gen ssiv mã hóa enzyme starch synthase tăng cường sinh tổng hợp tinh bột

Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - - NGUYỄN MẬU HƢNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN SSIV MÃ HÓA ENZYME STARCH SYNTHASE TĂNG CƢỜNG SINH TỔNG HỢP TINH BỘT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn BỘThạc GIÁO Luận văn sỹ DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ Mậu Hưng Nguyễn CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - - LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN SSIV MÃ HÓA ENZYME STARCH SYNTHASE TĂNG CƢỜNG SINH TỔNG HỢP TINH BỘT Chuyên ngành: Mã số: Sinh học thực nghiệm 60420114 Học viện: Hƣớng dẫn khoa học: Nguyễn Mậu Hƣng TS Phạm Bích Ngọc Hà Nội - 2016 LỜI CAM ĐOAN Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận văn hoàn toàn hoàn thiện quá trình nghiên c ứu khoa học thân hướng dẫn trực tiếp TS Phạm Bích Ngọc v ới cán Phịng Cơng nghệ tế bào thực vật, Viện Công nghệ Sinh học Các số liệu hình ảnh, kết trình bày, luận văn trung thực, không chép tài liệu, công trình nghiên cứu người khác mà không rõ nguồn tham khảo Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan mình trước hội đồng khoa học Hà Nội, tháng năm 2016 Học viên Nguyễn Mậu Hƣng Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến người hướng dẫn, giúp đỡ tận tình để tơi hồn thành luận văn này: TS Phạm Bích Ngọc, Phó trưởng phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật Viện Công nghệ Sinh học, hướng dẫn hỗ trợ tận tình, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt trình thực đề tài PGS.TS Chu Hoàng Hà - Viện trưởng Viện công nghệ sinh học, Viện trưởng Viện Công nghệ sinh học bảo tận tình chuyên môn, theo sát thí nghiệm tơi để có lời khuyên bổ ích kịp thời ThS Lê Thu Ngọc, CN Nguyễn Khắc Hưng, CN Phạm Thanh Tùng giúp đỡ suốt thời gian làm luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến thầy cô giáo Cơ sở đào tạo Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật truyền đạt cho kiến thức quý báu thời gian học tập vừa qua Bằng tình cảm chân thành, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè bên, động viên, giúp đỡ suốt thời gian thực luận văn Hà Nội, tháng năm 2016 Học viên Nguyễn Mậu Hưng Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng MỤC LỤC MỞ ĐẦU 11 Đặt vấn đề 11 Mục đích nghiên cứu 12 Nội dung nghiên cứu 12 Ý nghĩa khoa học 13 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 14 1.1 Tổng quan tinh bột sinh tổng hợp tinh bột 14 1.1.1 Giới thiệu tinh bột 14 1.1.2 Cấu trúc tinh bột 15 1.1.3 SỰ THỦY PHÂN TINH BỘT 16 1.1.4 HÌNH DẠNG TINH BỘT 17 1.1.5 Các loại hạt tinh bột hay gặp 17 1.1.6 Cơ chế sinh tổng hợp tinh bột gen liên quan 18 1.1.7 Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học nhằm cải biến trình trao đổi tinh bột 21 1.2 Cây sắn tình hình sản xuất sắn giới Việt Nam 22 1.3 Rễ tơ ứng dụng nuôi cấy rễ tơ sản xuất protein tái tổ hợp 26 1.4 Giới thiệu Agrobacterium rhizogenes – phƣơng pháp tạo rễ tơ tế bào thực vật 28 1.5 Cơ chế chuyển gen vùng T-DNA vào tế bào thực vật 29 1.6 Nuôi cấy sinh khối rễ tơ 30 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Vật liệu , hóa chất thiết bị 32 2.1.1 Thực vật 32 2.1.2 Chủng khuẩn, vector cặp mồi sử dụng 32 2.1.3 Hóa chất 33 2.1.4 Thiết bị 33 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.2 Phƣơng pháp thu thập mẫu, phân lập, xác định trình tự gen SSIV 34 2.2.1 Tách chiết RNA tổng số từ củ sắn giống KM140 34 2.2.2 Phản ứng RT-PCR 34 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng 2.2.3 Tách dòng sản phẩm vector pENTR™/D-TOPO 36 2.2.4 Kiểm tra khuẩn lạc phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc 37 2.2.5 Tách chiết plasmid 38 2.2.6 Xác định trình tự so sánh trình tự gen thu đƣợc với trình tự tƣơng ứng GenBank 39 2.2.7 Thiết kế vector pK7GWIWG2(II) mang đoạn gen SSIV kỹ thuật Gateway 39 2.2.8 Phƣơng pháp chuyển gen tạo rễ tơ khoai lang nhờ vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes 42 2.2.9 Phƣơng pháp đánh giá mô chuyển gen môi trƣờng chọn lọc 43 2.2.10 Phƣơng pháp xử lí số liệu 43 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Phân lập, giải trình tự gen SSIV mã hóa cho enzyme Starch Synthase sắn 44 3.1.1 Tách chiết RNA tổng số từ củ sắn giống KM140 44 3.1.2 Thiết kế mồi đặc hiệu nhân gen SSIV sắn tổng hợp cDNA 44 3.1.3 Phân lập, tách dịng, giải trình tự gen SSIV sắn 45 3.2 Thiết kế vector chuyển gen thực vật pK7WG2D/SSIV tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes tƣơng ứng 46 3.2.1 Thiết kế vector chuyển gen thực vật pK7WG2D/SSIV kỹ thuật Gateway 46 3.2.2 Tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium mang cấu trúc vector chuyển gen thiết kế 47 3.3 Kết chuyển gen tạo rễ tơ khoai lang mang gen SSIV 48 3.5 Phân tích dịng rễ tơ khoai lang chuyển gen SSIV kỹ thuật PCR 50 3.6 Phân tích chuyển gen SSIV kỹ thuật RT-PCR 51 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 KẾT LUẬN: 55 ĐỀ NGHỊ: 55 Tài Liệu Tham Khảo 56 Phụ Lục: Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng DANH MỤC HÌNH Hình Cấu trúc phân tử amylopectin amylose 15 Hình Quá trình sinh tổng hợp tinh bột enzyme liên quan 19 Hình Cây Sắn 23 Hình Sản lƣợng sắn theo châu lục, năm 2006-2011Error! Bookmark not defined Hình Tỷ lệ sản lƣợng sắn nƣớc giới, 2012Error! Bookmark not defined Hình Vector pK7GWG2D 40 Hình RNA tổng số tách chiết từ củ giống sắn KM140 44 Hình Điện di kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại gen SSIV từ cDNA sắn 45 Hình Colony-PCR chọn lọc dịng khuẩn mang vector pENTR/SSIV 46 Hình 10 Kết colony-PCR sử dụng mồi đặc hiệu SSIV-Frag_F/R kiểm tra sản phẩm cắt plasmid pK7WG2D/SSIV EcoRI 47 Hình 11 Kết điện di colony-PCR dịng khuẩn lạc 48 Hình 12 Hình ảnh mảnh thân mẫu khoai lang in vitro môi trƣờng đồng nuôi cấy sau ngày lây nhiễm A.rhizogenes 49 Hình 13 Hình ảnh mảnh thân mẫu khoai lang in vitro bắt đầu rễ môi trƣờng chọn lọc sau chuyển gen 30 ngày 49 Hình 14 Kết tách chiết DNA tổng số số rễ tơ 50 Hình 15 Sản phẩm PCR nhân gen SSIV từ DNA tổng số tách chiết từ số dòng rễ tơ chuyển gen không chuyển gen 51 Hình 16 Điện di kiểm tra sản phẩm RT-PCR xác định hoạt động gen actin dòng rễ tơ chuyển gen M: thang chuẩn DNA 1kb; - 15: sản phẩm RT-PCR chuyển gen 52 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng Hình 17 Điện di đồ kiểm tra sản phẩm RT-PCR xác định hoạt động gen 52 DANH MỤC BẢNG Bảng Diện tích, suất sản lƣợng sắn giới từ năm 2000-2012 Error! Bookmark not defined Bảng Trình tự cặp mồi sử dụng 32 Bảng Kích thƣớc phân đoạn thu đƣợc cắt plasmid tái tổ hợp pK7GWG2D/SSIV EcoRI 41 Bảng 4: Kết chuyển gen tạo rễ tơ mang cấu trúc gen tăng cƣờng tổng hợp tinh bột SSIV khoai lang 53 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU STT KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT A.tumefaciens Agrobacterium tumefaciens DNA Acid Deoxiribonucleic BA 6-benzyl adenine bp Base pair cDNA Complementary DNA E.coli Escherichia coli EDTA Ethylene Diamine Tetra acetic Acid Etal Đồng tác giả EtBr Ethidium Bromid 10 GFP Green Fluorescent Protein 11 HSPs Heat shock proteins 12 Hyg Hygromycine resistant 13 LB Luria Bertani 14 M Thang Marker chuẩn 15 mRNA RNA thông tin 16 MT Môi trường 17 MS Murashige and Skoog, 1962 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng 18 MT-sHSP Mitochondrial small Heat shock protein 19 MUG 4-methyl-umBelliferyl-β -D-glucoronide 20 µl Micro litte 21 µM Micromolar 22 NAA 1-Naphthaleneacetic acid 23 PCR Polymerase Chain Reaction 24 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 25 RAPD Random Amplified Polymorphic DNA 26 SOD Superoxide dismutase 27 SSIV Starch synthase IV 28 T-DNA Transfer-DNA 29 TAE Tris-acetate –EDTA 30 Ti-plasmid Tumor-Inducing Plasmid 31 TP Transit peptide 32 Vir Virulence 33 WT Dịng khơng chuyển gen Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 10 http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GAGAAATTAACGTTTTAGAGATGAAATTGGCAGAAACTGATGCAAGAATGAAAGTTGCTGCTCAAGAAAA G A A Q E E I N V L E M K L A E T D A R M K V K MeSSiv sequencing G G A Q E E I N V L E M K L A G T D A R M K V A K 780 830 790 800 810 820 840 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GATGCATGTAGAACTCATGGAAGACCAATTAGGAAAACTAAGAAACGAACTGGCTTACAGGGTTGGGAAT M Y R V G H V E L M E D Q L G K L R N E L A N MeSSiv sequencing M Y R V G H V E L E D Q L G K L R N E L A N 850 900 M 860 870 880 890 910 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin CAGAACAAACTTTTGAATGAGGAAGCCCCCTTGATTCAGGACAGCACTATTCAGAACATTAGTGAGGAGC Q N I S E N K L L N E E A P L I Q D S T I Q E MeSSiv sequencing Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng Q N I S E N K L L N E A P L I Q D S T I Q E 920 970 E 930 940 950 960 980 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TCAATTCATTGAGGGCAGAGAATACATCTCTGAGGACTGATATAGAAGCACTTAAGAGGGAGCTTAGTAA L R E L S N S L R A E N T S L R T D I E A L K N MeSSiv sequencing L R E L S N S L R A N T S L R T D I E A L K N 990 1040 E 1000 1010 1020 1030 1050 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TGTCAAGGATACAGATGAGCGTGTTATAACACTGGAGAAAGAATGCATGCAGTTGGAGTCTTCTGTGAAA V E S S V K D T D E R V I T L E K E C M Q L K MeSSiv sequencing V E S S V K D D E R V I T L E K E C M Q L K 1060 1110 T 1070 1080 1090 1120 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 1100 Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng GACTTGGAATCCAAACTGTCAGTTTCTCAGGAAGATGTTTCAAAATTGTCTAGCTTGAAAGTTGAATGTA D L K V E L E S K L S V S Q E D V S K L S S C MeSSiv sequencing D L K V E L E S K S V S Q E D V S K L S S C 1130 1180 L 1140 1150 1160 1170 1190 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin AAGACTTGTGGGAAAAGGTGGGAAGTTTGCAAGCATTGTTAGATAAGGCAACAAAGCAAGCAGATCAGGC K Q A D Q D L W E K V G S L Q A L L D K A T K A MeSSiv sequencing K Q A D Q D L W E K G S L Q A L L D K A T K A 1200 1250 V 1210 1220 1230 1240 1260 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TATTCTAGTGTTGCAGCAAAATCGAGATCTTTGGAAGAAGGTTGATAAATTGGAAGAATCCTTGGAAGAG I E S L E L V L Q Q N R D L W K K V D K L E E MeSSiv sequencing I E S L E L V L Q Q N R D L W K K V E Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn D K L E Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng 1270 1320 1280 1290 1300 1310 1330 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GCCAACGTCTATAAGTTATCGTCAGAAAAGTTACAGCAGTATAATGAGCTAATGCAGCAAAAGATAAAAC A Q Q K I N V Y K L S S E K L Q Q Y N E L M K MeSSiv sequencing A A Q Q K I N I Y K S S E K L Q Q Y N E L M K 1340 1390 L 1350 1360 1370 1380 1400 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TATTGGAGGAACGTCTTCAACAATCTGATGAAGAAATATATTCTTATGTTCAGTTATACCAAGAATCTAT L Y Q E S L E E R L Q Q S D E E I Y S Y V Q L I MeSSiv sequencing .G L Y Q E S L E E R L R S D E E I Y S Y V Q L I 1410 1460 Q 1420 1430 1440 1450 1470 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin ACAGGAATTTCAAGATACACTTAATACTTTGAAAGAAGAAAGCAAGAAAAAGGCACTAGATGAACCTGTA Q L D E P E F Q D T L N T L K E E S V Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn K K K A Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng MeSSiv sequencing Q L D E P E F Q D L N T L K E E S K K K A V 1480 1530 T 1490 1500 1510 1520 1540 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GATGATATGCCCTGGCAATTTTGGAGTCATTTATTGCTTATGATTGATGGTTGGCTTCTTGAGAAGAAGC D L L E K D M P W Q F W S H L L L M I D G W K MeSSiv sequencing D L L E K D M P W F W S H L L L M I D G W K 1550 1600 Q 1560 1570 1580 1590 1610 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TAACACTAGATGATGCAAAACTGTTGAGAGATATGGTATGGAAAAGAGAGAGGCGTATTCATGACATATA L I H D I T L D D A K L L R D M V W K R E R R Y MeSSiv sequencing L I H D I T L D A K L L R D M V W K R E R R Y 1620 1670 D 1630 1640 1650 1680 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 1660 Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin CTTAGAGTGCAAGGAAAAGAATGAGCATGAAGCTGTTTCTATGTTTCTCAAGCTGACATCATCACCAAAA L T S S P E C K E K N E H E A V S M F L K L K MeSSiv sequencing .G L T S S P E C R E N E H E A V S M F L K L K 1690 1740 K 1700 1710 1720 1730 1750 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin AGTCAAGGATTATATGTCGTCCATATTGCAGCGGAGATGGCACCAGTTGCTAAGGTTGGTGGCTTGGGAG S V G G L Q G L Y V V H I A A E M A P V A K G MeSSiv sequencing S V G G L Q G L Y V H I A A E M A P V A K G 1760 1810 V 1770 1780 1790 1800 1820 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin ATGTTGTGACTGGTCTTGGAAAAGCACTCCAAAAGAGAGGACATCTTGTGGAAATTATTCTGCCAAAGTA D I L P K V V T G L G K A L Q K R G H L V E I Y MeSSiv sequencing C D V V T G L G K Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 10 A L Q K R G H http://www.lrc.tnu.edu.vn L V E I Luận văn Thạc sỹ I L P K Nguyễn Mậu Hưng Y 1830 1880 1840 1850 1860 1870 1890 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TGACTGCATGCAATATGATGGTATTGGCAATTTAAGGGCCCTAGATGTGGTGTTGGAATCTTATTTTGAT D E S Y F C M Q Y D G I G N L R A L D V V L D MeSSiv sequencing D E S Y F C M Q Y G I G N L R A L D V V L D 1900 1950 D 1910 1920 1930 1940 1960 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GGAAAATTATACAAAAACGAAGTATGGGTTGGCACCATTGAAGGTCTTCCTGTTTACTTTATTGAGCCTC G Y F I E K L Y K N E V W V G T I E G L P V P MeSSiv sequencing G Y F I E K L K N E V W V G T I E G L P V P 1970 2020 Y 1980 1990 2000 2030 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin ATCACCCCGGCAAGTTCTTTTGGAGAGGGCAGTTCTACGGAGAACATGATGATTTCAAACGCTTTTCATT Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 11 http://www.lrc.tnu.edu.vn 2010 Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng H K R F S H P G K F F W R G Q F Y G E H D D F F MeSSiv sequencing H K R F S H P G K F W R G Q F Y G E H D D F F 2040 2090 F 2050 2060 2070 2080 2100 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TTTCAGCCGTGCTGCACTTGAATTGCTTCTTCAAGCTGGCAAAAAACCAGACATAATTCATTGCCATGAC F I H C H S R A A L E L L L Q A G K K P D I D MeSSiv sequencing F I H C H S R A A E L L L Q A G K K P D I D 2110 2160 L 2120 2130 2140 2150 2170 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TGGCAGACAGCTTTTGTTGCACCACTTTATTGGGATATATACGCCCCAAAAGGATTGAATTCAGCTAGAA W L N S A Q T A F V A P L Y W D I Y A P K G R MeSSiv sequencing W L N S A Q T A F V A P L Y W D I Y A P K G R 2180 2190 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 12 2200 2210 http://www.lrc.tnu.edu.vn 2220 Luận văn Thạc sỹ 2230 Nguyễn Mậu Hưng 2240 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TATGTTTTACCTGTCACAACTTTGAGTACCAGGGGAGTGCACCAGCATCAGAATTGGCATCTTGTGGACT I A S C G C F T C H N F E Y Q G S A P A S E L L MeSSiv sequencing I A S C G C F T C H F E Y Q G S A P A S E L L 2250 2300 N 2260 2270 2280 2290 2310 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TGATGTCCAGCAGCTAAACAGACCAGATAGAATGCAGGACAACTCAGCACATGATAGGATCAATCCTATT D I N P V Q Q L N R P D R M Q D N S A H D R I MeSSiv sequencing D I N P V Q Q L N R P D R M Q D N S A H D R I 2320 2370 2330 2340 2350 2360 2380 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin AAGGGTGCAGTGGTGTTCTCAAACATTGTGACAACAGTATCACCCACCTATGCACAAGAAGTGCGGACTT K Q E V R G A V V F S N I V T T V S P T Y A T MeSSiv sequencing Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 13 http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng K Q E V R G A V V S N I V T T V S P T Y A T 2390 2440 F 2400 2410 2420 2430 2450 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin CTGAGGGCGGAAAAGGTCTCCATTCGACGCTTAACTTTCATGCCAAGAAGTTCATTGGAATCCTAAATGG S G I L N E G G K G L H S T L N F H A K K F I G MeSSiv sequencing S G I L N E G G K G H S T L N F H A K K F I G 2460 2510 L 2470 2480 2490 2500 2520 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TATTGATACTGATGTGTGGAATCCTGCGACTGATACTCTTCTCGAAGTCCAGTACAATGCTAACGATCTT I N A N D D T D V W N P A T D T L L E V Q Y L MeSSiv sequencing I N A N D D T V W N P A T D T L L E V Q Y L 2530 2580 D 2540 2550 2560 2590 | | | | | | | | | | | | | | Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 14 http://www.lrc.tnu.edu.vn 2570 Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng MeSSiv-origin CAAGGAAAAGCAGAAAACAAAATAGCTACAAGGCAGCATCTTGGGTTATCAACTGCAGATGCTAGGCAGC Q A D A R G K A E N K I A T R Q H L G L S T Q MeSSiv sequencing Q A D A R G K A E K I A T R Q H L G L S T Q 2600 2650 N 2610 2620 2630 2640 2660 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin CACTGGTTGGCTGCATAACAAGATTGGTGCCACAGAAAGGTGTACATCTTATTAGACATGCAATATACCG P H A I Y L V G C I T R L V P Q K G V H L I R R MeSSiv sequencing P H A I Y L V G C I R L V P Q K G V H L I R R 2670 2720 T 2680 2690 2700 2710 2730 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TACGCTGGAGTTGGGAGGACAATTTCTACTTCTTGGCTCAAGCCCAGTTGCACATATACAGAGGGAATTT T I Q R E L E L G G Q F L L L G S S P V A H F MeSSiv sequencing T I Q R E L E L G G Q F L L L G S S F Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 15 http://www.lrc.tnu.edu.vn P V A H Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng 2740 2790 2750 2760 2770 2780 2800 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GAGGGTATTGCAAATCACTTTCAGAATCATGAGCACATTCGGCTGGTATTGAAGTATGATGAATCTCTCG E Y D E S G I A N H F Q N H E H I R L V L K L MeSSiv sequencing E Y D E S G I A N F Q N H E H I R L V L K L 2810 2860 H 2820 2830 2840 2850 2870 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin CTCATTCCATTTATGCAGCATCTGACATGTTCATCATCCCATCTATCTTTGAGCCTTGTGGCCTTACACA A C G L T H S I Y A A S D M F I I P S I F E P Q MeSSiv sequencing A C G L T H S I Y A S D M F I I P S I F E P Q 2880 2930 A 2890 2900 2910 2920 2940 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GATGATAGCAATGAGATATGGTTCCATACCCATTGCAAGAAAAACCGGTGGTCTAAATGATAGTGTTTTT M I A M R Y G Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 16 S I P I A R K http://www.lrc.tnu.edu.vn T G G L Luận văn Thạc sỹ N D S V Nguyễn Mậu Hưng F MeSSiv sequencing .G M N D S V I A M R G S I P I A R K T G G L L 2950 3000 Y 2960 2970 2980 2990 3010 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GATGTTGATGATGACACAATTCCTCTTCAGTTTCGAAATGGATATACATTCTTGAATCCTGATGAGCAGG D N P D E V D D D T I P L Q F R N G Y T F L Q MeSSiv sequencing D N P D E V D D D I P L Q F R N G Y T F L Q 3020 3070 T 3030 3040 3050 3060 3080 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin GAGTGAATAGTGCTTTAGAACGTGCATTTAACCATTATAGAAACGATCCTGAGAGCTGGCAGCAGCTTGT G W Q Q L V N S A L E R A F N H Y R N D P E S V MeSSiv sequencing G G W Q Q L V N S L E R A F N H Y R N D P E S V 3090 3140 A 3100 3110 3120 3150 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 17 http://www.lrc.tnu.edu.vn 3130 Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TCAAAGGGACATGGACATAGATTTTAGTTGGGAATCTTCAGCATCACAGTATGAGGAGCTCTACTCAAAA Q L Y S R D M D I D F S W E S S A S Q Y E E K MeSSiv sequencing .A .A Q L Y S K D M N I F S W E S S A S Q Y E E K 3160 3210 D 3170 3180 3190 3200 3220 | | | | | | | | | | | | | | MeSSiv-origin TCAGTGGCCAGAGCAAGAGCGGCAGCAAGTAGGTCTTAATTATGGTAAATGGCATTTTCATGGAAAGCCA S V A R A R A A A S R S * MeSSiv sequencing S V A R A R A A A S R S * | MeSSiv-origin AGGATCT MeSSiv sequencing So sánh trình tự gen SSIV phân lập với gen SSIV phytozome Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 18 http://www.lrc.tnu.edu.vn Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Mậu Hưng Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 19 http://www.lrc.tnu.edu.vn ... SSIV mã hóa enzyme starch synthase tăng cường sinh tổng hợp tinh bột? ?? Mục đích nghiên cứu Mục tiêu tổng quát: Nghiên cứu phân lập thiết kế vector chuyển gen SSIV mã hóa enzyme starch synthase, ... gen Starch Synthase IV Đây gen định lớn đến sinh tổng hợp cấu trúc tinh bột Để có đƣợc Starch Synthase IV nhƣ đánh giá gen tiến hành: ? ?Nghiên cứu phân lập thiết kế vector chuyển gen SSIV mã hóa. .. THẠC SĨ SINH HỌC NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN SSIV MÃ HÓA ENZYME STARCH SYNTHASE TĂNG CƢỜNG SINH TỔNG HỢP TINH BỘT Chuyên ngành: Mã số: Sinh học thực nghiệm 60420114 Học viện: